甘蓝原生质体培养研究进展

综述了国内外学者对甘蓝原生质体的分离和培养、再生植株的获得、原生质体融合及其在育种上的应用等方面的研究 ,并对今后的研究进行了展望。     

我国蔬菜原生质体培养研究进展

综述了国内学者对蔬菜原生质体培养包括原生质体的来源和预处理,原生质体的分离和培养,再生植株的获得以及原生质体融合等方面的研究进展。     

甘蓝类蔬菜遗传转化研究进展

综述了甘蓝类蔬菜再生体系的建立、导入的目的基因、遗传转化方法、转基因植株筛选与检测的研究进展。     

甘蓝类蔬菜优质高产施肥管理

针对不同类型甘蓝类蔬菜如花椰菜、结球甘蓝等,根据其不同生育期养分需求特点,分别介绍了4种甘蓝类蔬菜的施肥管理方法.     

小孢子技术在甘蓝类蔬菜育种中的应用

综述了甘蓝类蔬菜小孢子技术发展的概况及其在育种工作中的应用进展,如利用远缘杂交或种间杂交与小孢子技术相结合创制育种新材料;利用小孢子技术进行抗病、抗逆种质的筛选;小孢子技术与诱变技术相结合创制突变体等。分析了小孢子技术在应用中存在的问题,并对未来的研究发展方向进行了展望。     

番茄及其近缘野生种茎段原生质体培养的研究

利用番茄茎段作为原生质体来源的外植仁,在适宜的培养基中,成功地获得了野生秘鲁番茄（Ｌｙｃｏｐｅｒｓｉｃｏｎ ｐｅｒｕｖｉａｎｕｍ Ｍｉｌｌ．）、栽培番茄‘粤农２号’（Ｌｙｃｏｐｅｒｓｉｃｏｎ ｅｓｃｕｌｅｎｔｕｍ ‘Ｙｕｅｎｏｎｇ Ｎｏ．２’）和番茄近缘里生种类番茄茄（Ｓｏｌａｎｕｍ ｌｙｃｏｅｒｓｉｃｏｉｄｅｓ Ｄｕｎ．）的再生植株。３种材料的再生植侏移植到土壤中均能正常生长,植株性状与对照无差     

甘蓝类蔬菜的“一球二花”

甘蓝类蔬菜家族中包括许多成员,诸如结球甘蓝、花椰菜、青花菜、球茎甘蓝、芥蓝、抱子甘蓝……。其中我国栽培与食用最多的是“一球”（结球甘蓝）和“二花”（花椰菜、青花菜）。１　结球甘蓝 结球甘蓝简称甘蓝,又名洋白菜、卷心菜、包菜、莲花白、圆白菜、大头菜、疙瘩白等。它起源于地中海至北海的陡峭岸边,是由半丛生、不结球的野生甘蓝进化而来的。大约在两千年前的古代罗马就已食用甘蓝了,最早栽培甘蓝的是居住在现在西班牙的古代伊比利亚人,并由此传向世界各地、９世纪传到俄罗斯而且成为每日必吃两餐的主要蔬菜。１６世纪传到…     

甘蓝类蔬菜采后保鲜研究进展

甘蓝类蔬菜是一类重要的蔬菜,营养丰富,食用价值高。通过概述蔬菜采后品质劣变的原因、甘蓝类蔬菜采后贮藏特点和传统处理保鲜方法,分析了蔬菜采后品质劣变的解决方法,综述了目前甘蓝类蔬菜保鲜贮藏方面的研究现状,并对甘蓝类蔬菜采后保鲜的研究提出了建议。     

甜菜原生质体培养再生植株的研究

以栽培甜菜的未授精胚珠成胚为外植体，在ＭＳ附加ＮＡＡ和ＢＡ的培养基上诱导愈伤组织，选择胚性愈伤组织进行继代培养，从该愈伤组织分离原生质体并以液体浅层法或半固体琼脂糖法培养在一系列培养基上，植板率为０．０１％－１．２％。再生愈伤组织形成后，转入固体培养基（ＭＳＢ）上培养，再转入分化培养基上分化出苗，分化率可达２．５％，由愈伤组织上切下分化苗在生根培养基上很容易诱导生根。     

