猪圆环病毒3型与猪圆环病毒2型二重PCR检测方法的建立

为建立同时检测PCV3和PCV2的二重PCR方法,分别以PCV3和PCV2基因组的保守区域设计2对特异性引物,片段大小分别为649,295 bp。将反应条件进行优化,构建PCV3和PCV2的二重PCR检测方法。检测结果表明该方法能特异性扩增PCV3和PCV2,且无法扩增其他猪常见病毒;PCV3和PCV2的最低检出限分别为508,412 copies/μL。临床样品检测结果显示,PCV3和PCV2阳性率分别为2.1%(3/145),62.1%(90/145),PCR产物经测序证实为PCV3。本研究建立的二重PCR方法具有速度快、特异性强和灵敏度等优点,可以用于PCV3和PCV2的检测和流行病学调查。     

猪圆环病毒3型PCR-ELISA检测方法的研究与应用

为建立一种检测猪圆环病毒3型(porcine circovirus type 3,PCV3)的PCR-ELSIA方法,根据GenBank上报道的PCV3全基因组序列,针对其高度保守区域设计1对特异性引物,上、下游引物的5′端分别标记生物素和地高辛。经PCR扩增获得大量带有标记的目的基因,依靠生物素-链霉亲和素的非共价结合作用固定目的基因于载体上,再通过羊抗DIG-HRP的显色反应,建立PCR-ELISA检测方法。结果表明,该方法与猪繁殖与呼吸综合征病毒、猪瘟病毒、猪细小病毒和猪圆环病毒2型无交叉反应,特异性良好。PCR-ELISA方法最低检测限为5.58×10² copies/μL,敏感性比常规PCR高100倍(常规PCR的检测限为5.58×10⁴ copies/μL)。PCR-ELISA方法批内和批间重复性检测的变异系数分别为1.90%～5.20%和3.89%～9.03%。对132份临床样品进行PCV3检测,PCR-ELSIA检出率为9.10%(12/132),高于常规PCR的检出率(4.55%,6/132)。综上,该方法具有特异、灵敏、安...     

广西猪圆环病毒2型及3型的流行病学初步调查

为了解广西近年来猪圆环病毒2型(PCV2)、圆环病毒3型(PCV3)的感染现状,本研究采集2020年-2022年来自广西养殖场、生猪屠宰场及无害化处理点的样品,采用实时荧光定量PCR方法进行检测。结果表明,1408份样品中,有731份PCV2阳性样品,阳性率为51.92%,471份PCV3阳性样品,阳性率为33.45%,有353份样品PCV2、PCV3均阳性,混合感染率25.07%。PCV2、PCV3普遍分布在广西14个地市,各地市感染程度存在较大差异。养殖场、屠宰场及无害化处理点PCV2、PCV3风险较高,风险由低到高依次是养殖场、屠宰场及无害化处理点。从不同类型样品携带病毒的情况来看,淋巴结和脾脏最高,脐带次之,精液未检测出阳性。这些结果可为我区PCV2、PCV3的流行情况分析、采样监测及防控提供依据。     

猪圆环病毒3型研究进展

猪圆环病毒3型(Porcine Circovirus Type 3,PCV3)是在发病猪临床病理样品中新发现的病毒,已经严重威胁养猪业。PCV3首先在美国被发现,目前在波兰、意大利、韩国以及中国等国家或地区的猪群中流行。本文主要从PCV3的国内外流行情况、诊断和防控措施等方面进行综述,以期对PCV3的防控以及净化提供科学指导。     

猪圆环病毒2型和3型检测方法建立及初步应用

为快速检测并鉴别猪圆环病毒2型(PCV2)和猪圆环病毒3型(PCV3)病毒。本文研究参考GenBank中PCV2和PCV3高度保守片段分别设计了探针引物,成功建立了一种双重TaqMan荧光定量检测方法。结果显示：该方法特异性好,可鉴别 PCV2、PCV3与其他猪病病毒;PCV2最低检测下限为1.00×10¹ copies/μL,PCV3最低检测下限为1.00×10⁰ copies/μL;重复性高,批内、批间的变异系数分别为0.01%～0.02%和0.02%～0.05%;本研究采用建立的方法与商品试剂盒同步检测猪只样品440份,PCV2样品符合率为97.47%,PCV3样品符合率为96.85%;测序结果显示,PCV2均为2d亚型,PCV3均为3c亚型。结果表明,建立的双重TaqMan荧光定量检测方法具有良好的特异性、敏感性且快速、准确,节约成本,可为PCV2和PCV3的监测与防控提供技术支撑。     

