家养野猪自然感染猪圆环病毒2型的病理学观察

经PCR检测南京某养殖场送检的表现为多系统衰竭综合征的家养野猪病原为猪圆环病毒2型(PCV2)。采用常规石蜡切片法和免疫组织化学法对患病仔猪的病理组织学变化特点及PCV2抗原在淋巴结内的分布进行了研究。结果显示,剖检病死仔猪病变主要表现为全身淋巴结肿大和间质性肺炎。组织病理学变化主要表现为淋巴结、脾和扁桃体等免疫器官淋巴滤泡萎缩,淋巴细胞数量减少,有大量巨噬细胞浸润及多核巨细胞;非淋巴组织病变主要为肺脏呈典型的间质性肺炎,肝脏局灶性坏死及淋巴细胞浸润;肺脏和肝脏病灶内也可见少量多核巨细胞。PCV2主要分布于淋巴组织内单核巨噬细胞、支气管黏膜上皮、肺泡壁Ⅱ型上皮细胞内,肾小球内也可见少量分布。     

广东地区新生仔猪先天性震颤猪群中PCV3感染情况的调查

对广东省不同地区新生仔猪先天性震颤猪群中PCV3的流行病学情况进行调查。采集的病料样品,通过常规PCR进行PCV3检测与全基因扩增,分析其全基因的遗传进化关系。将获得的16株PCV3毒株核酸序列与其他环状病毒参考毒株对全基因组和Cap基因进行遗传变异分析,结果显示,新生仔猪的先天性震颤猪群中PCV3样本总阳性率高达58.2%。16株PCV3毒株之间全基因核苷酸序列同源性为99.5%~100%,与美洲代表毒株PCV3-US/MO2015全基因核苷酸序列同源性在98.8%~99.1%之间;16株PCV3毒株之间Cap基因的核苷酸序列同源性为99.7%~100%,与国内外参考毒株的核苷酸同源性为99.1%~100%。遗传进化分析显示,16株PCV3毒株都属于PCV3a分支。PCV3在我国广东省新生仔猪先天性震颤猪群中广泛存在。     

鸭呼肠孤病毒自然感染肉鸭的病毒分布与病理学观察

为了解2006-2010年湖北省地区暴发的鸭呼肠孤病毒感染的病理特征,地域性特点,运用病理剖检、常规石蜡切片及HE染色、免疫组织化学等技术对鸭呼肠孤病毒自然感染病鸭进行研究。剖检眼观病变表现为肝、脾表面出现大量黄白色病灶,组织学病变为肝、脾出血、坏死与肉芽肿形成,免疫组织化学检测结果显示所感染病鸭脾均出现特异性阳性信号,而肝和法氏囊仅部分出现阳性信号。由以上结果推测可知湖北省鸭呼肠孤病毒感染特征表现为肝脾坏死。     

TaqMan-MGB多重荧光定量PCR检测PCV2、PCV3和PCV4方法的建立和应用

为建立一种可同时鉴别致病性猪圆环病毒(PCV)不同基因型的检测方法,本试验针对PCV2、PCV3和PCV4的ORF2基因保守区域设计引物和探针,将人工合成目的基因与质粒连接,构建阳性质粒PCV2-ORF2、PCV3-ORF2和PCV4-ORF2。通过优化引物浓度、探针浓度、退火温度等参数,建立PCV2、PCV3和PCV4 TaqMan-MGB多重荧光定量PCR检测方法,并验证该方法的特异性、敏感性和重复性。应用建立的方法对38份临床样品进行应用检测,对24个养猪场(户)进行流行病学调查。结果显示,建立的方法能特异性区分PCV2、PCV3和PCV4,且与其他常见猪病病原不发生交叉反应;对PCV2、PCV3和PCV4的最低检出浓度分别为1.56×10、1.28×10和1.76×10拷贝/μL;批内和批间变异系数均小于2%,重复性好;38份临床样品中PCV2、PCV3和PCV4阳性样品分别为17、3和1份,从24个养猪场(户)采集的689份样品中PCV2、PCV3和PCV4阳性率分别为33.33%、12.50%和8.33%。结果表明,本试验建立的PCV2、PCV3和PCV4 TaqMan-M...     

