3种锥栗外生菌根真菌培养条件的单因素优化

明确3种锥栗外生菌根真菌的最适培养条件,为锥栗外生菌根真菌进一步研究和生产应用奠定基础。采用固体培养方法,用十字交叉法测量菌落的直径,研究不同温度（15、20、25、30℃和35℃）、pH值（4.0、5.0、6.0、7.0、8.0）、碳源（葡萄糖、蔗糖、甘露醇、麦芽糖、可溶性淀粉）、氮源（KNO₃、（NH₄）2HPO₄、NH₄NO₃、蛋白胨、酵母膏）对3种锥栗外生菌根真菌生长的影响。结果表明,3种锥栗外生菌根真菌最佳生长条件差异不大,最适生长温度均为25℃,属中温菌;3种外生菌根真菌在pH4.0~8.0均能生长,鸡枞菌(Termitornyces albuminosus)和正红菇(Russula griseocarnosa)最适生长pH为6.0,橙黄硬皮马勃(Scleroderma citrinum)为7.0;3种外生菌根真菌的最适碳源均为甘露醇,最适氮源均为KNO₃。     

4种外生菌根真菌培养条件的研究

【目的】明确黄地勺菌(Spathularia flavida)、美丽褶孔牛肝菌(Phylloporus bellus)、灰鹅膏菌(Am-anita vaginata)和褐黄牛肝菌(Boletus luridus)的最佳培养条件,为其菌丝体扩繁和菌剂生产奠定基础。【方法】采用固体培养,用十字交叉法测量菌落直径,研究不同温度(5,10,15,20,25,30,35,40℃)、pH(3.0,4.0,5.0,6.0,7.0,8.0,9.0)、碳源(葡萄糖、麦芽糖、乳糖、可溶性淀粉、甘露醇)及氮源(磷酸氢二铵、硝酸铵、硝酸钾、蛋白胨、麦芽浸膏)对4种外生菌根真菌生长的影响。【结果】4种外生菌根真菌生长的最佳条件不一:黄地勺菌、美丽褶孔牛肝菌和灰鹅膏菌最适生长温度为25℃,属中温菌,褐黄牛肝菌为30℃,属耐高温菌;4种外生菌根真菌在pH 3.0~9.0都能生长,黄地勺菌和美丽褶孔牛肝菌最适生长pH为8.0,灰鹅膏菌为6.0,褐黄牛肝菌为7.0;黄地勺菌、美丽褶孔牛肝菌、灰鹅膏菌和褐黄牛肝菌生长速度最快的碳源分别为甘露醇、葡萄糖、可溶性淀粉和麦芽糖;黄地勺菌、美丽褶孔牛肝菌和褐黄牛肝菌生长最适氮源均为麦芽浸膏,灰鹅膏菌为蛋白胨。【结论】初步确定了4种外生菌根真菌的最佳培养条件。     

罗田板栗外生菌根真菌多样性研究

【目的】为了解中国板栗主产区(罗田)的板栗地下外生菌根真菌多样性,对罗田地区80年以上的代表性板栗园的板栗外生菌根真菌群落组成和形态特征进行研究,并在形态分类的基础上对其进行分离鉴定。【方法】共采集到300份板栗根系样品,根据形态、颜色和分叉程度等特征进行分类后获得55个外生菌根类型。每种类型选取3个重复根段制备混合样品,对混合样品进行ITS分析。【结果】前50位的OTU分属于34属、15个未分类种和其他类群。其中丰度前20的类群占95.99%:Basidiomycota约占60%,包含Lactarius、Guehomyces、Inocybe、Russula和unclassified＿Thelephoraceae 5个主要属;Ascomycota约占30%;Mortierellomycota约占5%,其余5%则属于未分类的真菌。在分离得到的22种外生菌根真菌中,Trichoderma物种丰富度最高(6种),其次是Fusarium(4种)、Penicillium(3种)、Talaromyces(3种)、Pestalotiopsis(2种),Ilyonectria、Castanediell...     

