野桑蚕对溴氰菊酯抗性品系的筛选

1材料与方法 1．1供试昆虫桑叶育筛选抗性品系的原始材料启东野桑蚕（YQD）和苏大桑园野桑蚕（YSD）分别于2004年10月采自江苏省启东市桑园和2006年4月采自苏州大学桑园,室内桑叶育参照文献[6]进行,见专利“野桑蚕的室内饲养方法”;人工饲料育筛选抗性品系的原始材料吴江野桑蚕（YWJ）,2004年10月采自江苏省吴江市桑园,室内人工饲料育参照文献[7]进行,见专利“一种饲育1龄野桑蚕的方法”。     

二化螟抗药性检测方法比较和抗药性监测

通过比较分析,筛选出较好的初孵幼虫人工饲料药膜法,并用该法对7个地区的二化螟进行了抗药性监测,研究结果在验证初孵幼虫人工饲料药膜法的同时,为田间用药提供了科学依据。采用4龄幼虫点滴法和初孵幼虫人工饲料药膜法进行测定。结果表明:4龄幼虫点滴法测定仅发现不同药剂对南昌种群的毒力略低于敏感品系(RR 1.3~2.1倍);但用人工饲料药膜法检测发现,南昌种群对三唑磷(54.2倍)和丙溴磷(63.9倍)已经产生了高水平抗性,对杀虫单(13.4倍)表现为中等抗性,对氯虫苯甲酰胺(5.3倍)和毒死蜱(3.6倍)仅为敏感性下降。抗药性监测结果表明,二化螟对杀虫单、丙溴磷和三唑磷的抗性较为普遍。对于杀虫单的抗性,除重庆万州和江苏扬州种群为低水平抗性(9.0、7.7倍)外,其他地区仍维持在中等抗性水平(13.5~21.7倍)。对于丙溴磷的抗性,除万州种群敏感外,其余6个地区均为中高水平抗性(33.3~86.5倍)。对于三唑磷的抗性,不同地区差异较大,武汉、扬州和万州种群较敏感(1.0~4.0倍),而湘潭、南昌、桂林和金华种群均达到了高等抗性水平(48.0~128.8倍)。不同地区二化螟对毒死蜱(0.9~8.8倍)、氯虫苯甲酰胺(1.0~9.4倍)、丁烯氟虫腈(0.1~5.3倍)、醚菊酯(0.6~8.8倍)和阿维菌素(0.9~4.5倍)均处于敏感至低抗水平之间。其中,氯虫苯甲酰胺、丁烯氟虫腈和阿维菌素不仅抗性水平低,且毒力水平较高(LC50分别为0.11、0.61和0.04 mg·L-1),毒死蜱和醚菊酯虽然抗性不明显,但毒力较差(LC50分别为1.93和4.99 mg·L-1),故推荐防治用药,仍需进一步验证田间防效。结论:人工饲料药膜法和点滴法测得的抗药性趋势一致,但药膜法更加灵敏,测得的抗性更加明显;二化螟对常用杀虫剂的抗性普遍较高,对新型杀虫剂较为敏感,但不同地区有明显差异,这与各地的用药历史有关;不同地区的用药应依据药剂的毒力、当地的抗药性状况,以及田间药效来选择。     