PCV2感染对仔猪NO-NOS系统的动态影响

将19头PCV2和PRRSV血清抗体阴性的普通断奶仔猪分为对照组(4头)和攻毒组(15头),攻毒组每头仔猪滴鼻接种PCV2病毒悬液4mL(5×105 TCID50/mL)并用KLH刺激,分别在攻毒后14、21、35d各扑杀5头仔猪采集血清和脾脏、淋巴结、胸腺(对照组4头在攻毒当天扑杀)。检测各种组织中NO、TNOS和iNOS的含量。结果显示,攻毒猪各组织中NO含量均在攻毒后14d显著升高(P<0.05),然后缓慢下降;血清和3种免疫器官中NOS(包括TNOS和iNOS)活性的变化趋势比较一致,均表现出先升高然后再逐渐降低的特点。此外,iNOS活性变化与其相应的组织中NO含量呈显著正相关(P<0.01)。结果表明,PCV2在感染早期(1～14d)可激活仔猪多种组织中NO-NOS系统,中后期逐渐恢复,这种变化与PCV2所致的组织损伤密切相关,因此,NO-NOS系统可能是PCV2相关疾病发生发展的重要信号。     

PCV2感染对仔猪抗氧化功能的影响

动物体内抗氧化能力的改变可引起包括组织损伤在内的一系列变化。为了解猪圆环病毒2型(porcine circovirus 2,PCV2)对仔猪组织损伤的机理,测定了PCV2对断奶仔猪抗氧化能力的影响。选用19头PCV2阴性的断奶仔猪,随机分成4组,其中对照组4头,其余3组(每组5头)接种PCV2,并分别在接种后的14、21、35天扑杀,取血样、胸腺和腹股沟淋巴结组织。用酶法测定还原型谷胱甘肽(GSH)的含量,比色微板法测定谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-PX)的活性,黄嘌呤氧化酶法测定超氧化物歧化酶(SOD)的活力,硫代巴比妥酸(TBA)法测定丙二醛(MDA)的含量。结果显示:试验猪血清中,GSH含量第21天降至最低,GSH-PX活力第21天显著升高且达到最高值(P<0.05),总超氧化物歧化酶(T-SOD)和铜锌超氧化物歧化酶(Cu-ZnSOD)的活力均在第14天最强,且T-SOD活力在第14天显著高于对照猪。胸腺和腹股沟淋巴结中,GSH含量第21天显著升高(P<0.05),且达到最高值;SOD活力试验组均比对照组高,且呈上升趋势;MDA含量均在第14天升高,且胸腺中MDA含量在第14天显著升高(P<0.05)。结果表明:谷胱甘肽抗氧化系统在PCV2感染后第21天发挥最大的抗氧化作用,SOD系统在PCV2感染后第14天发挥最大的抗氧化作用。仔猪抗氧化能力的变化是PCV2引起组织损伤的重要原因。     

类猪圆环病毒因子P1在自然感染仔猪体内的组织分布

选用3头自然感染仔猪和1头阴性对照猪,剖杀后采集心脏、肝脏、脾脏、肺脏、肾脏、胰脏、脑、空肠、扁桃体、胸腺、淋巴结、膀胱、性腺等组织,用荧光定量PCR方法检测病毒在组织中的分布及病毒载量.结果显示,类猪圆环病毒因子P1分布在仔猪的心脏、肝脏、肺脏、胰脏、脑和膀胱等组织,病毒载量以胰脏、脑和膀胱为最高,可达105拷贝/g以上;对照猪脏器中没有检测到病毒核酸.该研究为P1的诊断及致病机制奠定了基础.     

