琼脂扩散试验检测羊口疮病毒

以羊口疮痂皮毒抗原接种家兔制备高免血清,经琼扩试验检测血清价为1∶16;通过抗原与兔抗羊口疮高免血清的方阵分析,确定兔抗羊口疮高免血清诊断抗体的最佳稀释度为1∶4;该诊断抗体对5份不同地区的羊口疮疑似病料都呈现特异性反应,不与山羊痘疫苗毒、口蹄疫疫苗毒和羊正常皮肤抗原发生交叉反应。琼脂扩散试验检测羊口疮病毒是一种简便、易于判断、实用性强的诊断方法。     

猪圆环病毒病的流行病学调查及其防治

导读：猪圆环病毒病是由圆环病毒引起猪一种新的传染病。主要感染仔猪,临诊类型较多,其特征为体重下降,消瘦、呼吸困难。猪群感染率高,仔猪病死率高。目前,国内疫情情况是继猪蓝耳病之后又突出出来的一个重要猪病,在一些地区其严重性已超过了猪瘟的危害。确诊依赖于病毒抗原检测和病毒抗体的检测。病毒抗原检测技术：采用的方法有间接免疫荧光技术、核酸探针及原位杂交技术和聚合酶链诊断技术;病毒抗体的检测技术有酶联免疫吸附试验等,除此,尚有分子生物学技术。这些诊断方法中以聚合酶链诊断方法应用较多。对于猪圆环病毒病尚无特异的预防措施,加强常规饲养管理,提高营养水平,注意环境卫生及消毒制度,实行全进全出制度。     

免疫组化技术在犬瘟热病毒检测和鉴定中的应用

免疫组化技术是在抗原抗体特异反应存在的前提下 ,借助于免疫细胞化学的手段 ,检测抗原 (或抗体 )在组织细胞内存在部位的一门新技术 ,目前已广泛应用于人及动物传染病的病原鉴定和快速诊断 ,极大地提高了传染病的诊断和防治水平。该技术一经问世 ,即在犬瘟热病毒 ( Canine Dis     

犬细小病毒病的诊治

本研究统计了2008年军事医学科学院实验动物中心动物医院门诊的犬细小病毒病病例,为本病的诊治提供参考。用犬细小病毒抗原检测试剂盒对具有腹泻、呕吐、便血等体征的189只患犬做了病原检测,以辅助早期确诊,并以犬细小病毒单克隆抗体特异治疗为主的综合治疗方法对愿意接受本法治疗的123例病犬进行了治疗。结果共检测出犬细小病毒阳性病例137例;接受本法治疗的123例病犬中,有59例经全程治疗痊愈,有37例经1次特异治疗,有21例经2次特异治疗后好转,总有效率为95.1%,6例无效。结果表明,对具有明显腹泻、呕吐、便血等临床体征的患犬,结合发病史,可对本病作出初步诊断,参考犬细小病毒抗原检测结果可确诊;同时治疗时机是影响本病转归最为重要的因素。     

禽流感病毒重组核蛋白在琼扩诊断中的应用

利用杆状病毒表达禽流感病毒型特异性抗原－核蛋白,并就重组核蛋白作为禽流感琼扩诊断抗原地特异性和敏感性及作为抗原的其它特性进行了研究,并与普通全病毒琼扩抗原进行了应用比较试验,对３５４份现地可疑血清样品进行了检测,结果表明：该抗原可以特异性地定性检测出所有１５个禽流感病毒亚型的抗血清,与普通全病毒琼扩抗原的检测结果一致,但沉淀线更细密、清晰,保存方便;与我国广泛流行的１５种禽类其它病原体的抗血清没有任何交叉反应,表明该重组核蛋白作为禽流感琼扩抗原特异、敏感、生物安全性更可靠和生产成本更低廉,有利于进一步扩大禽流感疫情调查范围和加大监测力度。     