二化螟抗药性检测方法比较和抗药性监测

通过比较分析,筛选出较好的初孵幼虫人工饲料药膜法,并用该法对7个地区的二化螟进行了抗药性监测,研究结果在验证初孵幼虫人工饲料药膜法的同时,为田间用药提供了科学依据。采用4龄幼虫点滴法和初孵幼虫人工饲料药膜法进行测定。结果表明:4龄幼虫点滴法测定仅发现不同药剂对南昌种群的毒力略低于敏感品系(RR 1.3~2.1倍);但用人工饲料药膜法检测发现,南昌种群对三唑磷(54.2倍)和丙溴磷(63.9倍)已经产生了高水平抗性,对杀虫单(13.4倍)表现为中等抗性,对氯虫苯甲酰胺(5.3倍)和毒死蜱(3.6倍)仅为敏感性下降。抗药性监测结果表明,二化螟对杀虫单、丙溴磷和三唑磷的抗性较为普遍。对于杀虫单的抗性,除重庆万州和江苏扬州种群为低水平抗性(9.0、7.7倍)外,其他地区仍维持在中等抗性水平(13.5~21.7倍)。对于丙溴磷的抗性,除万州种群敏感外,其余6个地区均为中高水平抗性(33.3~86.5倍)。对于三唑磷的抗性,不同地区差异较大,武汉、扬州和万州种群较敏感(1.0~4.0倍),而湘潭、南昌、桂林和金华种群均达到了高等抗性水平(48.0~128.8倍)。不同地区二化螟对毒死蜱(0.9~8.8倍)、氯虫苯甲酰胺(1.0~9.4倍)、丁烯氟虫腈(0.1~5.3倍)、醚菊酯(0.6~8.8倍)和阿维菌素(0.9~4.5倍)均处于敏感至低抗水平之间。其中,氯虫苯甲酰胺、丁烯氟虫腈和阿维菌素不仅抗性水平低,且毒力水平较高(LC50分别为0.11、0.61和0.04 mg·L-1),毒死蜱和醚菊酯虽然抗性不明显,但毒力较差(LC50分别为1.93和4.99 mg·L-1),故推荐防治用药,仍需进一步验证田间防效。结论:人工饲料药膜法和点滴法测得的抗药性趋势一致,但药膜法更加灵敏,测得的抗性更加明显;二化螟对常用杀虫剂的抗性普遍较高,对新型杀虫剂较为敏感,但不同地区有明显差异,这与各地的用药历史有关;不同地区的用药应依据药剂的毒力、当地的抗药性状况,以及田间药效来选择。     

南昌地区二化螟抗药性监测与治理

采用点滴法就2001~2006年南昌地区第1代二化螟幼虫对杀虫单、三唑磷、阿维菌素及氟虫腈的抗药性进行了监测。结果表明:南昌地区第1代二化螟幼虫对这4种药剂抗性水平趋于逐年增加。对杀虫单的抗性倍数为10.36~47.53,属中至高抗水平;对三唑磷的抗性倍数为7.44~33.98,属低至中抗水平;对阿维菌素的抗性倍数为3.22~8.72,由相对敏感发展到低抗水平;对氟虫腈的抗性倍数为2.47~4.98,为相对敏感阶段。并提出了二化螟抗药性的治理方法。     

氯氟氰菊酯对斜纹夜蛾抗性和敏感种群表皮穿透比较

 【目的】研究证实斜纹夜蛾对氯氟氰菊酯的抗性是否与其表皮穿透率降低有关。【方法】分别采用点滴法、浸叶法和叶片夹毒法测定了斜纹夜蛾（Spodoptera litura Fabricius）对氯氟氰菊酯的抗性,用14C标记氯氟氰菊酯测定了斜纹夜蛾抗性和敏感种群3龄和5龄幼虫的表皮穿透率。【结果】采用3种方法测定结果表明,3龄幼虫抗性水平的次序为点滴法（抗性倍数为2 765.4倍）＞浸叶法（365.1倍）＞叶片夹毒法（34.0倍）,点滴法、浸叶法及叶片夹毒法间抗性倍数之比依次为81.3﹕10.7﹕1;5龄幼虫抗性水平的次序为点滴法（抗性倍数为2 271.3倍）＞浸叶法（257.2倍）＞叶片夹毒法（20.2倍）,点滴法、浸叶法及叶片夹毒法间抗性倍数之比依次为112.4﹕12.7﹕1。经穿透昆虫表皮的触杀毒力所引起的抗性高于经口器和表皮进入的胃毒毒力和触杀毒力之和所引起的抗性,更明显高于经口器进入的胃毒毒力所引起的抗性。同位素标记氯氟氰菊酯测定结果表明,处理后0.5 h和1.0 h,抗性种群和敏感种群间表皮穿透率差异不显著,处理后2 h,两种群间的穿透率存在明显差异,至处理后8 h,敏感种群3龄和5龄幼虫的表皮穿透率分别为46.3%和43.3%,抗性种群3龄和5龄幼虫的表皮穿透率分别为35.7%和29.1%,氯氟氰菊酯对抗性种群3龄幼虫的表皮穿透率仅为敏感种群幼虫穿透率的0.77倍,对5龄幼虫的表皮穿透率仅为敏感种群幼虫穿透率的0.67倍,抗性种群的穿透率明显慢于敏感种群的穿透率。【结论】斜纹夜蛾抗性种群对氯氟氰菊酯的表皮穿透率明显低于敏感种群,可能是其产生抗药性的一个原因。     

