仔猪副伤寒血清抗体水平与其保护力的相关性研究

用已经建立的检测仔猪副伤寒血清抗体的Dot—PPA—ELISA，对不同仔猪副伤寒抗体水平试验组14头仔猪和对照组4头仔猪进行了血清抗体效价测定，并以沙门菌强毒攻击受试猪，测定血清抗体效价与保护力的关系。试验结果表明，以Dot—PPA—ELISA检测的仔猪副伤寒血清抗体几何平均效价不低于28^8.2时，85．7％的猪能够抵抗沙门菌强毒的攻击。试验初步确定以Dot—PPA—ELISA进行猪群免疫监测时，血清抗体的几何平均效价2^8.0。为仔猪副伤寒的保护临界标准，该标准的确定为集约化猪场用Dot—PPA—ELISA检测仔猪副伤寒血清抗体，进行仔猪副伤寒的诊断、免疫监测及流行病学调查提供了科学依据。     

牛副伤寒弱毒菌苗与布病猪型二号菌苗联合对牦牛气雾免疫试验

牛副伤寒弱毒菌苗(以下简称牛副伤寒苗)是黄南州牧科所选用抗原性良好的病牛沙氏杆菌株(编号S—7301),用醋酸铊、海鸥洗净剂和提高培养温度等方法,经过1,020代培育成功的。经实验室和牧区试验结果表明,细菌基本上保持原有的菌体形态、培养特性和生化特性,其毒力下降了百分之九十九以上,抗原性尚好。室内气雾免疫牦牛222头,经一个月免疫期,功击强毒结果,免疫牦牛保护4/4,经10个月免疫期,效力仍保护4/4,对照牛死亡4/4。     

牦牛布氏菌MB_(32)号弱毒菌苗的研究——Ⅰ.MB_(32)号的菌种特性

我省牦牛布氏杆菌病(以下简称布病)流行相当普遍,每年造成的经济损失是严重的,而对牦牛布病的预防,目前尚无适用的菌苗。为了解决牦牛布氏菌病的免疫问题,我们用由我省牦牛体中分得的强毒菌进行了培育,并对其低代菌株(MB3)进行了一系列试验,证明其效力尚好,一年免疫期有效。但菌种毒力稍强,通过牦牛、绵羊、豚鼠数代后其毒力基本稳定。鉴于菌种残余毒力稍强时,作气雾免疫,对人体有影响。因此我们在此基础上,通过继续培育选用高代菌种,为与低代菌株区别定名为MB32号(以下简称本菌)。试验表明,这株菌种毒力相当低,而且稳定性良好,对实验动物有较好的免疫力。现将试验情况简结于后:     

猪流行性腹泻和猪传染性胃肠炎弱毒二联疫苗研究

用猪流行性腹泻（PED）弱毒疫苗株PEDV－G1P83和猪传染性胃肠炎（GE）弱毒疫苗株TGEV－AG1制成PED和TGE弱毒二联疫苗,并进行了保存期试验、安全效力、免疫期试验和区域试验。结果表明,试验疫苗在－20℃保存4个月,经4月保存的疫苗免疫效力未见下降。4℃保存48h对疫苗病毒的毒价没有明显影响。用该毒二联疫苗按程序免疫妊娠母猪,对妊娠母猪安全,其仔猪获得了良好的被动免疫。其对PEDV强毒、TGEV强毒和该二种强毒混合功击的免疫效力分别达90．48％、93．75％和87．5％。用二联弱毒疫苗免疫8－10日龄的哺乳仔猪证明安全,28日龄时（25日龄断奶）分别用PEDV、TGEV和两种强毒混合攻毒免疫效力分别为100％、90．9％和100％。8－10日龄免疫仔猪生长到4月龄时用TGEV和PEDV强毒攻击,免疫效力分别为100％和73．3％。结果表明,该弱毒二联疫苗能够安全地对妊娠母猪和哺乳仔猪进行免疫,免疫后能有效地保护初生仔猪、断奶猪和肥育猪抵抗TGEV和PEDV强毒的攻击。该弱毒二联疫苗在区域试验中能显著降低猪病毒性腹泻的发病率和死亡率。取得良好的效果。     