猪2型圆环病毒PCR检测方法的建立及应用

设计1对猪2型圆环病毒ORF2基因的引物,对甘肃地区的断奶仔猪多系统衰竭综合症疑似病例进行了PCR检测,并优化了PCR反应条件,进行了敏感性、特异性及重复性的测定试验,对其扩增序列进行了测序比较。结果表明,PCR扩增获得了预期大小的片断,将测序结果与GenBank收录的PCV2序列进行比较,发现同源性均在91.2%以上。对甘肃地区的69份病料的检测结果为感染率59%,表明甘肃地区的感染已经比较严重。     

猪圆环病毒2型及3型快速二重PCR检测方法的建立及其应用

针对猪圆环病毒2型(PCV2)和猪圆环病毒3型(PCV3)基因的保守序列设计了2对扩增PCV2和PCV3的特异性引物,通过优化各反应条件,建立同时检测PCV2和PCV3的二重PCR检测方法。敏感性和特异性结果显示,1.08×10~(-8)μg/μL是对PCV2和PCV3的最低检测限具有较好的灵敏度;而对猪细小病毒(PPV)、伪狂犬病病毒(PRV)、大肠杆菌、链球菌、副猪嗜血杆菌、胸膜肺炎放线杆菌的检测结果均无条带,表明所建立的方法具有较好的特异性。应用该方法检测了2017年9月—2018年8月从广西14个地市猪场采集的533份病猪死猪内脏组织,结果显示:PCV2阳性率为23.8%,PCV3阳性率为14.8%, PCV2和PCV3混合感染率为2.8%。广西14个地市中有12个地市的猪场送检样品检测出PCV2,有10个地市的猪场送检样品检测出PCV3,表明PCV2和PCV3在广西受检猪群中普遍存在,要重视和做好PCV2和PCV3感染的防控工作。     

猪圆环病毒3型分子生物学研究进展

猪圆环病毒3型(porcine circovirus type 3, PCV3)是一种新发猪病毒性传染病病原,多见于患有皮炎肾病综合征(PDNS)和繁殖障碍症状猪群,目前已于世界范围内普遍流行,引起了各国的格外重视和密切关注,因而成为国内外学者的研究热点。本文对猪圆环病毒3型的病原学特征、基因组结构和特点、编码的主要蛋白及其功能、分子生物学检测技术等国内外最新研究进展进行了综述,以期为后续研究提供参考。     

猪圆环病毒3型感染流行病学研究进展

猪圆环病毒3型（porcine circovirus 3,PCV3）属于圆环病毒科圆环病毒属,是2016年发现的圆环病毒。本文从PCV3的流行现状、易感动物、传染源及传播途径等方面综述了该病毒感染的流行病学研究进展。国外及国内多个地区的养猪场报道了PCV3感染以及由PCV3引起的疾病,阳性率较高,表明该病毒也是养猪业潜在的重要病原体。PCV3可感染家猪和野猪,且存在多种其他中间宿主;既可通过接触、消化道等进行水平传播,也可从父母代到子代垂直传播。未来应密切监测PCV3与其他猪病原体的合并感染,持续跟踪PCV3优势毒株遗传多样性和分子流行病学的动态变化,开发针对性的PCV3疫苗,加强对PCV3流行的控制,保障养猪业健康发展。     

猪群感染圆环病毒3型病例的诊断和病毒鉴定

2017年8月,华南某猪场保育猪出现慢性消瘦和呼吸道综合征的病猪。经实验室PCR诊断,排除猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)和猪圆环病毒2型(PCV2)后显示为猪圆环病毒3型(PCV3)阳性。采用特异性CAP段基因引物扩增该片段,使用DNAMAN7.0和MEGA6.06软件进行同源性分析。结果,成功克隆了该病毒的CAP段基因,序列长度为671 bp,并进行基因测序和遗传进化分析。序列同源性分析表明该毒株为PCV3,命名为PCV3/CN/Guangzhou/2017。     