猪圆环病毒、猪伪狂犬及仔猪副伤寒混合感染的病例探析

目的:探讨对猪圆环病毒、猪伪狂犬及仔猪副伤寒混合感染的诊断与治疗方法及效果.方法:对本市某地区的养猪场内出现的猪圆环病毒、猪伪狂犬及仔猪副伤寒混合感染的情况进行了回顾性分析.结果:通过对症治疗和综合性治疗,全猪场内除治疗前死亡的猪只外,剩下的发病猪只均未出现死亡现象,且病情均得到了有效控制.结论:通过实施病理解剖及实验室确诊,明确猪只的疾病类型,并对其实施针对性的治疗措施,能够有效控制猪圆环病毒、猪伪狂犬及仔猪副伤寒混合感染.     

PCV2和PCV3双重纳米PCR方法的建立及初步应用

本研究旨在建立一种同时检测猪圆环病毒2型（PCV2）和猪圆环病毒3型（PCV3）的双重纳米PCR（nano-dPCR）方法,同时应用该方法对PCV2和PCV3进行检测。参考GenBank中登录的PCV2和PCV3型基因序列分别设计特异性引物,对nano-dPCR的反应条件进行优化;同时考察所建立的nano-dPCR检测方法的特异性和敏感性。结果显示,所建方法的特异性和敏感性良好,对PCV2和PCV3两种病毒的最低核酸检测量分别为93.2和91.6拷贝/μL,其敏感性比普通PCR高100倍。应用该方法对送检的265份临床样本进行检测,结果显示,PCV2和PCV3在猪群中存在普遍感染,PCV3和PCV2的阳性率分别为16.6%和14.7%,混合感染阳性率为6.8%。临床样品的检测结果表明,本试验建立的nano-dPCR方法为PCV2和PCV3早期感染进行快速、敏感鉴别诊断提供了新方法。     

PCV3和PCV2双重PCR鉴别诊断方法的建立及应用

本研究根据GenBank中报道的PCV2和PCV3毒株全基因组序列,设计两对特异性引物,建立了一种多重PCR鉴别诊断方法,两种病毒的预期扩增片段分别大小分别为1 007 bp和505 bp。通过对扩增条件的优化,获得最佳的反应体系为25μL体系,最佳退火温度为56℃。该鉴别方法可以同时扩增PCV3和PCV2的特异性片段,而猪瘟病毒(CSFV)、伪狂犬病病毒(PRV)、猪繁殖障碍与呼吸综合征病毒(PRRSV)、猪细小病毒(PPV)、猪乙型脑炎病毒(JEV)、轮状病毒(RV)、猪流行性腹泻病毒(PEDV)和猪德尔塔冠状病毒的基因组及阴性对照均未扩增出任何条带。该方法对PCV3和PCV2的最低检出量均为10 ng/μL。对采自湖北省内规模化猪场的260份淋巴结样品检测。结果显示,PCV3阳性率为16.9%(44/260),PCV2阳性率为46.5%(121/260),PCV3和PCV2混合感染率为4.6%(12/260),双重PCR检测与测序分析的符合率为100%。结果表明,本研究建立了一种简便、灵敏、稳定可靠且特异性强的双重PCR鉴别诊断方法,可为临床样品中PCV3和PCV2的快速鉴别诊断及流行病学研究提供技术支持。     

圆环病毒2型人工感染猪的排毒情况及体内分布规律的初步研究

猪圆环病毒2型（PCV2）是引起断奶仔猪多系统衰竭综合症（PMWS）的重要病原,它给养猪业带来巨大的经济损失。本研究利用PCR及荧光定量PCR检测猪人工感染猪圆环病毒2型后的排毒及体内分布规律。结果表明,感染猪可以通过呼吸道和消化道进行排毒,而且病毒持续存在;PCV2病毒主要存在于病猪的淋巴结、肾脏、肺脏中,在肝脏和脾脏中也少量存在。     