山杏原生质体培养再生植株

对影响山杏原生质体分离和培养的因素进行了系统研究。以悬浮培养物为分离材料,在ＣＰＷ＋１．５％ＣｅｌｕｌａｓｅＯｎｚｕｋａＲ－１０＋０．５％ＭａｃｅｒｏｚｙｍｅＲ－１０＋０．５％Ｈｅｍｉｃｅｌｕｌａｓｅ＋０．６ｍｏｌ／Ｌ甘露醇＋１％ＰＶＰ的酶解液中酶解１０ｈ,原生质体产量和活力分别达到８×１０６个／ｇＦＷ和９５％。以ＫＭ８Ｐ为基本培养基,在培养初期加２,４－Ｄ１．０、ＢＡ０．２５ｍｇ／Ｌ,培养１０ｄ和３０ｄ后分别将ＢＡ调至０．５和１．０ｍｇ／Ｌ,以０．５５ｍｏｌ／Ｌ山梨醇调节渗透压,培养过程中逐步降压,在０．５×１０５个／ｍＬ的植板密度下液体浅层培养６０ｄ后形成了微愈伤组织。将微愈伤组织转至固体培养基上继代培养,在分化培养基上分化出不定芽,在生根培养基上生根形成完整植株。     

非对称体细胞融合获得花椰菜与Brassica spinescens的种间杂种

 拟利用非对称原生质体融合技术向芸薹属花椰菜中转移野生抗逆性状。供体Brassica spinescens具有光合效率高, 抗白锈病、蚜虫、黑斑病, 耐盐等优良特性。用经UV处理的供体叶肉原生质体与花椰菜下胚轴原生质体通过聚乙二醇( PEG) 融合, 培养后获得379株再生植株。对其中的120株进行过氧化物同工酶分析和RAPD分子标记检测, 证明有23株为杂种植株。流式细胞仪倍性分析表明, 杂种植株核DNA含量全部高于供、受体亲本核DNA含量总和, 植株倍性在四至八倍之间。还对供体不同UV射线处理的剂量进行了初步探索, 结果表明0.0750 J·cm ^{- 2}为最大辐射剂量。     

结球甘蓝叶片卷曲过程中6个生长素相关基因的克隆与表达分析

生长素在结球甘蓝球叶向上、向内自然卷曲的过程中发挥着重要的调控作用。为挖掘重要的影响结球甘蓝叶片卷曲的生长素相关基因,通过对结球甘蓝莲座期叶片与结球期叶片的转录组进行对比分析,筛选出6个显著差异表达的生长素相关基因,分别为调控生长素动态平衡的Bo ILL6、Bo ASA1基因,控制极性运输的Bo SF21、Bo PIN4基因,参与信号转导的Bo ARF8、Bo GH3.5基因。对上述6个基因进行同源克隆,分别获得全长c DNA序列,序列分析发现6个基因均含有生长素相关的结构域。分子进化树分析发现各基因与芜菁的对应基因遗传关系最近,拟南芥次之。荧光定量PCR检测结果显示,Bo ILL6、Bo ASA1与Bo SF21的表达量变化最为显著,结球期叶片相对莲座期叶片的表达量差异均高达12倍以上,变化趋势与转录组数据分析结果基本一致,说明这3个基因可能与结球甘蓝叶片的卷曲发育密切相关。     

羽衣甘蓝游离小孢子培养技术研究及应用

以10个羽衣甘蓝杂交种为试材进行游离小孢子培养,研究胚状体发生和小孢子胚成苗的影响因素,以及小孢子植株倍性鉴定和单倍体加倍方法。结果表明,盛花期为最佳取样时期;培养基中13%的蔗糖较为适宜;继代培养以MS+6-BA 2 mg·L^-1+NAA 0.1 mg·L^-1为宜,平均增殖系数为5.06;小孢子再生植株成活率74.6%;小孢子植株自然加倍率为23.33%~37.50%;单倍体试管苗的加倍处理以秋水仙素浓度70 mg·L^-1,处理时间9~11d为宜,加倍率达54.55%。     

槲皮素对甘蓝自交不亲和性及SRK活性的影响

 对甘蓝自交不亲和系‘022E1’, ‘022A1’, ‘02259’开花前两周的花蕾进行不同浓度的槲皮素处理, 开花后自交。与花期对照相比, 3个自交不亲和系的亲和指数差异达到显著性水平, 其中以1 500 μmol·L ^{- 1}槲皮素溶液处理效果最佳, 在022E1系中其亲和指数由原来的0.03增至4.35, 完全转化为了自交亲和系。采集开花前1 d的花蕾切取柱头进行SRK活性测定, 结果表明, 槲皮素处理后可显著抑制甘蓝自交不亲和系柱头中SRK活性, 从而阻止了自交不亲和性的信号传导, 达到了克服甘蓝自交不亲和性的目的。     