高致病性猪蓝耳病直接免疫荧光诊断方法的建立及其应用

以临床"高热综合征"病例中分离的高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)HBR变异株接种试验猪制备抗血清,采用硫酸铵盐析法提取血清中免疫球蛋白(IgG),并用异硫氰酸荧光素(FITC)对IgG进行荧光标记,建立了一种直接免疫荧光诊断方法(FA),用于检测病毒感染单层细胞及动物脏器组织切片中PRRSV抗原.本试验对PRRSV感染MARC-145细胞增殖动力学检测结果表明,接种后16 h可检测到抗原阳性细胞,接种后60 h～72 h达到病毒增殖高峰;对病毒人工感染猪脏器组织抗原分布检测结果显示,腹股沟淋巴结、空肠、睾丸、脾脏、下颌淋巴结、肠系膜淋巴结和扁桃体抗原阳性检测率较高;对临床10个猪场送检的38份病料平均阳性检出率为63.2%(24/38).该方法具有特异性强、敏感性和重复性好等特点,与RT-PCR检测结果符合率为96.3%,对几种已知猪病毒抗原无交叉反应,标记的荧光抗体于4℃保存6个月稳定.FA为PRRS的临床诊断提供了一种快速、便捷、敏感、特异的检测方法.     

间接免疫酶组织化学法检测猪繁殖与呼吸综合征病毒感染和抗原定位

以蔗糖密度梯度离心法提纯的猪繁殖与呼吸综合征（Porcine reproductive and respiratory syndrome,PRRS）病毒SC1株作为抗原,免疫家兔制备兔抗PRRS病毒IgG,成功建立了检测PRRS病毒抗原的间接免疫酶组织化学法。该方法只与PRRS病毒感染猪组织呈现阳性反应,与猪瘟病毒、猪细小病毒、猪伪狂犬病毒、猪乙脑病毒人工感染并致死仔猪的肝脏组织呈现阴性反应。用该方法检测PRRS SC-1株人工感染28日龄仔猪,在感染后7 d即可在肺门淋巴结、胸腺、扁桃体、十二指肠、肺、大脑和肾脏检测到PRRS病毒抗原。PRRS病毒抗原主要分布于胸腺和十二指肠感染细胞的胞浆内、肺门淋巴结小梁周围的淋巴窦和弥散的淋巴组织、扁桃体淋巴结的隐窝及其周边。该法具有特异、直观和敏感的特点,可用于PRRS病毒感染的实验室诊断、抗原定位及甲醛固定样本的回顾性诊断。     

云南山羊痘流行毒株P32基因的克隆与表达

山羊痘是由山羊痘病毒引起的一种严重的、高度接触传染的动物疾病,被国际兽疫局(OIE)列为A类动物传染病.临床上以体温升高、全身性或局部性皮肤痘疹及内脏病变(特别是肺)乃至死亡为特征.山羊痘病毒(GTPV)属痘病毒科脊索动物亚科羊痘病毒属的成员,该属其他成员还有绵羊痘病毒(SPPV)、疙瘩皮肤病病毒(LSDV).P32抗原是一种结构蛋白抗原,包含有一个主要的抗原决定簇,存在于所有的羊痘病毒属的3个成员中.针对山羊痘病毒与副痘病毒属存在免疫交叉反应,缺乏有效的鉴别诊断试剂盒,本研究克隆表达出羊痘病毒属特异的P32蛋白,为进一步研制抗体及抗原检测试剂盒奠定前期工作基础.     

犬瘟热的诊断与防治

为了证实犬瘟热病诊断最快速的方法,对20例犬瘟热病犬经临床观察、犬瘟热病毒抗原快速检测试纸检测、试剂盒诊断等方法进行比较诊断研究。临床表现为呼吸型、胃肠型和神经型,犬瘟热病毒抗原快速检测试纸诊断阳性率高,犬瘟热试纸盒诊断阳性率较低。这就证实了应用犬瘟热病毒抗原快速检测试纸是一种快速、简便、准确的诊断方法。并且经治疗试验,探索出治疗各型犬瘟热的系统疗法。     

虫媒病毒的实验诊断(三)