镇安板栗外生菌根真菌多样性研究

为了明确秦岭山区与板栗共生的外生菌根真菌群落组成,以西北农林科技大学镇安板栗教学实验基地板栗试验林为对象,对板栗外生菌根真菌群落结构进行了研究。在形态学鉴定的基础上,综合运用ITS序列分析技术,共检测到27种外生菌根真菌与板栗共生,其中3种为子囊菌,24种为担子菌,分属8科,9属;优势种不明显,常见种有Russula sp.1、Tomentella sp.3、Inocybe sp.、Russula livescens,其他23种均属于稀有种;优势类群为Russula、Tomentella2属。Russula、Tomentella外生菌根真菌是与秦岭山区板栗共生的优势真菌类群,可能在促进板栗植株生长、提高板栗品质等方面发挥着重要作用。研究结果为秦岭山区板栗共生外生菌根筛选以及板栗林生产培育等方面提供了一定的理论依据。     

15种外生菌根真菌在4种培养基上的生长效果研究

通过4种培养基上15株外生菌根真菌的对照培养，以生长速度和生物量为依据，对各菌株的培养效果进行了评价．在MMN培养基上适宜培养的真菌有Rhizopogenluteolus、Suillusbovinuss、Pisolitlustinctorius、Boletusmagnificus和Boletusporosporus;Sclerodermapolyrhizum适宜在PDA培养基上生长；有几种菌根真菌在4种培养基上生长效果不理想．     

板栗共生菌根真菌种类及其发生规律的研究

经调查能与板栗形成外生菌根的真菌有１３属２９种，分布的优势真菌有马勃属（ｌｙｃｏｐｅｒｄｏｎ）、须腹菌属（Ｒｈｉｚｏｐｏｇｏｎ）、秃马勃属（Ｃａｌｖａｔｉａ）、红菇属（Ｒｕｓｓｕｌａ）、牛肝菌属（Ｂｏｌｅｔｕｓ）、鹅膏属（Ａｍａｎｉｔａ）、松塔牛肝菌属（Ｓｔｒｏｂｉｌｏｍｙｃｅｓ）等。外生菌根真菌与板栗共生关系的强弱主要取决于真菌种类，马勃类和须腹菌与板栗共生菌根发育最好，其次为红菇属及牛肝菌属。不同真菌发生的规律不同，但子实体“潮”的出现与降雨最为密切。土壤通气性好、湿度较大有利于菌根真菌子实体发生，新开展育苗的苗圃地菌根种类不甚丰富。菌根的生长伴随着板栗新根的发生和生长。     

庐山外生菌根真菌的分布

根据不同的季节对庐山林区的真菌进行了点与面的调查。共报道了庐山的外生菌根真菌１４属３１种,对它们发生时期、菌的生长习性和分布进行详细的报道。尤其它们的分布与海拔高度、植被类型和土壤类型息息相关,这为进一步对该林区森林生态系统中与这些菌类有关的物质转化和能量循环的探讨和研究提供了相关的依据。     

太白山自然保护区外生菌根及菌根真菌调查研究

报道了太白山自然保护区外生菌根及菌根真菌的调查研究结果，共获得外生菌根真菌28种，隶属6科18属，查明主要菌根树种是巴山冷杉（Abies fargesii Franch)和太白红杉（Larix chinensis Beissn)，主要菌根真菌是红菇（Russuluceae)和牛肝菌（Boletaceae)，并对其生态分布进行了分析，以亚高山（Subalpine belt)南2850－3300m，北坡3000－3200米，区带最适合于菌根（Mycorrhiza)及菌根真菌子实体（Mycorrhiza fungi fruit bodies)的形成。     