甘蓝LFY基因的克隆及序列分析

以甘蓝ZQ启动抽薹的茎尖为材料,分别提取DNA和RNA,以两对引物扩增并序列拼接得到甘蓝LFYZQ基因DNA序列和cDNA完整编码区,长度分别为2 560、1 239 bp,与花椰菜、拟南芥、芥菜和萝卜同源性分别达到91 %、87 %、86 %、87 %。该基因含有3个外显子（452、394、393 bp）和2个内含子（514、807 bp）,共编码412个氨基酸,内含子剪接位点均符合经典GT-AG法则。将LFYZQ与网上公布的12种十字花科植物LFY氨基酸序列按分子进化分成两类：甘蓝LFYZQ与花椰菜以及Jonopsidium属植物Jonopsidium acaule这3个分为一类;其余10种植物分为第二大类。LFYZQ蛋白分子量为46 kD,是一个不稳定的疏水蛋白,存在N-十四（烷）酰化位点、蛋白激酶C磷酸化位点、酪蛋白激酶Ⅱ磷酸化位点、酰胺化位点共4种活性位点。     

甘蓝BYPASS1 编码基因的克隆与表达分析

通过双向电泳结合MALDI-TOF-TOF/MS 质谱技术在甘蓝柱头内鉴定出1 个受自花授粉诱导
上调表达的BYPASS1 蛋白（BPS1）。利用PCR 技术扩增甘蓝BPS1 基因的编码序列, 序列分析结果表明：
该基因没有内含子,开放阅读框为1 059 bp,编码352 个氨基酸,蛋白质分子量为38.7 kD。氨基酸同源
性和系统发生树分析结果表明：甘蓝BPS1 与拟南芥BPS1 亲缘最近,氨基酸同源相似性达85%;与烟草
BPS2 关系较远。RT-PCR 检测结果表明：甘蓝BPS1 基因在开花前1～2 d 的花瓣、萼片、花药、柱头和
叶片中均有表达,柱头中的表达量最高。实时荧光 定量PCR 分析结果表明：甘蓝柱头内BPS1 表达水平在
自花授粉后逐渐升高,异花授粉后柱头内BPS1 表达水平先升高后降低再升高。     

甘蓝柱头蛋白质双向电泳体系的建立

蛋白质提取方法和电泳条件是蛋白质组学研究中双向电泳的关键。为建立适合甘蓝柱头总蛋白质的双向电泳体系,本试验以甘蓝柱头为材料,采用改良TCA/丙酮沉淀法提取柱头总蛋白质,通过对IPG胶条、上样量、聚焦程序、SDS-PAGE胶浓度等的优化,建立了甘蓝柱头总蛋白质双向电泳体系,即选用长17 cm、pH 3～10 NL的IPG胶条,上样量150 μg,按照聚焦程序Ⅰ进行等电聚焦,第二向SDS-PAGE胶浓度选用12%,得到了分辨率高、重复性好的双向电泳图片。     

球茎甘蓝小孢子培养中影响胚诱导的几个因素

以10份球茎甘蓝品种(系)为试材,采用游离小孢子培养方法,研究影响胚状体发生的因素。结果表明:基因型是影响胚状体发生的关键因素,不同基因型间胚诱导率存在显著差异;初花期为最理想的取蕾时期;添加适量激素能够提高胚诱导率,6-BA的适宜浓度为0.2mg·L-1,NAA的作用因基因型而异;4℃低温预处理24h可以明显提高胚诱导率;添加0.25mg·mL-1活性炭不仅可以显著提高胚诱导率,而且能够改善胚状体发育状态。     

甘蓝中硫氧还蛋白编码基因THL1的分子特性及表达研究

采用PCR和RT2PCR技术, 以‘E1’甘蓝基因组DNA和柱头cDNA为模板对THL1基因进行扩增克隆, 得到的片段长度分别为732 bp和455 bp。序列分析表明, 克隆的DNA和cDNA序列与甘蓝‘西园四号’THL1的DNA和cDNA同源性分别为97.9%和98.3%, 两条序列内含子的大小不同; 同时, 前者第2内含子不符合典型的GT2AG规则: 即第2个内含子3′端碱基为AT。将THL1基因cDNA序列定向克隆到原核表达载体pET-43.1a ( + ) , 构建融合表达质粒pET43.1a ( + ) -THL1, 在大肠杆菌BL21中表达出分子量为74kD的融合蛋白, 经胰岛素检测, THL1有氧化还原活性, 表明THL1在大肠杆菌中得到了正确表达。     

甘蓝类蔬菜亲缘关系的RAPD初步分析

利用RAPD标记从DNA水平上对30份甘蓝类蔬菜材料进行亲缘关系和遗传多样性分析,从100对引物中选出10对扩增效果较好的引物,用其扩增出90条带,其中多态条带72条,多态率为80.0 %。对RAPD结果进行UPGMA分析,结果表明,在相似系数0.85处可以清楚的将它们划分为6组,并且从分子生物学的角度分析了它们之间的亲缘关系。