枣树原生质体培养及其植株再生

以无核小枣和鸡蛋枣两个枣树品种的胚性悬浮细胞经酶解获得的原生质体为材料,采用不同种类的培养基、不同含量的ＮＡＡ 和 ＺＴ 激素组合及不同原生质体培养密度对两个枣树品种的原生质体进行培养,以获得适宜的培养基种类、较佳ＮＡＡ 和ＺＴ 的激素组合及适宜的培养密度。结果表明：用ＫＭ ８ｐ 作培养基,附加 ０．３ ｍ ｇ／Ｌ ＮＡＡ＋ ０．２ ｍ ｇ／Ｌ ＺＴ 的激素组合,以５×１０５ 个原生质体／ｍ Ｌ 的培养密度, 对其原生质体经 １０ 周液体浅层培养,可获得直径约为 １ ｍ ｍ 的微愈伤组织。将这些微愈伤组织先后转入低渗ＫＭ ８ｐ ＋ ３．０ ｍ ｇ／Ｌ ＮＡＡ＋ ０． ２ ｍ ｇ／Ｌ ＺＴ 琼脂培养基和Ｍ Ｓ［（１／２）ＮＯ－３ ］＋ ３．０ｍ ｇ／Ｌ ＮＡＡ＋ ２．０ｍ ｇ／Ｌ ＺＴ 琼脂培养基上增殖, 再转入枣树分化培养基中,可获得完整的原生质体再生植株     

桉树原生质体分离体系建立研究初报

以雷林一号桉及尾叶桉为对象进行了原生质体分离体系建立研究,结果表明：雷林一号桉及尾叶桉胚性愈伤诱导的最适应培养基分别为：Ｂ５＋２,４－Ｄ２．０ｍｇ／Ｌ＋ＫＴ０．８ｍｇ／Ｌ及Ｂ５＋２,４－Ｄ２．０ｍｇ／Ｌ。胚性愈伤继代培养基为：Ｂ５＋２,４－Ｄ０．５～１．０ｍｇ／Ｌ＋ＫＴ０．５ｍｇ／Ｌ。黑暗下３～５天的预培养对愈伤组织上的褐化有明显的抑制作用。雷林一号桉及尾叶桉原生质体分离的最适酶液组合分别为：纤维素酶２％＋离析酶１％＋崩溃酶０．１％;纤维素酶２％＋离析酶１％＋崩溃酶０．０５％。愈伤组织在０．９ｍｏｌ／Ｌ蔗糖溶液中浸泡１ｈ,并于酶解后４ｈ更换一次酶液有利于原生质体产量与活力的提高。淡黄色松散愈伤组织原生质分离效果较其它质地的愈伤组织好。继代后８～１０天愈伤组织作原生质体的分离材料较其它年龄的愈伤组织合适。     

黄竹细胞悬浮培养和原生质体分离*

以牡竹属黄竹（ＤｅｎｄｒｏｃａｌａｍｕｓｍｅｍｂｒａｎｃｅｕｓＭｕｎｒｏ）的竹节及无菌苗根颈为外植体，培养于含有５ｍｇ／Ｌ２，４－Ｄ、０．２ｍｇ／ＬＫＴ和２００ｍｇ／ＬＬＨ的ＭＳ培养基上诱导愈伤组织，然后移至相同成份或不同浓度２，４－Ｄ的液体培养基中，进行悬浮培养，以建立分散性良好的悬浮细胞系。利用悬浮细胞和无菌苗叶片经酶解获大量原生质体，其产量分别约为每克鲜重２．５×１０５个和５×１０５个，活力均可达８０％。     

桉树原生质体融合影响因素研究

以尾叶桉、窿缘桉的胚性愈伤组织为亲本材料，采用ＰＥＧ（聚乙二醇）融合法进行了原生质体融合研究，结果表明：影响桉树原生质体融合的主要因素为：融合液中ＰＥＧ 克分子量及浓度、Ｃａ２＋ 浓度。ＰＥＧ 以克分子量４ ０００、６ ０００ 较为合适，所用浓度分别为５０％ 与３５％ 时效果最好；融合液中０．４ ｍ ｏｌ／Ｌ浓度的Ｃａ２＋ 的加入有助于原生质聚集体及融合体百分率的提高。融合所用保温温度３０℃为宜。融合液中０．４ ｍ ｏｌ／Ｌ甘露醇的补充有利于原生质与融合体稳定性的保持。异核体核融合率以融合后培养３～５ ｄ 时百分率最高     

