牛血清中牛病毒性腹泻/粘膜病毒抗体检测的初步分析

为了初步分析新生牛血清中牛病毒性腹泻／粘膜病毒抗伴(BVD/MD-Ab)的检出率及其来源,将不同来源的新生牛血清进行分类分组,采用犊牛睾丸细胞微量中和试验法检测该抗体。结果表明,各区该抗体的阳性检出率分别为华北区11．7％、华东区23．4％、西南区29．4％、华南区30．5％、华中区31．3％、中南区42．2％、西北区37．8％,内蒙古地区62．9％,超过50％,且存在数犊牛睾丸细胞病变物质。试验为生产不含BVD/MD-Ab,且无细胞毒性的新生牛血清提供了参考依据和可行的方法。     

牛病毒性腹泻病毒双抗体夹心ELISA检测方法的建立

将牛病毒性腹泻病毒超免疫血清以常规方法提取IgG，采用过碘酸钠法标记辣根过氧化物酶（HRP），建立了从粪样中检测牛病毒性腹泻病毒抗原的双抗体夹心ELISA。结果，抗体的最佳包被量为150μg／mL，酶标抗体最适工作浓度为1：200；封闭液为50mL／L的兔血清；待检粪样及酶标抗体的感作时间为37℃ 120min；底物显色时间为室温15min。应用建立的检测方法对河北省8个大中型奶牛场298份乳牛腹泻粪样进行了检测，结果，阳性检出率为42．6％。     

牛病毒性腹泻病毒血清抗体检测

采用Svanova公司牛病毒性腹泻病毒血清抗体ELISA抗体检测试剂盒对采自新疆10个不同地区的875份牛血清进行了牛病毒性腹泻病毒血清抗体检测,共检出抗体阳性血清759份,最高阳性率为100％,最低为55.0％,平均为86.7％.检测结果表明该病已在新疆普遍存在,感染没有明确的地域分布规律.根据ELISA检测结果,从...     

奶牛和猪血清中牛病毒性腹泻-粘膜病抗体的检测

<正> 牛病毒性腹泻-粘膜病(BVD-MD)是一种病毒性传染病,习惯上简称为牛病毒性腹泻(BVD)。以腹泻、消瘦和消化道(口腔、食道和胃肠道)粘膜的充出血、水肿和糜烂为主要特征。牛病毒性腹泻病毒(BVDV)属黄病毒科瘟病毒属,各种年龄的牛都易感,而以幼龄牛易感性最高。病牛的分泌物、排     

胎牛血清中牛病毒性腹泻病毒2型毒株分离及脱脂奶粉中抗体的检测

本研究旨在对进口胎牛血清中的牛病毒性腹泻病毒（BVDV）进行分离及鉴定。利用BVDV抗原和抗体检测试剂盒检测,提取胎牛血清中的病毒RNA,用5'-UTR巢式PCR进行扩增,PCR扩增产物连接pMD19-T进行测序分析。胎牛血清样品接种MDBK细胞,进行细胞传代培养,通过细胞分离培养、直接免疫荧光抗体检测对实验室进口胎牛血清样品进行病毒分离及鉴定,应用DNAStar对BVDV 5'-UTR、N^pro与GenBank中公布的瘟病毒参考株进行多序列比对,采用Mega 6.0进行遗传进化分析。同时通过包被脱脂奶粉进行间接ELISA检测其中的BVDV抗体。结果显示,胎牛血清中BVDV抗原和抗体均为阳性,并且从胎牛血清中成功分离到一株新的牛源BVDV,命名为BVDV-GC株,该病毒株在MDBK细胞上进行增殖培养时未能引起细胞病变;5'-UTR与N^pro PCR扩增为阳性,扩增产物大小均与预期相符;直接免疫荧光检测荧光信号为阳性;病毒滴度为10^-3.6TCID₅₀/0.1 mL;遗传进化分析表明,该分离株与USMARC-60779（BVDV-2）株有较近的亲缘关系,同属于BVDV-2型毒株;通过包被脱脂奶粉和商品化的ELISA试剂盒进行检测,结果表明脱脂奶粉中存在BVDV抗体。本研究从进口胎牛血清中分离出1株BVDV-2型非致细胞病变病毒,从脱脂奶粉中检测到BVDV抗体,表明进口胎牛血清和脱脂奶粉中都存在BVDV抗原和抗体污染,本研究为后续试验分析提供参考。     