生防外生菌根真菌的筛选及其生长和发酵条件优化

为了筛选具有广谱拮抗活性的外生菌根真菌,采用平板对峙法(初筛)和生长速率法(复筛)测定了6种外生菌根真菌对5种常见植物病原真菌的抑制活性,通过单因素试验对抑制效果较好的生防菌进行生长及发酵条件优化。结果表明,彩色豆马勃Pt01在初筛试验中对植物病原真菌的抑菌率为40.1%~49.7%,在复筛试验中抑菌率为78.5%~91.8%,抑菌作用整体高于其他外生菌根真菌。条件优化后发现,Pt01在28℃、p H值为7.0、碳源为乳糖、氮源为硝酸钾时生长最好;其最佳发酵条件:温度为30℃,初始p H值为6.0,碳源为乳糖,氮源为酵母膏,时间为5 d,转速对不同病原真菌抑菌率各有不同影响,需要单独考虑最佳转速。彩色豆马勃菌株Pt01对5种受试病原真菌均有明显的抑制作用,优化其生长和发酵条件为其在植物病害防治上的应用提供了理论依据。     

在高寒地区落叶松育苗中应用外生菌根真菌的效应

人工接种外生菌根真菌对高寒地区落叶松容器苗、播种苗及移植苗的生长均有明显的促进作用，用苗高、地径、侧根、干重、菌根化程度等均比对照指标有明显提高。落叶松由原来的２年入为１年生苗上山造林效果良好，缩短了苗木的生长周期，提高了经济效益。经反复试验及各项生长指标综合分析、筛选出的优良菌种为Ｓｕｉｌｌｕｓ ｇｒｅｖｉｌｌｅｉ、Ｂｏｌｅｔｕｓ ｓｐ．、Ｃｏｒｔｉｎａｒｉｕｓｒｕｓｓｕｓ、Ｌａｃｔａｒｉｕｓ     

基于SSR标记的燕山板栗种质资源遗传多样性分析

利用筛选出的21对SSR引物对7个燕山板栗群体142份资源和1个太行山板栗群体9份资源进行遗传多样性分析,并构建不同群体的聚类树状图和主坐标分析图,旨在为燕山板栗种质资源的遗传背景明晰和创新利用提供依据。结果表明:21对引物共检测到71个等位变异位点,变异范围为2～6,平均每对SSR引物可检测到3.38个等位位点;多态性信息含量为0.614 5～0.972 3,平均0.866 8。8个板栗群体有效等位基因数Ne、Nei’s多样性指数H、Shannon’s信息指数I、总遗传多样性指数Ht、群体内遗传多样性指数Hs分别为1.457 8、0.309 9、0.468 0、0.306 2和0.291 2,说明燕山板栗群体的遗传多样性和变异度较高,其中遵化群体的多态性位点百分率最高,为97.18%,青龙和迁西群体次之,分别为95.77%和94.37%,表明遵化、迁西一带是燕山板栗资源遗传多样性最为丰富的区域。UPGMA聚类分析表明,迁西和宽城群体间的遗传相似性最大,亲缘关系最近;怀柔和邢台(太行山)群体间的遗传相似性最小,遗传差异较大。聚类分析图和主坐标分析图可将燕山板栗主产区青龙、迁西、宽城、兴隆、遵化和怀柔群体资源划为1类,而处于太行山区邢台群体为1类,说明燕山板栗和外来品种存在明显的差异,各群体的遗传关系和地理来源有一定关联性。     

