油茶种子表达的主要储藏蛋白基因及其分析

以油茶优良无性系湘林1号和湘林4号近成熟种子为材料构建cDNA文库,随机挑取2327个克隆进行3′端测序,并将所得序列与核酸数据库进行同源性比较.结果显示,有88条油脂储藏蛋白相关基因和3种61条储藏蛋白基因表达,并具有典型的“时、空”特点.这些结果为揭示近成熟时期油茶种子中储藏蛋白特异表达的丰度和生理情况提供了科学依据.     

油茶种子EST文库构建及主要表达基因的分析

为研究油茶种子在油脂转化高峰期的基因表达并分离克隆与油脂合成等有关的重要基因,以油茶优良无性系湘林1号和湘林4号近成熟种子为材料构建cDNA文库;随机挑取2 327个克隆进行3'端测序构建EST文库.将数据完整并无X、N的1 979条cDNA序列与NCBI核酸数据库的非冗余序列进行同源性比较,确认763条cDNA序列与核酸数据库中其他物种的DNA序列具有很高或较高的同源性,可确认266种基因;有1 216个克隆序列为未知功能的基因序列.各类基因表现出不同的表达丰度,其中贮藏蛋白基因、与基因表达调控相关的基因、抗逆相关基因、种子成熟和胚胎发育相关的基因等为高丰度表达,与脂肪酸代谢相关的基因等为中丰度表达,另外还有大量的其他基因和未知功能基因在种子中表达.各类基因表达的数量和趋势与种子接近发育成熟阶段相吻合.     

油茶近成熟种子表达的发育相关基因及其分析

以油茶优良无性系湘林1号和湘林4号近成熟种子为材料构建cDNA文库,随机挑取2327个克隆进行3′端测序,并将所得序列与核酸数据库进行同源性比较.发现16种58条与油茶种子胚胎发育及种子成熟相关的基因序列,这些序列与核酸数据库中其他物种相关序列有很高或较高的同源性.其中,脱落酸应答蛋白、成熟控制蛋白、翻译控制肿瘤蛋白、胚胎特化蛋白、乙烯应答因子包含域蛋白等基因序列为高丰度表达;种子成熟蛋白、细胞分化蛋白、乙烯应答因子、脱水素等编码基因属中等丰度表达;而成熟相关蛋白、胚珠发育蛋白、伸展蛋白、生长控制因子、休眠相关蛋白、衰老相关蛋白和脱水应答蛋白等基因只检测到1条序列,属低丰度表达.这些结果为揭示油茶种子油脂转化过程中的基因表达和生理过程提供了科学依据.     

油茶种子cDNA文库构建中的问题与对策

以湘林1号和湘林．1号油茶优良无性系近成熟种子为材料．总结了构建油茶种子cDNA文库过程中存在的一些关键问题和应采取的对策．为今后油茶和其它油料植物种子的mRNA提取、构建高质量的cDNA文库及ESTs文库等提供技术参考和理论指导。     

1个油茶Y2SK2型脱水素的全长cDNA克隆及生理功能的预测

以构建的油茶EST文库为基础,采用电子克隆技术,分离克隆一个脱水素基因的全长cDNA序列,该基因的cDNA全长1 406 bp,含一个600 bp的CDS,编码200明的小分子蛋白.推测该基因编码蛋白的分子质量为21 ku,等电点7,暂命名为CoDHNI.同源性分析发现该基因的编码蛋白具有2个Y-片段(DEYGNP),1个S-片段(SGSSSSSS),2个K-片段(KIKEKLPG),属于典型的Y2sIQ型脱水素.经Blast比对,发现富含苏氨酸的Thr-区在各物种间变异显著,推测该区为油茶所特有,有利于在被保护的大分子表面形成水合层;同时还发现一个十分保守的基序:EDDGQGGRRKK,可能有利于脱水素的磷酸化和亚细胞定位.通过与柑桔和拟南芥的脱水素比较,提出CoDHNI有可能缓冲种子脱水胁迫响应时钙离子的瞬时增高,并可结合重金属离子,以减轻活性氧的危害.     

油茶EST文库中不饱和脂肪酸合成关键酶基因的序列分析

采用生物信息学方法,从随机测序而构建的油茶优良无性系湘林1号种子EST文库中初步鉴定了与茶油脂肪酸形成相关的大部分关键酶基因,并对其中几个直接控制不饱和脂肪酸的形成与转化的基因进行了相应的序列分析．     

普通油茶WOX基因家族的鉴定及表达分析

WOX基因家族是植物特有的转录因子,参与调节植物的生长与发育,WUSCHEL(WUS)是该家族中与作物产量相关的基因。研究通过对普通油茶(Camellia oleifera)基因组、转录组数据的挖掘,鉴别出18个WOX基因,其中,CoWUS来自油茶基因组三代测序数据。CoWOX11A与Co WOX11B在种仁中高水平表达,可能对种仁发育具有重要作用;Co WUS在柱头中高水平表达,经与WOX基因家族的蛋白质序列进行比对分析并构建进化树,结果表明,CoWUS是WUS的同源基因,表明CoWUS可能参与油茶果实心皮数的调控,影响油茶的产量。     

油茶种子cDNA文库的构建

以湘林1号和湘林4号油茶优良无性系近成熟种子为材料,采用裂解法和改良的CTAB法提取总RAN;用磁珠法分离得到纯化的mRNA;在反转录酶和其他酶的作用下合成一链cDNA和二链cDNA;经与质料载体重组和转化大肠杆菌,成功地构建了世界上第一个油茶种子cDNA文库.经检测,文库存容量达106,重组率为88.21%.测序结果表明:克隆片段长度一般都大于600 bp,说明构建的文库质量较高,能够满足ESTs文库构建及从文库中分离筛选重要基因等研究工作的需要,为进一步研究奠定了很好的物质和技术基础.     