PCV2对体外培养仔猪脾细胞分泌细胞因子的动态影响

为进一步了解猪圆环病毒2型(PCV2)引起断奶仔猪多系统衰竭综合征的机理,选取5头35日龄PCV2血清抗体阴性的断奶仔猪,无菌取脾脏制成单个细胞悬液,体外培养,分PCV2感染组与对照组。分别在培养后0 h、6 h、12 h、24 h收获细胞培养上清,用猪特异性ELISA试剂盒测定上清中白细胞介素-1β(IL-1β)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素6(IL-6)和白细胞介素10(IL-10)的含量。结果显示:病毒组IL-1β和IL-6在不同时间点的含量变化均不显著(P>0.05),IL-1β在6 h、24 h略高于对照组,12 h则低于对照组;IL-6除在6 h高于对照组外,其余时间点均低于对照组;病毒组TNF-α和IL-10的含量在6 h、12 h、24 h均高于对照组,且TNF-α在6 h和24 h极显著升高(P<0.01),而IL-10在12 h显著高于对照组(P<0.05)。上述结果表明:PCV2能影响体外培养的仔猪脾细胞某些细胞因子的分泌,而且可能通过TNF-α的高表达促使机体产生全身炎症反应综合征甚至多系统衰竭,而通过IL-10的高表达促使机体产生免疫抑制。     

猪圆环病毒2型与3型混合感染的PCR检测

本文对一例临床中表现为母猪繁殖障碍、仔猪消瘦死亡、育肥猪渐进性消瘦等主要临床特征的疑似猪圆环病毒感染病例进行了实验室PCR检测,确诊致病原为猪圆环病毒2型与3型混合感染,现介绍如下以供参考。     

免疫组化法检测猪圆环病毒2型在人工感染猪体内的分布

将猪圆环病毒2型（PCV2）BF株经滴鼻接种28日龄健康普通仔猪,于接种后不同时间剖杀,采集相关的器官组织制备组织切片,使用免疫组化方法检测病毒在猪体内的分布。结果显示,淋巴结、脾脏、扁桃体等淋巴组织均出现阳性信号,心、肝、肺、肾、胃、十二指肠、大脑及小脑同样存在阳性细胞,其他组织呈阴性反应。阳性信号主要位于感染细胞的胞质中,偶尔出现在细胞核内。结果表明,PCV2确已造成猪体组织感染。     

海藻多糖可溶性粉对感染PCV2仔猪细胞因子含量的调节作用

为探索海藻多糖可溶性粉对自然感染PCV2仔猪血清中细胞因子的调节作用,随机选取80头35-50日龄自然感染PCV2的仔猪,设海藻多糖可溶性粉高(400 mg/kg)、中(200 mg/kg)、低(100 mg/kg)剂量组及黄芪多糖对照组,连续用药7 d;另设阳性对照组和无PCV2感染阴性对照组,每组20头。从给药开始连续14 d观察仔猪临床症状,分别于用药前、用药后第7、14天,每组随机选取10头前腔静脉采血,检测血清中IL-2、IL-6、TNF-α、IFN-γ及IgG水平。结果显示,相比于用药前,在用药后第7、14天,各用药组临床症状改善明显;血清中IL-2、IL-6、IFN-γ、TNF-α、IgG含量有不同程度升高。结果表明,给予不同剂量的海藻多糖可溶性粉7 d,可提高自然感染PCV2的仔猪免疫能力,且临床推荐给药剂量为200 mg/kg饲料,连用7 d。     

仔猪人工感染猪圆环病毒2型后的病理学特征

自Harding首次报道1991年加拿大发现断奶仔猪多系统衰弱综合征（post-weaning multisystemic wasting syndrome，PMWS）以来，猪圆环病毒2型（porcine cirovirus type 2，PCV2）感染及其所致疾病已遍及世界各地，成为危害世界养猪生产的一大疫病。PCV2是引起PMWS的主要病原体。PMWS主要感染5～12周龄断奶仔猪，引起的临床症状包括体重下降、进行性消瘦、呼吸困难、贫血、腹泻和黄疸；组织病变包括淋巴结病，肉芽肿性间质性肺炎，肝炎和间质性肾炎，其发病率在5％～30％不等，死亡率可高达50％炉此外，由于PCV2感染引起的免疫抑制可造成二次感染，更增加了疾病的严重程度。     