CA菌苗免疫猪对鸡的安全性试验

A 型(群)猪肺疫 CA 株弱毒菌苗从1984至1987年在广东省17个县(市)以及湖北省5个县(区)共注射各类猪只196.77万头,表现安全有效。其菌种是哈尔滨兽医研究所的禽霍乱731菌株。由于731菌苗注射鸡以后出现过不安全的事故,究竟用731菌株制造的CA 株弱毒菌苗注射猪以后会不会对鸡不安全呢?我们进行了本试验。结果表明,CA菌苗在猪体连传6代,毒力无返强现象。免疫猪经48小时后体内已分离不到本菌。敏感鸡与大剂量接种 CA 菌苗的猪同饮同食同居34～45天不发病,攻毒无保护。试验证明生产上用 CA 菌苗免疫猪,对鸡是安全的。     

猪链球菌 ST171弱毒冻干苗的研究

猪溶血性链球菌“斗门”野毒株用高温诱变法,于1978年5月育成了一株毒力弱而稳定、免疫原性良好的猪链球菌 ST171弱毒菌种。由本菌种制成的冻干苗,用免疫剂量0.12～0.24亿活菌肌注仔猪16头,用0.36～0.48亿活菌灌服仔猪16头,14天后连同对照猪攻击广西株、安徽株和四川株强毒,试验组全部保护,肌注对照组6头全死;灌服对照组3头,生存1头。免疫保护率100%。用26～131万活菌肌注仔猪20头,攻皖、桂、川强毒同上,试验组生存18头,对照组13头,生存1头,免疫保护率为89.2%。毒力试验用129～1050亿活菌肌注或皮下注射仔猪54头,另灌服1575亿活菌3头,观察14～21天,全部健活。除少数暂短微热或减食,肌注组部分跛行外,均无其他不正常反应。1978～1980年间,在广东省28个县(市)内疫区试用,共接种猪101万多头(冻干苗占648,523头),用苗一周左右疫情停止,效果良好。据756,476头区域试验猪的统计,反应率平均为0.375%,死亡率平均为0.000397%。本报告对菌种的特性、冻干苗的制造、小动物检验和区域试验等作了简述。     

奶牛副伤寒免疫防治的研究

用从奶牛副伤寒疫区分离到的鼠伤寒沙门氏菌株配以标准菌株，制备鼠伤寒沙门氏菌菌苗，在疫区给临产母牛和青年育成牛免疫接种，共免疫牛１０５０头，均无不良反应，通过攻毒保护试验，接种菌苗的犊牛可抵抗３００亿强毒活菌的攻击，免疫牛血清中抗鼠伤寒沙门氏菌体的效价达１：２５６。同时，利用自制的抗鼠伤寒沙门氏菌高免血清对未进行免疫接种的牛进行紧急预防和治疗，效果显著，由此表明，利用当地菌株制备菌苗，可有效地预防奶     

猪溶血性链球菌弱毒菌苗的研究

用递增培养温度连续继代法从二株猪溶血性链球菌菌种中培养出一株(Ft117)毒力弱而稳定、免疫原性良好的弱毒菌株.用以制成弱毒冻干活菌苗,在三个省的49个流行疫区进行了试用,获得良好的预防效果.本文报道菌苗的安全性、稳定性、免疫力、免疫期和保存期等试验,以及区域试验的免疫效果.     

牦牛副伤寒弱毒菌苗的试产及区域试验

在牦牛副伤寒弱毒菌苗的究制中,我们采用醋酸铊肉汤培养传代致弱的方法,选育出1株(STM8002—550)毒力弱而稳定、免疫原性良好的菌种。用此菌株试制的冻干活菌苗,经在山丹军马场、肃南县皇城区和甘南州河曲马场免疫牦牛7945头,与未免疫牛群相比较,副伤寒发病率和致死率分别下降91.14和92.5％,免疫期达1年以     

猪伪狂犬病活疫苗(Bartha-K61株)免疫产生期和免疫持续期的研究

为评价猪伪狂犬病活疫苗(Bartha-K61株,传代细胞源)的免疫保护效力,本研究对3批疫苗分别进行免疫产生期试验和免疫持续期试验。免疫产生期试验中将3批疫苗以单剂量免疫仔猪,在免疫后2、3、4、5、6 d连同对照组分别攻击伪狂犬病强毒,结果表明猪伪狂犬病活疫苗免后5 d即可产生坚强的免疫保护力。免疫持续期试验中将3批疫苗以单剂量免疫母猪,免疫后12、14个月连同对照猪分别攻击伪狂犬病强毒,结果显示免疫母猪及其所产仔猪均健康存活,表明猪伪狂犬病活疫苗(Bartha-K61株)的免疫持续期可长达14个月。     