沿江地区水稻二化螟的抗药性测定

采用高龄幼虫点滴法测定了水稻二化螟对杀虫单和三唑磷的抗性水平。结果表明 :二化螟种群对杀虫单达高抗水平 ,其LD50 为 2 .690 3 μg/头 ,抗性倍数达 463 .84倍 ,对三唑磷属低抗水平 ,其LD50 为 0 .0 3 99μg/头 ,抗性倍数为 3 .66倍。     

野桑蚕和家蚕para型钠离子通道蛋白基因结构域Ⅱ的克隆与突变

根据家蚕钠离子通道蛋白基因部分序列(GenBank登录号:EF521818)设计特异引物,通过RT-PCR方法,克隆了编码吴江野桑蚕(YWJ)和家蚕品种大造的钠离子通道蛋白结构域Ⅱ 的cDNA 片段,2个片段长均为1 135 bp,编码378个氨基酸,没有发现与击倒抗性(knock down resistance,kdr)相关的点突变,但发现2个点突变I164L和V196A,推测可能这2个突变与野桑蚕对溴氰菊酯的抗性有关.     

棉卷叶野螟的生物学与防治

棉卷叶野螟是绿篱植物——木槿的重要害虫。在福建大田,室内饲养1年发生5～6代,野外世代重叠,每代历期31～47天,以老熟幼虫在地上或草丛中结薄茧越冬,翌年5月上旬开始出现笫1代幼虫,10月下旬部分老熟幼虫开始越冬,部分继续发育为下代,直至12月中旬才越冬。幼虫6龄,卷叶为害,在室内对2～6龄幼虫喷洒90％的敌百虫晶体3000或5000倍液,80％敌敌畏3000或5000倍液和2.5％溴氰菊酯5000或10000倍液,田间用2.5％溴氰菊酯乳油5000倍液喷洒,均有良好防治效果。     

三种植物病原真菌对精纯多菌灵和嘧菌酯的抗性筛选

用含精纯多菌灵和嘧菌酯的培养基分别对水稻纹枯病菌、水稻稻瘟病菌、油菜菌核病菌进行室内抗药性筛选。发现水稻纹枯病菌随着筛选代数的增加,其EC50值上升明显,第12代对精纯多菌灵和嘧菌酯的抗性倍数分别达25.2倍和127.0倍。水稻稻瘟病菌随着筛选代数的增加,其EC50值变化不明显,第15代对两种药剂的抗性倍数分别为1.2倍和1.1倍。而油菜菌核病菌随着两种药剂的筛选,在含药培养基(药剂浓度为初发菌株的EC50)上的生命力迅速降低,抗性筛选无法进行。     

1.8%阿维菌素杀螨剂对木薯朱砂叶螨的室内抗性选育

采用室内喷药继代汰选法对1.8%阿维菌素进行木薯朱砂叶螨抗性筛选。结果表明:在室内选择条件下,从F_0至F_(10)代试虫对阿维菌素药剂的抗性一直缓慢上升,说明木薯朱砂叶螨对该药剂不易产生抗药性;死亡率在25%~75%时,要获得2.0倍以上抗性,1.8%阿维菌素品系室内选育需要7~10代。     