我国猪圆环病毒3型分子流行病学研究概况

2016年,一种新的圆环病毒在美国被发现,该病毒被命名为猪圆环病毒3型(Porcine circovirus 3,PCV3),PCV3感染可造成临床猪只呼吸、消化、生殖等多系统炎症。目前,PCV3的致病机制尚不清楚,但人们对PCV3分子流行病学的研究却在不断深入。为了解我国PCV3分子流行病学情况,作者通过对GenBank中我国上传的426条PCV3全基因序列进行整理,借助分子生物学软件对PCV3各基因型统计分析,并统计了我国PCV3分子流行病学相关文献,回顾了我国近年来PCV3流行及其分型研究进展。通过对我国PCV3分子流行病学进行综述,旨在为进一步做好PCV3的防控提供科学依据。     

猪圆环病毒3型感染的流行情况与检测方法研究进展

猪圆环病毒3型(porcine circovirus 3,PCV3)是猪群中流行的一种新型猪圆环病毒。2016—2017年,世界范围陆续报道在猪群中发现PCV3,包括美国、中国、美国、韩国、巴西、波兰和意大利等。PCV3感染多见于具有皮炎肾病综合征(PDNS)和繁殖障碍症状的猪群,目前病毒尚未分离成功。本文综述了已报道的PCV3在世界范围内的流行情况,介绍了当前研究的PCV3分子和血清学诊断方法。     

山东省6例猪圆环病毒3型检测及Cap结构遗传进化分析

为了更好地研究PCV3分子进化,对山东省6份阳性样品进行检测,并对PCV3 Cap蛋白基因测序。结果表明:PCV3 Cap蛋白基因与PCV1及PCV2的Cap蛋白基因同源性在34.4%～38.4%;PCV3的Cap蛋白基因与美国标准毒株同源性为97.3%～99.8%;6株PCV3分离株之间的同源性为98.3%～99.8%。Cap基因测序结果表明,山东地区所分离到的6株PCV3毒株既有PCV3a也有PCV3b亚型,与美国毒株仅存在散在变异位点,但与PCV1及PCV2抗原表位差异明显。由此推断:PCV3与PCV1及PCV2交叉保护较差,这也为未来PCV3的有效防控研究提供理论基础。     

PCR技术在猪圆环病毒2型检测中的应用

参照Gen Bank中已发表的猪圆环病毒2型(PCV-2)ORF2基因序列,设计合成1对引物,建立了检测猪场疑似病例临床样本中PCV-2的PCR方法。结果显示,PCV-2的ORF2扩增产物经琼脂糖凝胶电泳,呈现1条630 bp的特异性条带,与预期目的片段大小一致。应用该方法对安徽省3个猪场的30份病料进行了PCV-2检测,结果有9份检测出PCV-2,阳性率为30%。结果表明,该试验建立的PCR方法,是一种快速、灵敏、高效的PCV-2检测技术。     

猪圆环病毒3型快速检测方法研究进展

猪圆环病毒3型可引起猪的皮疹、呼吸系统和泌尿系统功能障碍等。快速、准确地检测PCV3对于保障猪的健康和生产具有重要意义。本文综述了当前国内外已报道的PCV3快速检测方法,主要包括免疫学检测方法 (酶联免疫吸附试验、免疫层析技术)、基于PCR的方法 (常规PCR、套式PCR、多重PCR、荧光定量PCR、数字PCR及其他基于PCR的技术)、等温扩增技术(环介导等温扩增、重组酶介导等温核酸扩增、重组酶聚合酶扩增、酶促重组等温扩增以及聚合酶螺旋反应)、原位杂交技术以及宏基因组测序技术。本文还初步探讨了不同方法的原理、特性及优缺点,展望了未来PCV3快速检测方法的发展方向,以期为快速、精准地检测及科学防控PCV3提供参考。     