三、病毒抗原的检出检出病畜体内的病毒抗原,是快速诊断的需要,也是国内外正在探索和深入研究的一个课题。①固相和液相补体结合反应:作者等设计了一个新的补体结合表现系统——固相反向补体结合试验,应用于乙脑感染鼠脑中病毒抗原的检出,具有很高的特异     

兽药

正农业部批准禽白血病病毒ELISA群特异抗原检测试剂盒等2种兽药产品为新兽药根据《兽药管理条例》和《兽药注册办法》规定,经审查,批准中国农业科学院哈尔滨兽医研究所等4家单位申报的禽白血病病毒ELISA群特异抗原检测试剂盒及山东华宏生物工程有限公司研制的鸡多杀性巴氏杆菌     

酶联免疫吸附试验夹心法检测梅花鹿狂犬病病毒抗原的研究

以马抗狂犬病固定毒抗体建立的酶联免疫吸附试验夹心法,检测了动物脑组织中的梅花鹿狂犬病病毒抗原。对已知阳性和阴性鼠脑抗原的检测表明,本法具有敏感、特异、快速,简便等特点。实验室检测了50份阳性鼠脑抗原及40份阴性鼠脑抗原,其消光值(OD值)均数(X)分别为0.928和0.209。对5只鹿、3头牛和4只羊脑组织的检测结果皆与其它诊断结果相符;对15只犬的检测发现,其敏感性远远高于补体结合试验的敏感性。     

应用~(125)Ⅰ标记抗体检测乙型脑炎病料的实验研究

病毒学上主要应用放射免疫测定法于病毒抗原和抗体的检测。根据检测对象和检测目的的不同,在具体方法上又分直接法、间接法、夹心法、竞争法和阻断法等等,例如:(1)应用夹心法检测乙型肝炎表面抗原、疱疹病毒抗原、轮状病毒抗原和辛德毕斯病毒抗原等等(1—5),其基本方法是先在聚苯乙烯小管(或小碟)内包被特异抗病毒抗体,随后     

鸡新城疫诊断抗原制备方法的研究

将疑似新城疫病料无菌采集后进行RT-PCR鉴定,将阳性病料研磨后接种SPF鸡胚,收获的阳性尿囊液进行血凝试验(HA)及血凝抑制试验(HI)检测病毒效价,病毒效价达到2~7~2~8,病毒凝集效价达到10log2。使用10%蔗糖溶液及18-25k Da透析袋对阳性尿囊液进行浓缩,浓缩至原体积的1/5;10%福尔马林灭活诊断抗原,经过6h后灭活达100%;诊断抗原效价测定:血凝效价为2~(10);血凝抑制效价为10log2。利用制备的鸡新城疫诊断抗原和鸡新城疫标准诊断抗原与鸡新城疫标准检测抗体进行血凝试验(HA)与血凝抑制试验(HI),对比结果:鸡新城疫诊断抗原病毒效价为2~(10),高于鸡新城疫标准诊断抗原的2~9,鸡新城疫诊断抗原凝集效价为10log2,等同于鸡新城疫标准诊断抗原,证明所制备鸡新城疫诊断抗原符合要求,可以应用到生产实践中。     

单克隆抗体间接免疫荧光检测猪瘟病毒方法的建立

以作者制备的抗猪瘟病毒单克隆抗体(anti-CSFV McAb)为一抗、荧光素标记羊抗小鼠IgG为二抗,通过反应条件的优化,建立检测猪瘟病毒抗原的间接免疫荧光(IFA)检测方法。确定IFA最佳工作条件:CSFV最佳接种浓度和培养条件为CSFV 10-3倍稀释后接种PK15细胞,37℃5%CO2恒温箱中培养36 h;McAb最适工作浓度为1∶1 000倍稀释;荧光素标记的羊抗小鼠IgG荧光抗体的最适工作浓度为1∶50倍稀释。特异性试验表明,用建立的IFA检测方法检测CSFV感染PK15细胞为阳性,而检测伪狂犬病病毒(PRV)、猪细小病毒(PPV)、猪2型圆环病毒(PCV-2)感染PK15细胞均为阴性。结果表明,建立的检测细胞培养中CSFV抗原的IFA检测方法具有敏感特异、简便快速等优点,可用于CSFV感染的实验室诊断及CSFV在感染细胞中的定位和动态分布研究。     