家蚕副肌球蛋白/小副肌球蛋白基因的克隆及进化分析

[目的]克隆家蚕副肌球蛋白／小副肌球蛋白基因,分析该基因与运动性状的关系。[方法]利用PCR扩增和RACE技术获得了家蚕（Bombyx mori）副肌球蛋白的全长cDNA和小副肌球蛋白的部分cDNA;经检索家蚕wgs（基因组散弹序列）数据,获得了家蚕副肌球蛋白／小副肌球蛋白的基因组序列,并确定其基因组结构。[结果]家蚕PM/mPM基因由17个外显子和16个内含子组成,通过基因内部选择性启动子的使用,该基因组序列同时编码副肌球蛋白和小副肌球蛋白,小副肌球蛋白和副肌球蛋白共用最后6个外显子。家蚕副肌球蛋白与其他无脊椎动物副肌球蛋白的聚类分析表明,家蚕和野桑蚕有最近的亲缘关系,在昆虫纲中与黑腹果蝇关系最远。[结论]家蚕和野桑蚕副肌球蛋白的氨基酸序列间不存在可引起飞行缺陷的点突变,推测家蚕和野桑蚕飞行能力差异存在其他调控机制。     

野桑蚕不同组织细胞色素P450 CYP305B1V1基因的诱导表达特征研究

[目的]研究不同诱导物对野桑蚕各组织中细胞色素P450CYP30581V1基因表达的影响。[方法]参照GenBank中公布的野桑蚕CYP305B1V1基因的mRNA序列,设计1对引物,采用半定量RT-PCR方法分析经NaF、芸香苷、氯氰菊酯和蜕皮激素处理的野桑蚕各组织中CYP305B1V1基因的表达情况,并对该基因的氨基酸序列进行同源性比较和进化分析。[结果]氯氰菊酯、芸香苷和NaF影响野桑蚕6TP305B1V1基因在组织中的表达,蜕皮激素无明显影响。氨基酸的同源性分析表明该基因氨基酸序列与家蚕CYP305B1的氨基酸序列同源性最高（100％）;与赤拟谷盗推测的CYP305A1、蜜蜂推测的CYP305A1、果蝇CYP305A1、冈比亚按蚊CYP305A2及库蚊CYP2L1有较高的同源性。[结论]野桑蚕CYP30581V1基因可能主要参与外源性化舍物的代谢,对揭示细胞色素P450的功能和不同药物的代谢机理具有重要意义。     

稀土镧对桑树生长及桑叶品质的影响研究

[目的]研究稀土镧对桑树生长及桑叶品质的影响。[方法]通过盆栽和室内试验相结合的方法,研究了不同浓度的镧对桑树生物量及桑叶叶绿素、淀粉、可溶性糖含量的影响。[结果]结果表明,低浓度镧（≤30mg／kg）可促进桑树生物量的生长及桑叶叶绿素、可溶性糖、淀粉含量的增加,30mg／kg时达到最大值,而镧浓度在高于30mg／kg时对桑树生物量的生长及可溶性糖、淀粉产生了明显的抑制作用,呈现低促高抑的“Hormesis效应”。当镧浓度达到试验设置的最高浓度600mg／kg时,桑树植株矮小,叶片生长明显受阻。[结论]该研究为稀土镧的农用提供科学依据。     

优质高产抗旱新桑品种川826选育

[目的]以优质、高产、抗逆为育种目标,对桑树新品种种质资源进行系统鉴定和综合评价。[方法]采用辐射与复合杂交相结合的育种方法,选育优质、高产、高抗桑树新品种,通过四川省桑品种区域试验和农村生产试验进行鉴定。[结果]新品种川826发芽率高、枝条直立、生长势旺;全年平均公顷桑产叶量比对照湖桑32号高13．95％;桑叶养蚕的万蚕产茧量比对照高8．88％,万蚕产茧层量比对照高8．8％,5龄担桑产茧量比对照高13．51％;秋叶硬化迟,抗干旱能力强。[结论]川826是一个优质、高产型桑树品种,综合性状优良。     

曼氏无针乌贼不同世代养殖群体的形态学比较

[目的]对曼氏无针乌贼不同世代养殖群体进行形态学比较。[方法]采用形态学分析方法,通过单因素方差分析和多重比较对浙江舟山地区曼氏无针乌贼F_1、F_2、F_3养殖世代群体的形态学指标进行了比较。[结果]在检测的10项形态学指标中,体重、胴宽、海螵蛸壳重、壳长、壳高在3个养殖世代间存在显著差异(P0.05),但胴长/胴宽在3个养殖世代间无显著差异(P0.05)。[结论]研究结果为曼氏无针乌贼的种质资源保护与开发提供了一定的理论依据。     