枣树愈伤组织培养时不定芽的分化

以枣树色白、结构紧密的愈伤组织为材料,对其不定芽的分化情况进行了研究．结果表明,用ＭＳ（ＮＯ－３／２）作基本培养基,并附加ＫＴ４．０００ｍｇ／Ｌ,ＺＴ１．７５０ｍｇ／Ｌ和ＮＡＡ０．０１５ｍｇ／Ｌ可以获得比较好的不定芽分化效果,鸡蛋枣和无核小枣不定芽再生频率分别达到３０％,２２％,其它品种再生频率低于１５％,不定芽在ＭＳ（ＮＯ－３／２）＋ＮＡＡ０．０１５ｍｇ／Ｌ＋ＺＴ１．７５０ｍｇ／Ｌ＋ＫＴ４．０００ｍｇ／Ｌ＋ＡｇＮＯ３２．０００ｍｇ／Ｌ的培养基上能获得最高的增殖系数．     

群众杨悬浮细胞系的建立和耐盐体细胞变异体的初步筛选

对群众杨首次进行了悬浮细胞培养，对悬浮细胞系的生长进行测定，同时对耐盐体细胞变异体进行了初步筛选，获得了耐３．０‰－４．０‰不同ＮａＣＬ水平的不定芽。获得适宜悬浮、松脆、易分散的愈伤组织是悬浮的关键，对不同供试脱分化激素配比的试验结果表明，诱导愈伤组织的ＭＳ＋２，４－Ｄ（０．４５ｍｇ／Ｌ）＋ＮＡＡ（０．３ｍｇ／Ｌ）＋Ｋｉｎｅｔｉｎ（０．１ｍｇ／Ｌ）为最好。合适的液体培养基成份和培养技术也是悬浮细胞     

银杏成熟胚培养的细胞组织学观察

由银杏成熟胚诱导的淡绿色,疏松愈伤组织经过继代培养后在部分疏松愈伤组织上又形成致密愈伤组织,并在ＭＳ＋ＢＡ ２ｍｇ／Ｌ＋ＮＡＡ ０．５ｍｇ／Ｌ的培养基上从致密愈伤组织中诱导胚状体发生并达到心形胚阶段。细胞组织学的观察表明,胚状体起源于愈伤组织表面的胚性细胞。     

桉板原生质体融合影响因素研究

以尾叶桉，窿缘桉的胚性愈伤组织为亲本材料，采用ＰＥＧ融合法进行了原生质体融合研究，结果表明：影响桉树原生质体融合的订因素为；融合液中ＰＥＧ克分子量及浓度，Ｃａ６２＋浓度。ＰＥＧ以克分子量４０００，６０００较为合适，所用浓度分别为５０％与３５％时效果最好；融合液中０．４ｍｏｌ／Ｌ浓度的Ｃａ＾２＋的加入有助于原生质聚集体及融合百分率的提高。融合所用保温温度３０℃为宜。     

山影拳的组织培养

文章着重介绍了山影拳组织培养中的愈伤组织的诱导及芽分化的过程。实验结果表明，在ＭＳ＋６－ＢＡ０．５ｍｇ／Ｌ＋２，４－Ｄ２ｍｇ／Ｌ＋ＮＡＡ０．１ｍｇ／Ｌ＋３０ｇ／Ｌ蔗糖＋１０ｇ／Ｌ琼脂的培养基中，山影拳的茎段切面上可以很快诱导出愈伤组织，愈伤组织白色、疏松、颗粒状；在ＭＳ＋６－ＢＡ０．５ｍｇ／Ｌ＋ＮＡＡ０．１ｍｇ／Ｌ的培养基上可诱导出呈浅绿色的愈伤组织，经一段时间以后，可分化出不定芽或在外植体的突起     

凹叶厚朴组织培养的研究

采用单因子比较、正交设计、均匀设计法，分别研究了影响凹叶厚朴Ｍａｇｎｏｌｉａｂｉｌｏｂａ愈伤组织诱导和生长的各种因素。研究结果表明：愈伤组织诱导的最适培养基为Ｂ５＋２，４－Ｄ２ｍｇ／Ｌ＋６－ＢＡ１ｍｇ／Ｌ，生长的最适培养基为Ｂ５＋２．４－Ｄ１ｍｇ／Ｌ＋６－ＢＡ１．５ｍｇ／Ｌ。在培养基中添加１０％豆芽汁能够促进愈伤组织迅速生长。黑暗培养对愈伤组织的生长极为有利     

银杏原生质体制备及其融合研究

以银杏品种湖南梅核成熟胚进行组织培养得到的无菌苗和愈伤组织为材料,用不同酶液处理进行原生质体制备,并用PEG法进行原生质体融合实验。结果显示,以2.0%纤维素酶+1.0%果胶酶+5.0mmol/LMES+6mmol/LCacl2+0.6mol/L甘露醇( 号酶液)酶解银杏组织、方法1提取原生质体效果最好,其最高原生质体产率为9.4×107个/g;以17%蔗糖溶液处理得到原生质体质量最好。用40%PEG6000+0.3mol/L钙离子+pH9.5液体处理原生质混合液,银杏原生质体融合率最高,为67%。     