应用间接免疫荧光技术快速检测猪细小病毒抗原

用免疫荧光直接法检测组织病料中的猪细小病毒（ＰＰＶ）抗原时,因病毒粒子小,检出率较低。为提高检出率,又适于检验部门的应用,将猪细小病毒高免血清与胎儿组织中ＰＰＶ抗原形成特异的反应,再加兔抗猪ＩｇＧ荧光抗体,扩大抗原抗体反应的范围来提高检出率,建立了间接免疫荧光诊断技术。通过特异性试验,阻断试验,证明此技术特异敏感、快速（５小时内即可报告检验结果）用该技术对黑龙江和辽宁省９个猪场送检的３２头（窝）病例进行检测,阳性率为２５％。     

应用荧光RT-PCR方法检测H7N9亚型禽流感病毒

为了验证荧光RT-PCR方法检测H7N9亚型禽流感病毒的可行性,应用建立的荧光RT-PCR方法检测H7N9亚型禽流感抗原、H9亚型禽流感抗原、H5亚型禽流感抗原、新城疫抗原评估检测方法的特异性,检测不同稀释度的H7N9亚型禽流感抗原,并用建立的方法检测采自三鸟批发市场100份泄殖腔、喉拭子。结果是建立的荧光RT-PCR方法,H7体系能检测出1:10-10抗原稀释度,N9体系能检测1:10-9抗原稀释度,对H9亚型禽流感抗原、H5亚型禽流感抗原、新城疫抗原无交叉反应;检出100份泄殖腔、喉拭子结果均为阴性。结果表明,荧光RT-PCR方法H7N9亚型禽流感病毒具有快速、灵敏、特异的特点,适合对禽类的大规模监测。     

杆状病毒表达SARS冠状病毒纤突蛋白及其抗原性分析

本研究构建了SARS冠状病毒纤突蛋白(S)重组杆状病毒(rBac-SS).SDS-PAGE及Western-Blot分析表明约190Ku左右的重组SARS纤突蛋白(rSS)在rBac-SS感染圆昆虫细胞获得表达,并具有特异免疫反应原性.以rBac-SS感染的昆虫细胞裂解物稀释后直接包被ELISA板,与Vero细胞培养的全病毒裂解物比较,检测SARS-CoV康复病人血清特异抗体,表现出同样的敏感性和特异性;rBac-SS感染的昆虫细胞用于间接免疫荧光,快速检测血清特异抗体反应,具有良好的敏感性和特异性.结果显示,杆状病毒表达的rSS有望替代SARS-CoV全病毒,作为安全、敏感和特异的重组诊断抗原,并为探索重组亚单位疫苗的可行性奠定基础.     

细小病毒患犬病例的临床诊断与治疗

本文通过对90例细小病毒患犬的临床诊断与治疗,总结了犬细小病毒病流行的原因、临床症状和病理特点,使用犬细小病毒抗原快速检测试纸及细小病毒单克隆抗体对病犬进行诊断和治疗,诊断率和治愈率都达到了90%以上。结果表明,使用犬细小病毒抗原快速检测试纸及细小病毒单克隆抗体进行诊断和治疗在实际临床工作中是可行的。     

应用电化学基因芯片鉴别A型流感病毒亚型

为了验证电化学基因芯片技术检测A型流感亚型的可行性,应用建立的电化基因芯片方法分别检测了9株不同亚型的A型流感病毒抗原、1株新城疫病毒抗原和10份临床样品。结果为电化学基因芯片均能特异检出相应的A型流感病毒亚型,与新城疫病毒抗原无交叉反应;临床样品中,检出5份为H6N6亚型流感病毒核酸阳性、2份为H6H2亚型禽流感病毒核酸阳性、3份为H9H2亚型禽流感病毒核酸阳性。结果表明,电化学基因芯片方法适合A型流感病毒各亚型的鉴别,具有快速、特异的特点。