不同饲育回数对洞庭和碧波原蚕综合性状的影响

［目的］研究洞庭、碧波原蚕在贵州地理环境和气候条件下的性状表现。［方法］将洞庭、碧波原种催青收蚁后,以一日四回育为对照,设二回育和三回育2个试验区,各3次重复,小区蚁量1 g,于2009年春季开展全龄不同饲育回数的试验研究。［结果］全龄不同饲育回数对洞庭、碧波原蚕的发育经过没有明显影响,但对碧波原蚕的幼虫生命力和发育整齐度影响较大。其中,发育整齐度和眠起情况均以二回育区最不整齐,小蚕发生率为2.43%,分别是三回育和四回育的2.25、2.93倍;4～5龄期发病率和蔟中死蚕率均为0.50%,分别比三回育和四回育各高出0.32、0.17和0.32、0.17个百分点。洞庭品种4龄结茧率各处理间差异不显著,碧波品种4龄结茧率三回育和四回育与二回育之间均存在显著差异;洞庭、碧波品种对4龄健蛹率各处理间差异不显著;洞庭品种单蛾产卵量和单蛾良卵数四回育和三回育与二回育之间均存在显著以上差异,碧波品种各处理间产卵成绩差异不显著;洞庭、碧波品种单蛾不受精卵数和单蛾死卵数各处理间差异不显著。［结论］在贵州春季气候环境和桑叶基础条件下,洞庭、碧波原蚕采用全龄一日三回育完全可行,二回育不宜采用。     

气质联用检测蔬菜中菊酯类农药残留量研究

[目的]探讨采用气质联用检测蔬菜中菊酯类农药的残留量。[方法]以常见的4种蔬菜为材料,应用气相色谱/质谱联用方法,研究了色谱柱极性与扫描方式对测定蔬菜中5种菊酯类农药残留量的影响。[结果]使用较强极性的毛细管柱（如DB-17MS）可降低蔬菜中菊酯类农药的检出限。在确定每种菊酯类农药特征离子的基础上,采用选择离子监控扫描（SIM）,可显著降低蔬菜中菊酯类农药的检出限,4种蔬菜中5种菊酯类农药检出限范围在0.002 53～0.191 00 mg/kg。SIM扫描方式的检出限较全扫描方式降低了5.3～33.4倍。[结论]为提高采用GC/MS测定某些不稳定菊酯类农药的灵敏度提供了参考。     

多丝量家蚕品种9601×92的育成及推广

[目的]研究多丝量家蚕品种9601×92的选育及其性状表现。[方法]在家蚕中导入野桑蚕的基因,育成了一对春用品种"9601×92",对其主要经济性状和推广情况进行研究。[结果]与对照种菁松×皓月相比,该品种万头收茧量提高7.49%;万头茧层量提高10.72%;万头产丝量提高8.50%;50 kg桑产茧增加4.18%;5龄蚕50 kg桑产丝量提高4.81%。经多点试养,该品种主要经济性状稳定,丝质优良,尤其是净度好,生产试养中其张种比菁松×皓月增产4.8 kg,茧层率提高1个百分点,张种增值80多元。[结论]该品种具有高产、优质、体健、好养、易繁的特点,综合经济性状优良,适应性强,可在山东省及北方蚕区等适宜地区饲养,是一对春、秋兼用的优质高产家蚕新品种。     

小蚕人工饲料育对蚕卵生理生化及蚕生长发育的影响

以家蚕原种为研究材料,探讨小蚕用人工饲料育及继代中,蚕生长发育、蚕卵蛋白质质量分数及SOD和CAT活力的变化情况．结果表明：（1）932和芙蓉经过3代的选择,疏毛率分别从14．6％和9．4％提高到52．4％和53．8％,存活率从20．5％、19．2％提高到38．2％、32．0％;而湘晖、7532选择效果不明显．（2）人工饲料育的湘晖和7532的卵蛋白质质量分数都比桑叶育低;而932和芙蓉三代的卵蛋白质质量分数分别保持在52．50～55．00和41．50～52．50mg／g,与桑叶育基本保持不变．（3）蚕卵的SOD和CAT的活力与蚕品种和饲料有关,人工饲料育蚕卵的SOD和CAT活力比桑叶育高．