青蒿素对外生菌根真菌化感效应

青蒿素是治疗疟疾的首选药物,主要从黄花蒿(Artemisia annuaL.)中提取,然而黄花蒿在生长过程中会向周围环境分泌青蒿素.为正确评估青蒿素对森林生态系统中的重要成分——外生菌根真菌的影响,试验以重庆地区有代表性的两株外生菌根真菌——褐环乳牛肝菌(Suillus luteus)Sl 8和松乳菇(Lactarius delicious)Ld3为材料,研究了青蒿素对菌丝生长,H+和有机酸分泌,以及养分吸收的影响.结果表明,在液体培养基中加入青蒿素,外生菌根真菌的生长受到明显抑制,菌丝生物量降幅高达26.89％(Ld3)和89.13％ (Sl 8);Ld3分泌H+和草酸的能力增强,而Sl8分泌量下降.随着青蒿素浓度的增加,菌丝的N、P、K含量及吸收量显著减少.当培养基中青蒿素达到80 mg/L时,Ld3的N、P、K吸收量比不加青蒿素的处理分别降低了50.55％、46.30％和42.28％;Sl8几乎丧失对N、P、K的吸收能力.说明青蒿素不同程度地抑制了外生菌根真菌的生长和养分吸收,但对H+和草酸的分泌作用因菌株不同而异.     

微塑料对外生菌根真菌生长和抗氧化系统的影响

土壤中的微塑料污染及其毒理学效应已逐渐引起广泛关注,但微塑料对外生菌根真菌的毒性研究仍不多见。为此,以彩色豆马勃(Pisolithus tinctorius,Pt)和松乳菇(Lactarius delicious,Ld)作为供试菌株,选用粒径80 nm和4 μm的单分散聚苯乙烯塑料微球(PS-MPs)作为试验材料,采用固体平板法和液体培养法研究不同粒径不同质量浓度(10~300 mg·L^-1)的PS-MPs对外生菌根真菌生长情况、丙二醛(MDA)含量、可溶性蛋白含量、抗氧化酶活性、组织电导率等指标的影响。结果显示,高浓度(200~300 mg·L^-1)的PS-MPs显著(P<0.05)抑制2株真菌的生长,且粒径4 μm的PS-MPs较粒径80 nm的对两株真菌的生物量表现出更强的抑制作用。随PS-MPs质量浓度的升高,Pt和Ld的超氧化物歧化酶活性始终显著(P<0.05)高于对照,且表现出先升高后降低的趋势。当暴露于2种粒径的PS-MPs之中时,Pt和Ld的过氧化氢酶活性均在300 mg·L^-1处理下最低,且显著(P<0.05)低于对照;而过氧化物酶活性在各处理下均显著(P<0.05)高于对照。与对照相比,PS-MPs处理下,Pt和Ld的MDA含量显著(P<0.05)升高(除10 mg·L^-1 4 μm PS-MPs处理下的Pt和200 mg·L^-1 4 μm PS-MPs处理下的Ld外),可溶性蛋白含量显著(P<0.05)降低(除10、20 mg·L^-1 80 nm PS-MPs处理下的Pt和10 mg·L^-1 80 nm PS-MPs处理下的Ld外),菌丝组织电导率显著(P<0.05)升高。据此推测,PS-MPs对外生菌根真菌的影响机制可能涉及氧化应激反应,且不同菌株对不同粒径PS-MPs的响应不同。研究结果可为揭示微塑料对土壤外生菌根真菌的急性毒性提供依据。     