广西猪圆环病毒3型流行病学调查与分析

本研究旨在了解新发猪圆环病毒3 型（porcine circovirus 3,PCV3）在广西猪群的感染情况及流行特点,为有效防控PCV3提供科学依据。试验采用PCR检测方法对2017年9月至2019年3月广西482个规模猪场送检的917份病猪样品进行PCV3检测,并分析PCV3阳性率在广西不同地区、年份、季节和年龄段猪群之间的差异。对145份PCV3阳性病料进行猪瘟病毒（CSFV）、猪繁殖与呼吸综合征病毒（PRRSV）、猪圆环病毒2型（PCV2）、猪伪狂犬病病毒（PRV）和猪流行性腹泻病毒（PEDV）检测。结果显示,PCV3除在百色、防城港未检出,在广西其他12个地市均存在不同程度的感染;2017~2019年广西PCV3样品阳性率和PCV3猪场阳性率均呈逐渐上升趋势;夏季PCV3阳性率最低,且明显低于其他3个季节;育肥猪PCV3阳性率最高,为21.70%,其次是流产母猪、保育猪、流产胎儿,阳性率分别为20.00%、19.05%和11.02%,哺乳仔猪PCV3阳性率最低,为8.21%;PCV3单一感染率较高,为30.34%,与其他病原混合感染情况也较为常见,甚至出现四重感染。调查结果表明,PCV3感染在广西普遍存在,且近年来感染呈增加趋势,可能有一定的季节性,对各生长阶段猪群均有一定程度的危害,以育肥猪最为严重,对母猪和保育猪危害也较大;PCV3单一阳性率较高,但仍以混合感染为主,尤其是与PRRSV和PCV2的混合阳性率较高,提示这3种病原在感染致病过程中可能存在协同作用。     

应用PCR技术检测猪圆环病毒

根据已报道的PCV-2序列,设计1对特异性引物,建立PCR检测方法,并用所建立的方法对送检的25头病猪进行检测,结果阳性检出率为28%。这表明安徽地区猪群中存在PCV-2感染。     

新发疫病猪圆环病毒3型研究概况及防控措施

猪病的传播和流行一直是制约我国生猪养殖业发展的主要因素,特别是近年来猪病流行情况的日益复杂,非洲猪瘟、猪圆环病毒3型（Porcine Circovirus Type 3, PCV3）等多种新发疫病的不断出现,严重制约了我国生猪产业的发展,对生猪产业造成严重打击,同时也加速了我国猪场转型升级的步伐,对现代化猪场的生物安全和饲养管理提出了更高的要求。PCV3在2016年国内猪场发生至今,已传播扩散至我国多省的不同地区,成为严重威胁我国养猪业的一种新发疫病,PCV3感染导致猪群健康受损的同时,也大大增加了其他病原微生物感染的风险,且目前暂无有效疫苗对PCV3进行防控,给猪场造成了严重经济损失。本文对PCV3病原学特征、流行病学特点、临床症状和防控措施等方面进行简单综述,以期为预防PCV3的流行传播和基础研究提供参考。     

犬的病料中检测到猪圆环病毒3型

为进一步弄清我国犬是否感染猪圆环病毒3型(porcine circovirus 3,PCV3),本试验对山东省青岛市某宠物医院采集发病犬的48份样品进行PCV3荧光PCR检测,发现7份病料呈现明显阳性,对这7株阳性样品继续用普通PCR扩增,有3份可以扩增出228 bp的特异性条带。这些条带测序后与圆环病毒的其他参考序列进行同源性分析,结果显示这3份样品的病毒序列与其他PCV3参考序列处于同一个进化分支,与PCV3的同源性为93.3%～99.5%,表明我国犬确实存在PCV3感染。     

河北省猪群中检出猪圆环病毒3型

猪圆环病毒3型(Porcine circovirus type 3,PCV3)为新发传染病病原。2016年美国首次报道了该病的发生与流行。为了解PCV3在我国猪群中的分布与流行状况,本研究建立了PCV3 PCR检测方法。敏感性和特异性试验结果表明,该方法对PCV3的最低核酸检出量为38 pg,可扩增出284 bp的特异性片段。利用建立的PCR方法对从河北省猪场收集的168份疑似样品进行检验,检出阳性样本9份,表明河北猪群存在PCV3感染。