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牛早期胚胎性别鉴定PCR反应体系的优化研究 总被引:29,自引:2,他引:29
根据牛SRY基因序列设计合成2对巢式PCR引物作为性别鉴定引物,根据牛酪蛋白基因序列设计了一对引物作为内标引物建立了牛胚胎性别鉴定的PCR反应体系。同时对常规PCR和巢式PCR在牛早期胚胎性别鉴定中的实用性进行比较。15头公牛、13头母牛的DNA样品检测结果表明:使用巢式PCR公牛可以扩增出205bp的SRY基因片段和403bp的酪蛋白基因片段,母牛只能扩增出403bp的酪蛋白基因片段;而使用常规PCR时公牛扩增出255bp的SRY基因片段和403bp的酪蛋白基因片段,母牛只能扩增出403bp的酪蛋白基因片段,其性别鉴定结果和实际完全一致。由于巢式PCR只需10个细胞就可以在紫外透射分析仪下看到扩增结果,而常规PCR则需要20~30个细胞,所以胚胎性别鉴定时使用巢式PCR效果更好。试验采用巢式PCR鉴定了10个奶牛胚胎的性别,同时还对血清是否会对试验结果产生影响进行了研究。 相似文献
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PCR在牛早期胚胎性别鉴定中的应用 总被引:6,自引:1,他引:6
早期胚胎性别鉴定的方法有很多种,大致可分为两大类:一是前期主要采用的非生物学方法,如组织方法,免疫学方法[~[p16]〔1〕],X-相关酶法[~[p16]〔2〕]等,这些方法都缺少准确性和速度;二是80年代末,随着DNA体 外重组技术而发展起来的分子生物学方法,如DNA探针法〔3〕,聚合酶链反应法(PCR)。其中PCR法以灵敏、特异、准确和快速等特点,而成为胚? 胎性别鉴定中最有研究价值的技术方法。自Herr等(1990)[~[p16]〔4〕]报道了用PCR进行奶牛胚胎性别鉴定技术之后,国内外许多学者从事了这方面的研究 ,使准确率接近或达到了[=]100%,同时操作过程也简化了许多,并且可以在几个小时内完成,为PCR法进行早期胚胎性别鉴定应用于生产提供了基础。 相似文献
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应用PCR技术鉴定牛早期胚胎性别的研究 总被引:6,自引:0,他引:6
应用PCR技术鉴定牛早期胚胎性别的研究吕碧文俞颂东金水仙(浙江省农科院畜牧兽医所,杭州,310021)家畜胚胎的早期性别鉴定技术,是家畜胚胎移植技术的一项重要内容,其实质就是Y染色体或存在于Y染色体上的性别决定基因(即SRY基因)的检测技术。PCR... 相似文献
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本文对PCR(聚合酶链式反应)的基本原理、优点、方法及其在牛胚胎性别鉴定中的应用情况进行了扼要综述。 相似文献
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非电泳法PCR牛早期胚胎性别鉴定研究 总被引:5,自引:0,他引:5
为选出更高效、实用的牛胚胎性别鉴定方法,分别用成年牛血样提取的基因组DNA和冷冻的牛早期胚胎细胞DNA为样本,以电泳法和非电泳法用相应的性染色体DNA引物做胚胎PCR性别鉴定实验,以相对比。血液模板DNA结果与胚胎样本结果都表明,使用DYZ-1引物的非电泳法在比使用SE引物的电泳节约1h以上时间的同时,具有比SE更高的灵敏度。这次研究在我国首次成功地把非电泳PCR法应用到牛胚胎性别鉴定之中,减少了胚胎性别鉴定的操作步骤,并大大缩短了性别鉴定所需要的时间,从而使胚胎移植现场性别鉴定更加可行。 相似文献
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应用PCR技术鉴定牛早期胚胎性别方法优化的研究 总被引:7,自引:0,他引:7
研究的目的是优化胚胎PCR性别鉴定方法的条件,建立实用的鉴定方法。试验设计获得了牛种属和公牛特异的引物,利用聚合酶链反应(PCR)对模板DNA进行扩增,通过常规双重PCR法和巢式PCR法的比较研究,结果表明巢式PCR法大大提高了鉴定牛早期胚胎性别的灵敏度。对组织DNA样品、血样、颗粒细胞和公牛冷冻精子进行检测,结果全部与实际性别一致;对于胚胎样品,判定结果与产犊性别一致。通过批量胚胎现场的检测,证明建立的胚胎性别鉴定方法可用于生产。 相似文献
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用PCR鉴别牛胚胎性别的研究 总被引:17,自引:2,他引:15
本试验建立了用聚合酶链反体外扩增牛Y染色体特异DNA序列鉴别牛胚胎性别的方法。选择3头成年健康西门塔尔母牛为供体,在其自然发性后第9~14d,用FSH超排处理,人工授精,发情后的第7d(发情日为0d),用非手术法采集胚胎,共获得11枚A.B级胚胎。在立体显微镜下分别对胚胎进行分割,各获得2个半胚。一个法胚在20μL含10mmol/L Tris-HCL(pH8.3)、50mmol/L KCl,2mo 相似文献
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牦牛胚胎性别鉴定PCR反应体系的建立 总被引:1,自引:0,他引:1
研究旨在建立牦牛胚胎性别鉴定准确、可靠的PCR反应体系及研究切割取样对胚胎发育能力的影响.根据牦牛SRY和HSL基因序列分别设计合成2对巢式PCR引物作为性别鉴定引物和2对引物作为内标引物,通过优化PCR反应条件,对已知性别牦牛血液基因组DNA和牦牛杂种胚胎DNA采用巢式PCR进行性别鉴定.结果表明,血液样本性别鉴定与实际性别完全相符,准确率100%.从早期胚胎取8个细胞进行性别鉴定,结果雄性为45.8%(11/24),雌性为54.2%(13/24),取样后胚胎发育率为56.7%.结果说明已成功建立牦牛胚胎性别鉴定的PCR体系. 相似文献
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常规PCR和巢式PCR法鉴定牛早期胚胎性别体系的建立和优化 总被引:1,自引:0,他引:1
试验利用牛Y染色体重复序列作为雄性特异性引物,_以肿蔼坏死因子(TNFα)为内标引物建立多重PCR和多重巢式PCR体系,进行牛早期胚胎性别鉴定.共设计4对引物-Y染色体重复序列外引物和内引物,其扩增片段大小分别为534 bp和480bp,肿瘤坏死因子外引物和内引物,扩增片段大小分别为357 bp和272 bp.结果表明,4对引物均有很高的特异性和稳定性;多重PCR体系灵敏度为50 pg(约8个细胞),多重巢式PCR体系灵敏度为10 pg(约2个细胞),故多重巢式PCR体系更适合于牛胚胎性别鉴定. 相似文献
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对影响后的性别鉴定胚胎移植妊娠率的因素进行了分析。结果表明,性别鉴定胚胎的鲜胚和冻胚移植妊娠率均低于非性别鉴定胚胎,但二者差异不显著(P>0.05),这表明性别鉴定胚胎在生产中应用是可行的。随着胚胎细胞取样数的增多,其移植妊娠率逐渐下降,且冷冻带来的损伤明显增大;性别鉴定胚胎在体外放置时间小于5 h的妊娠率比大于5 h的高,且差异极显著(P<0.01);性别鉴定胚胎移植时受体的最佳移植时间在发情后的7.5~8.5 d;繁殖力好的受体牛移植妊娠率比繁殖力差的受体牛移植妊娠率高,且差异极显著(P<0.01)。 相似文献