人心果原生质体分离初探

以人心果幼嫩叶片组织为材料,研究了酶液组合、酶解时间、酶液中甘露醇含量、pH值、温度等因素对其原生质体分离的影响,结果表明:以3%纤维素酶R-10+0.4%果胶酶Y-23为混合酶液,0.6 mol.L-1甘露醇为渗透压稳定剂,pH 5.6的酶液组合,在28℃的黑暗条件下振荡,酶解时间2 h,分离出的原生质体产量最佳,可达到12.4×106个.g-1。     

晚松悬浮细胞系的建立和原生质体的分离

植物悬浮细胞系的建立和原生质体的分离已被广泛地应用于生理学、生物化学、细胞学、遗传学及分子生物学的研究 ,它是生物技术中进行原生质体培养、杂交、基因转移、突变系筛选等项研究的较理想手段[1] 。针叶树在这方面的研究起步虽晚 ,但至今已取得令人瞩目的进展[2 ] 。晚松     

地锦与五叶地锦原生质体分离及培养研究

用纤维素酶、果胶酶、甘露醇的混合酶液提取地锦和五叶地锦无菌苗幼叶、五叶地锦胚乳愈伤组织及地锦幼胚愈伤组织的原生质体,对影响原生质体提取得率及活力因素进行分析,对不同材料原生质体得率进行比较,对提取的原生质体进行液体浅层、固液结合及固体等方式培养,对原生质体形成的愈伤组织以MS和改良B5培养基附加不同浓度NAA、6-BA、2,4-D、PEG、KT、ZT等进行分化培养.试验结果表明纤维素酶对原生质体提取得率有极显著影响,适宜地锦幼叶原生质体提取的酶液组合为纤维素酶O.5%、果胶酶0.3%、甘露醇0.6 mol·L-1、酶解8 h;不同材料原生质体提取得率有显著差异;仅五叶地锦胚乳愈伤组织来源的原生质体在固体培养基中形成新的愈伤组织,其它方式培养的不同材料原生质体均无分裂或仅形成数十个细胞的细胞团后便解体;用30余组配方进行了五叶地锦胚乳愈伤组织原生质体形成的新愈伤组织的分化培养,继代6～10次后仍无分化迹象.     

杨树炭疽病菌原生质体遗传转化的建立及绿色荧光蛋白的表达

以杨树炭疽病菌菌株C1-5-2作为受体,通过PEG介导的原生质体转化法,将含有潮霉素B(hph)和GFP表达基因的质粒gGFP转入杨树炭疽病菌菌丝的原生质体中。幼嫩菌丝在0.7mol·L-1NaCl溶解的1% Lysing enzyme酶解液的作用下酶解210min可以得到108·mL-1的原生质体;在PEG介导下,通过含有潮霉素浓度为300μg·mL-1的PDA选择培养基筛选转化子,每微克DNA获得41个转化子的平均转化效率。对转化子进行PCR鉴定表明:hph基因和GFP基因已经整合到杨树炭疽病菌转化子基因组中,通过荧光显微镜观察到转化子可以发出清晰的绿色荧光,且转化子的潮霉素抗性和GFP表达性状可以稳定遗传。     

竹子的离体培养研究

近２０ａ来已对２０个属７０余种竹子进行离体培养研究,以侧芽,顶芽,成熟胚作外植体诱导愈伤组织,由愈伤组织制备悬浮细胞进行细胞悬浮培养,由悬浮细胞制备原生质体进行原生质体培养。竹子愈伤组织经不定芽途径或体细胞胚发生途径再生完整植株。通过芽尖培养增殖新生芽进行竹微繁殖,并获得脱病毒种苗。以芽为外植体增殖的新芽或组织再生苗经继代培养诱导竹试管开花结实。     

烟草种间原生质体融合及其影响因素的研究

利用PEG-高Ca2+高pH法对烟草属的普通烟草K326和Nicotiana rustica、N.alata、N.plumbaginifolia、N.debneyi分别进行种间叶肉原生质体融合试验,结果表明基因型对烟草叶肉原生质体融合有明显影响。通过试验还对影响烟草叶肉原生质体融合及其成株的其它相关因素进行了探讨。     

植物原生质体游离、培养及应用

介绍了原生质体培养研究历史，并对植物原生质体游离、培养、植株再生及应用进行了综述。