酸碱度和重金属对3种外生菌根真菌生长的影响

为了测定重金属、pH值对外生菌根真菌(ECMF)生长的影响以及探讨ECMF耐重金属的机制,该文利用纯培养方法测定了pH值、不同浓度重金属锌、铜和铅胁迫对粘盖牛肝菌、褐环粘盖牛肝菌和褐黄牛肝菌3种ECMF生长的影响,以及重金属处理和ECMF培养前后培养基pH值的变化。结果表明,在pH值4.1～7.1的范围内3种ECMF均可生长,其中粘盖牛肝菌生长的最佳pH值为6.7～7.1,褐环粘盖牛肝菌和褐黄牛肝菌为5.3～6.7。不同重金属对3种ECMF的生长影响不同,锌浓度≥100 mg/L时就显著抑制褐环粘盖牛肝菌和褐黄牛肝菌的生长,而锌浓度≥600 mg/L时才显著抑制粘盖牛肝菌的生长,低浓度(100～300 mg/L)的锌对粘盖牛肝菌的生长影响最小,粘盖牛肝菌对锌有较强的耐性。10～1 000 mg/L的铜对3种ECMF的生长均有抑制作用(10 mg/L铜对褐环粘盖牛肝菌除外),且随着铜浓度的增加,抑制率逐渐增大,当铜浓度为1 000 mg/L时,对褐环粘盖牛肝菌和褐黄牛肝菌的抑制率均为100%,而对粘盖牛肝菌仅为20.42%,说明粘盖牛肝菌对铜的耐性最强。低浓度的铅(褐环粘盖牛肝菌0～600 mg/L,褐黄牛肝菌和粘盖牛肝菌0～200 mg/L)对3种ECMF的生长具有促进作用,但对褐环粘盖牛肝菌的促进效果最明显,对褐黄牛肝菌的促进效果最差,当铅浓度较高时(褐环粘盖牛肝菌1 000 mg/L,褐黄牛肝菌和粘盖牛肝菌600 mg/L)开始抑制3种ECMF生长。3种重金属胁迫下3种ECMF培养前后pH值变化总体趋势相同:不同浓度重金属处理间及ECMF培养前后pH值均存在极显著差异(P＜0.01)。随着重金属浓度的增加,pH值逐渐降低。ECMF培养后pH值降低,且重金属处理的培养基pH值比对照降低更多。      

锰对外生菌根真菌生长、养分吸收及有机酸分泌的影响

在液体培养条件下,研究了不同质量浓度锰对外生菌根真菌Pt 715、Sl 13和Cg 04菌丝生长、草酸和乙酸分泌,以及氮、磷、钾吸收的影响。结果表明:Pt 715的生物量最高, Sl 13次之,Cg 04最低。锰显著抑制菌丝生长,菌丝生物量（y）与培养基中的锰质量浓度（0～800 mg/L）呈y=ax+b的关系（a0）;但锰对Pt 715和Sl 13生长的抑制作用较小,说明这2株外生菌根真菌抗锰能力较强,其原因可能是它们长期生存于活性锰含量较高的酸性土壤中,产生了环境适应性,逐渐进化出对锰的抗性。此外,Cg 04和Pt 715不分泌乙酸,但分泌草酸的速率随锰质量浓度的增加而提高;Sl 13能分泌乙酸,在锰质量浓度较高时,分泌草酸的速率显著降低,说明分泌草酸络合锰可能不是外生菌根真菌抗锰的唯一生化途径。Pt 715和Sl 13的氮、磷、钾吸收量显著高于Cg 04。在培养基中添加锰尤其是较高质量浓度的锰（800 mg/L）,Pt 715和Sl 13吸收养分的降幅显著低于Cg 04（除氮外）,降幅比Cg 04低20.28%～15.44%（磷）和51.20%～27.27%（钾）。在锰胁迫条件下,菌丝保持较强的养分吸收能力有益于细胞的健康,增强其抗锰能力,对于提高寄主植物的抗锰能力也可能有积极意义。      

霉变板栗病原真菌的分离与致病性测定

从霉变板栗样品中分离出10种真菌，根据其菌落特征及繁殖方式，进行了初步分离和致病性测定，结果表明，青霉菌、曲霉菌、毛霉菌、炭疽菌和疫霉菌的致病力都在80%以上，混合菌感染为100%。     