预防仔猪黄、白痢双价工程菌苗MM-3的免疫效果观察

本文报告了用遗传工程技术构建、能合成粘附素K88与无毒肠毒素LT-B两种抗原的菌苗MM-3进行免疫试验的结果。菌苗无毒安全,超量使用亦未见到副作用。免疾后能引起机体的应答反应,母猪血及初乳中均可测得抗体,初乳中抗体效价较血中高。在用强毒的肠毒素性大肠杆菌人工攻击仔猪的试验中,对照组死亡率为74.2%,口服免疫组与注射免疫组死亡率分别为1.0%与6.5%。三年内在多个猪场、对上万头仔猪进行菌苗效果观察,未免疾对照组腹泻发病率为55—80%,免疫后降至10—25%,未免疫对照组腹泻死亡率为7—40%,免疫后仅为1—3%。试验观察至仔猪生后30日,菌苗不仅可预防黄痢、亦能预防白痢发生。     

用大肠艾希氏菌多价菌苗免疫妊娠母猪预防仔猪黄痢

妊娠母猪于产前21～30天和9～15天分别口服多价灭活菌苗235ml,同时肌肉接种注射用菌苗5ml.所产46头仔猪中的40头经强毒攻击,保护率为97.5%.妊赈母猪于产前9～13天只用注射菌苗进行一次交巢穴位接种,所产21头中的13头经强毒攻击,保护率为90%.未经免疫的对照母猪共产仔12头,经强毒发击,都在8～21小时内发生腹泻或死亡。未经免疫的7头对照母猪共产仔62头,观察自然感染情况,有23头发生腹泻.     

母源抗体对腺病毒/甲病毒复制子嵌合载体猪瘟疫苗rAdV-SFV-E2免疫效力的影响

本实验室前期构建了具有标记特征的腺病毒/甲病毒复制子嵌合载体猪瘟疫苗rAdV-SFV-E2,效力评价结果表明该嵌合疫苗的免疫原性与C株相当,并且能够完全提供对猪瘟病毒(CSFV)强毒石门株的攻毒保护。为进一步确定该疫苗的免疫效力是否受其母源抗体(MDA)的干扰及制定合理有效的免疫程序,本研究将rAdV-SFV-E2疫苗株免疫妊娠期的母猪后检测其抗体诱导水平,然后将该疫苗株免疫具有其母源抗体的30日龄新生仔猪及无母源抗体仔猪(n=4),攻毒后,监测所有仔猪的抗体水平、临床症状、病毒血症、病理学等。结果显示,有无母源抗体的仔猪均能够产生高水平的特异性E2抗体及抗CSFV的中和抗体,而且攻毒后未出现猪瘟特异性临床症状,包括发热、食欲减退、腹泻及死亡等;对照组仔猪均出现了明显的临床症状,其死亡率为100%。本研究证明rAdV-SFV-E2疫苗的免疫效力未受其母源抗体的显著干扰,免疫30日龄的仔猪后能够完全抵抗致死性CSFV强毒石门株的攻击。     

牦牛副伤寒突变型菌株NG／UV—8的培育及免疫原性测定

应用诱变剂亚硝基胍(NG)和紫外线(UV)交替诱变处理法,诱变牛病沙门氏菌S.301株,筛选出一株突变型菌株—NG/UV-8。该菌株减毒情况良好(比母源S.301株毒力降低10～15倍),经培养基传10代、20代,豚鼠传5代后,其毒力、生理生化性质、抗原特性等遗传性状一直保持稳定。用该菌1.15亿,0.58亿个菌免疫小白鼠,能100％的抵抗2个MLD母源S.301株的攻击,用5.76亿个菌免疫豚鼠能75％的保护2个MLD母源S.301株的攻击。该菌株有希望成为预防牦牛副伤寒菌苗的候选菌苗株,有在本动物(牦牛)进一步作免疫保护试验的价值。     

新生仔猪哺乳前接种猪瘟和猪丹毒二联苗的免疫试验

新生仔猪哺乳前接种猪瘟免化弱毒疫苗,饲养5个月后,经中和抗体测定、石门系猪瘟强毒攻击及同居感染试验,均可获得较为满意的免疫效果。据此,我们曾试用猪丹毒弱毒菌苗及猪瘟和猪丹毒二联苗接种新生仔猪,间隔半小时、3小时分别令其吸吮初乳,饲养5个月,应用猪丹毒强毒攻击,结果其保护率分别为100％及60％。为进一步探明经猪瘟和猪丹毒二联苗免疫后试验猪的免疫期,特进行本试验。     