油茶种子数量相关基因EPFL2的鉴别

拟南芥(Arabidopsis thaliana)AtEPFL2基因属于EPF/EPFL基因家族中的EPFL1/2/3亚家族,与种子数量有关.对普通油茶(Camellia oleifera)幼叶、未成熟种仁、花蕾、根的转录组数据进行挖掘,得到3条油茶EPFL2基因序列;从油茶基因组3代测序数据中鉴别出含有前述3条序列的基因组DNA序列;最后,得到3条油茶EPFL2基因全长CDS序列,分别命名为CoEPFL2a、CoEPFL2b、CoEPFL2c.用MEGA7构建EPFL1/2/3亚家族蛋白质系统进化树,结果表明:CoEPFL2a、CoEPFL2b、CoEPFL2c属于EPFL2分支,并且CoEPFL2a、CoEPFL2c与AtEPFL2在同一个亚分支.用SignalP-5.0预测蛋白信号肽与酶切位点,结果表明:AtEPFL2、CoEPFL2c含信号肽与酶切位点,CoEPFL2a、CoEPFL2b不含;CoEPFL2c可能与AtEPFL2具有同样的功能,即通过调节胚珠密度影响种子数量.     

油茶饼粕蛋白的制备及其酶解物活性分析

为从油茶饼粕中提取蛋白,采用单因素实验和正交实验方法,研究了油茶饼粕蛋白碱提的重要影响因子,得到的最优制备条件为:起始p H值为10,温度为50℃,料液比为1︰14,时间为60 min;在此碱提条件下,油茶饼粕蛋白的溶出率为47.9%。文中还就其酶解物对·OH的清除率的影响情况进行了实验,结果得到的最佳水解条件为:起始p H值为10,酶解温度为40℃,酶用量为1.0%、酶解时间为120 min;在此酶解条件下,酶解物对·OH的清除率达到38.9%。文中还对油茶饼粕蛋白活性肽的功能进行了分析,结果表明:当其浓度为150μg/m L时,其对·OH和DPPH的清除率分别为34.49%和37.73%。     

油茶SAD基因的全长cDNA克隆及生物信息学分析

油茶( Camellia oleifera )是原产于我国的重要木本油料树种,广泛分布于我国南方,总面积达350万hm 2,种仁含油率约为55%.所产茶油富含90%以上的油酸、亚油酸等不饱和脂肪酸,还含有少量的亚麻酸等高价不饱和脂肪酸(胡芳名等,2006),是易消化耐贮藏的优质食用植物油,其油质甚至一定程度上优于橄榄油.     

四倍体油茶的鉴定及变异

油茶(Camellia oleifera)是我国南方主要的经济林木,与油棕(Elaeis gunieen)、油橄榄(Olea europaea)和椰子(Cocos nucifera)并称为世界四大木本食用油料树种.茶油不饱和脂肪酸含量达90%以上,以油酸和亚油酸为主,还含有少量的亚麻酸等高价不饱和脂肪酸,具有降低血清胆固醇含量,起到预防和治疗高血压和心血管疾病的作用(雷治国等,2003).     

安徽油茶病害发生与识别

随着我省油茶栽培面积的迅速扩大,油茶病害问题将日益突出。本文通过多年观察,共发现安徽油茶病害20余种,本文对其中常见、且危害较为严重的15种病害的发生与危害以及识别特征进行了概述。     

19个油茶无性系的酶活性及蛋白质含量分析

本试验通过采集19个油茶优良无性系的叶片,测定其过氧化物酶（POD）活性、超氧化物歧化酶（SOD）活性、细胞色素氧化酶（COX）活性及蛋白质含量,比较不同品种油茶的酶活性、蛋白质含量,并进行主成分分析和聚类分析。结果表明：（1）17号品种油茶叶片POD活性最高,达2.3493U·g-1FW,15号最低,仅有0.0215U·g-1FW,品种间POD活性差异极显著;2号品种油茶叶片SOD活性最高,达341.0256U·g-1FW,7号品种最低,仅有159.8928U·g-1FW,品种间POD活性差异显著;18号品种COX活性最高,达0.5406μmol cytc·min-1·g-1FW,11号最低,仅有0.0121μmol cytc·min-1·g-1FW,各品种间无明显差异;16号品种蛋白质含量最高,有39.9854mg·g-1,4号品种最低,仅有5.4296mg·g-1,各品种间差异极显著;（2）在各品种油茶叶片中,POD、SOD、蛋白质这三项指标均不是影响各品种间差异的明显主成分;（3）对各品种叶片的POD活性、SOD活性、蛋白质三项指标进行ward最小平均法聚类分析,可区分为五类,同类群中大部分品种均来自同一种源地。     

油茶籽残饼油制备生物柴油研究及工艺优化

研究了油茶籽残饼油制备生物柴油碱催化酯交换反应动力学过程,探索了反应动力学因素醇油物质的量比、催化剂用量、反应温度和反应时间对生物柴油得率的影响.正交试验结果表明,油茶籽残饼油酯交换反应的理想条件为:反应温度70℃,醇油物质的量比为6:1,催化剂用量为油质量的0.6%,反应时间90 min;此条件下生物柴油得率为94.43%.经权威机构检测,所制得生物柴油主要性能指标完全符合国家标准GB/T 20828-2007,具有广阔的应用前景.     

广东省油茶低产林原因分析及改造技术措施浅探

油茶是我国特有的优良食用木本油料树种,综合利用价值很高.但目前由于经营管理粗放、品种混杂等原因导致油茶产量普遍较低,文章重点分析了广东省油茶人工林低产的主要原因,并总结出油茶低产林改造技术措施,为提高油茶低产林的产量提供理论依据.