猪圆环病毒3型检测方法及感染现状概述

文章概述猪圆环病毒3型(PCV3)各种分子生物学和免疫学等实验室诊断方法的最新研究进展,并概述了我国不同地区PCV3的感染现状,对提高PCV3的综合防控能力具有一定的参考价值。     

母源抗体对感染PCV2仔猪体内病毒变化和免疫反应的影响

将16头断奶仔猪随机分成两大组即直接感染组和间接感染组,再将每大组用ELISA测抗体水平并排序分成两小组,即高抗体水平的4头为高起始抗体组,低抗体4头为低起始抗体组。直接感染组注射PCV2攻毒后再注射钥匙孔血蓝蛋白(KLH)刺激,间接感染组不注射与直接感染组混养。Q-PCR检测血清中病毒拷贝数,血常规检测全血中淋巴细胞数,定时称量体质量,屠宰后采样制作HE染色病理切片。结果,HE染色病理切片和临床分析显示感染猪只表现断奶仔猪多系统衰竭综合征(PMWS)症状;直接感染组和间接感染组攻毒后抗体水平持续降低,且分别在攻毒后20、30d降到相对最低值。直接感染组在攻毒后4d检测到抗原,攻毒后7d低起始抗体组病毒拷贝数显著高于高起始抗体组,间接感染组分别在攻毒后4、7d检测出抗原,攻毒后24、29d低起始抗体组抗原显著高于高起始抗体组;两组中外周血淋巴细胞数量在攻毒后减少,攻毒期间两大组中低起始抗体组和高起始抗体组体质量无差异。结果表明,PCV2+KLH能够复制出PMWS症状;PCV2母源抗体的半衰期为15d左右;低起始抗体组更容易感染病毒;攻毒后起始母源抗体的高低对断奶仔猪增重差异不明显。     

山东省某猪场仔猪多重混合感染的诊断

2018年3月,山东省青岛市某规模化猪场暴发疫情,每天死亡100余头仔猪。70~80日龄仔猪临床表现为发热、喘气、关节肿大,30~40日龄发病仔猪主要表现为水样腹泻。为确诊引起此次疫情的病原,分析病例发病情况,结合临床症状、病理剖检和实验室诊断,最终判定为猪繁殖与呼吸综合征病毒、猪圆环病毒2型及猪流行性腹泻病毒的混合感染,且疑似存在猪链球菌和支气管败血波氏杆菌的混合感染。鉴于猪群存在多种病毒和细菌的混合感染,需要采取科学有效的综合防控措施,定期监测猪群疫病的抗体水平,及时调整免疫程序,防止疫病暴发。     

PCV3对仔猪生长相关激素及其功能基因表达的影响

【目的】研究猪圆环病毒3(Porcine circovirus 3,PCV3)对仔猪生长相关激素及其功能基因表达的影响,探索PCV3导致仔猪消瘦的机制。【方法】以8头23日龄的健康断奶仔猪为研究对象,随机均分为PCV3感染组(感染组)、DMEM组,分别从颈部注射3 mL PCV3病毒液(10⁹拷贝/mL)和3 mL DMEM,并于注射前(0 d)及注射后3、7、14、21 d称量仔猪体重,观察其临床表现,采集各组仔猪血清、口腔拭子、鼻腔拭子和肛拭子,采用实时荧光定量PCR检测各样品中PCV3病毒载量;ELISA法测定各组3、7、14、21 d仔猪血清中的三碘甲状腺原氨酸(triiodothyronine, T₃)、甲状腺素4(thyroxine, T₄)的浓度;实时荧光定量PCR测定背最长肌、腿肌、脾脏、肝脏组织中生长激素受体(growth hormone receptor, GHR)、胰岛素样生长因子1(insulin-like growth factor-1,IGF-1)、胰岛素样生长因子1受体(insulin-li...