锰离子胁迫下外生菌根真菌对土壤钾释放的影响

外生菌根真菌作为森林生态系统的组成部分,参与植物的养分吸收和利用。试验以彩色豆马勃(Pisolithus tinctorius,Pt)和松乳菇(Lactarius deliciosus,Ld)作为供试菌株,以土壤作为培养基唯一钾源,采用液体培养的方法,研究不同锰离子质量浓度下2株供试菌株活化土壤难溶性钾的能力与机理。结果显示,2株外生菌根真菌的生物量随锰离子质量浓度升高而减低,生长受到显著(P<0.05)抑制。在相同锰离子质量浓度下,菌株Pt的菌丝生物量均大于Ld,说明Pt的抗锰能力强于Ld。2株外生菌根真菌均分泌草酸和乙酸,培养基中的pH下降。同时,2株外生菌根真菌均能降低土壤中矿物结构钾的含量,并增加土壤中交换性钾含量,说明在锰离子胁迫下,外生菌根真菌能活化土壤中的难溶性钾。相关分析表明,培养液中草酸分泌量与土壤交换性钾含量呈极显著(P<0.01)正相关,与土壤矿物结构钾含量呈显著(P<0.05)负相关,培养基中的pH与土壤中交换性钾含量呈极显著(P<0.01)负相关。推测外生菌根真菌分泌的有机酸和氢离子有利于土壤难溶性钾的活化,其中草酸可能起到关键作用。由...     

菌根伴生真菌对外生菌根真菌生长及其中性蛋白酶活性的影响

【目的】筛选产中性蛋白酶活性较高的外生菌根真菌及最佳诱导底物。【方法】以酵母粉(对照)和4种菌根伴生真菌(Trichoderma harzianum HDTP-1、T.harzianum HDTP-3、Mucor hiemalis SA10-6 HDTP-4和M.hiemalis XSD-98 HDTP-5)灭活菌丝体为诱导底物,研究其对粘盖牛肝菌(Suillus bovines)、褐环粘盖牛肝菌(Suil-lus luteus)、褐黄牛肝菌(Boletus luridus)和铆钉菇(Gomphidius viscidus)4种外生菌根真菌生物量及其所产中性蛋白酶活性的影响。【结果】4种菌根伴生真菌均明显促进了褐环粘盖牛肝菌、粘盖牛肝菌和褐黄牛肝菌的生长,其中Mucorhiemalis SA10-6HDTP-4对褐环粘盖牛肝菌的促进效果极显著,而4种菌根伴生真菌对铆钉菇的生长均有不同程度的抑制,其中Trichoderma harzianum HDTP-3的抑制作用最强。4种菌根伴生真菌诱导的4种外生菌根真菌所产的中性蛋白酶活性,均以褐黄牛肝菌最高,铆钉菇最低;M.hiemalis XSD-98 HDTP-5诱导褐环粘盖牛肝菌所产中性蛋白酶活性最高,T.harzianum HDTP-3最低;M.hiemalis XSD-98 HDTP-5诱导粘盖牛肝菌所产中性蛋白酶活性极显著高于酵母粉和其他3种菌根伴生真菌,但其诱导褐黄牛肝菌和铆钉菇所产中性蛋白酶活性仅极显著高于其他3种菌根伴生真菌。【结论】4种菌根伴生真菌中,M.hiemalis XSD-98 HDTP-5是外生菌根真菌产中性蛋白酶的最佳诱导底物;而4种外生菌根真菌中,褐黄牛肝菌所产中性蛋白酶活性最高。     

板栗花粉液体培养方法的建立

[目的]为了优化板栗花粉的液体培养体系,研究蔗糖、硼酸和氯化钙的浓度等因素对花粉萌发率的影响.[方法]以‘燕红’为材料,在蔗糖、硼酸、氯化钙单因子试验的基础上,采用正交试验设计筛选板栗花粉液体培养的最适条件.[结果]研究结果表明:最终筛选的板栗花粉最适液体培养条件为:15％蔗糖、0.005％硼酸和0.04％氯化钙,最适pH值为6.5,培养温度为34℃,转速为175 r/min.在此条件下,保存一年的花粉萌发率仍可达到28.86％.[结论]说明板栗花粉的萌发率受培养基组分、pH、转速和培养温度等条件影响.