牦牛布氏菌MB32号弱毒菌苗的研究——Ⅱ、MB32号菌苗对牦牛的免疫效力试验

鉴于MB32号弱毒菌株毒力相当低,而且稳定性良好,对于豚鼠有较好的免疫力,为了明确其对牦牛的免疫性能,进行了对一岁牦牛和成年牛的免疫效力和免疫期试验,现将试验情况简述于后。一、MB32号菌苗对一岁牦牛的免疫效力试验     

牛源荚膜A型多杀性巴氏杆菌疫苗候选株的筛选及鉴定

为了筛选生长快、毒力强、免疫原性好、副反应小的牛源荚膜A型多杀性巴氏杆菌(Pasteurella multocida,Pm)灭活疫苗菌株,本试验选取6株来自不同地区致犊牛肺炎死亡的牛源荚膜A型多杀性巴氏杆菌分离株,测定了培养基生长曲线、小鼠毒力、菌体脂多糖(LPS)含量及各菌株灭活菌苗免疫小鼠和家兔后的抗体效价,并进行了攻毒保护试验。结果显示,分离株Pm2、Pm3、Pm5生长速度较快、毒力较强、LPS含量较多,均含有与毒力和免疫相关的ptfA和fimA基因;免疫小鼠及家兔未发现明显不良反应,在二免后14d血清抗体达1∶64~1∶128,强毒攻毒后全部存活,而PBS对照组全部死亡。本试验结果表明,Pm2、Pm3、Pm5均可作为多杀性巴氏杆菌灭活菌苗的候选菌株,其中Pm3作为首选株。     

母源抗体对仔猪接种猪丹毒菌苗后产生免疫力的影响

接种猪丹毒菌苗的母猪5头,经3～5个月后,用猪丹毒菌血清培养凝集试验,其血清中可测到猪丹毒的特异性抗体,但中和试验有3头母猪的血清未能保护小白鼠。用巯基乙醇处理母猪血清,证明其含有 IgG 与 IgM。未吃初乳的新生仔猪血清中没有特异性抗体,证明它不能通过胎盘传递给胎儿。初乳的乳清用凝集试验与中和试验均能测出猪丹毒特异性抗体。吃过初乳的仔猪在13日,15日龄,其血清用以上2种试验可测到猪丹毒特异性抗体,证明母源抗体可通过初乳传递给仔猪。吃过初乳的15～17日龄仔猪,可以抵抗皮内接种猪丹毒强毒活菌的攻击,20日龄仔猪不能抵抗强毒活菌的攻击。1、3、5、7、9及12周龄的仔猪接种猪丹毒菌苗,于3月龄后攻击猪丹毒强毒活菌,其免疫率分别为28.6%、25%、66.6%、75%、87.5%、及100%。根据以上试验结果,我们认为仔猪接种猪丹毒菌苗的适当年龄应在9周龄以后,12周龄时预防注射效果更好;如果在哺乳期注射了菌苗,则必须于断乳1个月后再注射1次,其免疫效果才比较确实。     

牦牛副伤寒弱毒冻干苗的安全及效力试验

我们采用醋酸铊肉汤培养基传代致弱培育出一株STM8002—550弱毒菌株。在此基础上同成都兽药厂联合试制了4批冻干苗,进行了牦牛副伤寒冻干苗的本动物安全及效力试验、免疫期试验、保存期试验、小区域等试验。现报告如下: 一、菌苗制造1.菌种选都柏林沙门氏菌STM8002—550弱毒菌株的典型菌落,接种于琼脂斜面上作菌苗制造用。2.种子培养①培养基为1.5%蛋白胨肉汤,pH7.4—7.6,分     

2拷贝SLT-ⅡvB在猪霍乱沙门氏菌C500crp~-/asd~-缺失株中的表达及小鼠免疫试验

为研制仔猪副伤寒—猪水肿病新型二联疫苗,从pMDSLT-Ⅱ中扩增去信号肽后的SLT-ⅡvB基因,将2拷贝SLT-ⅡvB与pYA3493连接。阳性质粒pYA2B电转化C500crp-/asd-缺失株,进行SDS-PAGE电泳和Western blotting,重组菌C500crp-/asd-(pYA2B)口服免疫小鼠,腹腔攻10 LD50的猪霍乱沙门氏菌强毒C78-1和2 LD50的猪水肿大肠杆菌强毒ED3株,计算攻毒保护率。结果显示,2 SLT-ⅡvB在C500crp-/asd-缺失株中获得了表达。C500crp-/asd-(pYA2B)免疫组对ED3的攻击能提供60%保护,而对照组不能提供任何保护。2组对C78-1攻击均提供100%保护,为研制仔猪副伤寒—猪水肿病二联疫苗及进一步提高免疫效果提供依据。