二种方法检测牛病毒性腹泻病毒的比较

荧光抗体试验(FA)是用于检测牛病毒性腹泻病毒(BVDV)的传统方法。但由于此技术需要价格昂贵的荧光显微镜,复杂的操作程序及专门的试验人员,使该技术的应用受到限制。为克服FA的缺点,目前世界上一     

抗牛病毒性腹泻病毒中和抗体对犊牛的保护效果

未哺初乳的犊牛（ｎ－２４），给以初乳、初乳代用品或代乳品，使其血清中被动获得病毒中和抗体。然后，用非致细胞病变牛病毒性腹泻强毒（ＢＶＤＶ－８９０）鼻内攻毒，监测犊牛体温，白细胞减少，血小板减少和腹泻情况，此外，用犊牛的鼻分泌物、细胞棕黄层和血清进行病毒分离和滴定，病毒中和效价为２５６或以下的犊牛出现体温升高和病毒的全身感染，病毒中和效价低于１６的犊牛出现严重的临床症状即体温升高、白细胞和血小板数减     

牛病毒性腹泻病毒一步法RT-PCR检测方法的建立

根据牛病毒性腹泻/粘膜病病毒5'端非结构蛋白基因序列,设计合成1对特异性引物,建立检测牛病毒性腹泻/粘膜病病毒244 bp片段的RT-PCR一步法。该方法对牛病毒性腹泻/粘膜病病毒NADL、OregonC24V和长春184毒株各标准毒株检测,结果均为阳性。对标准毒株的细胞毒进行检测,其敏感度达0.1 TCID50;而对牛传染性鼻气管炎病毒、猪瘟病毒、牛轮状病毒和牛冠状病毒的细胞培养物进行检测,结果均为阴性。检测460份不同样品,与病毒分离试验比较,符合率100%,证明该方法特异性强,敏感性高。初步结果表明所建立的一步法RT-PCR技术可用于牛病毒性腹泻/粘膜病的检测及流行病学调查。     

双抗体夹心ELISA检测牛病毒性腹泻病毒的研究

建立了从粪便中检测牛病毒性腹泻（ＢＶＤ）病毒抗原的双抗体夹心ＥＬＩＳＡ。试验方法的最佳工作条件为，抗体包被量为１００μｇ／孔，酶标抗体的浓度为１：４００。对不同地区牛、羊、鹿粪样检测结果，牛的ＢＶＤＶ感染率为１６．５％￣８９．０％，羊为１４．６％￣８３．３％，鹿为１９．６％￣４４．４％，并且从许多地区的牛、羊同时检测到ＢＶＤＶ，表明本病在国内某些地区存在着严重的感染。     

免疫过氧化物酶法快速检测牛病毒性腹泻—粘膜病病毒抗原

用间接免疫过氧化物酶法（ＩＩＰ），对非细胞致病性牛病毒性腹泻－粘膜病（ＢＶＤ－ＭＤ）病毒持续感染的４２头牛血清经牛胎儿肌细胞培养检出了ＢＶＤ－ＭＤ病毒抗原，１００头外观健康牛的血清，经牛胎儿肌细胞培养未检出ＢＶＤ－ＭＤ病毒抗原，该结果与用干扰法获得的结果一致。而且用ＩＩＰ在血沉标黄层涂片中也检出了ＢＶＤ－ＭＤ病毒抗原，用亲和系－生物素过氧化物酶复合物方法在福尔马林固定的组织切片中也检出了ＢＶＤ－Ｍ     

牛病毒性腹泻病毒E2蛋白的真核表达及间接ELISA抗体检测方法的建立

为建立检测牛病毒性腹泻病毒(Bovine viral diarrhea virus, BVDV)抗体的间接ELISA方法,利用昆虫细胞真核表达系统成功表达E2蛋白,将纯化后的E2蛋白作为包被抗原,用方阵滴定方法对影响ELISA的各个因素进行优化,并进行特异性、敏感性和重复性试验。结果表明,在昆虫细胞中表达了BVDV E2蛋白,Western blot证实目的蛋白可与BVDV阳性血清发生特异性反应。ELISA优化结果显示,E2蛋白最佳包被浓度为0.5μg/mL,最佳封闭液为1%明胶,最佳血清稀释度为1∶400,最佳血清作用方式为37℃作用30 min,酶标抗体的最佳作用方式为1∶2 000稀释、37℃作用30 min,最佳底物作用时间为室温20 min,阳性临界值为OD₄₅₀≥0.423。与血清中和试验法进行比较,总符合率为97.8%,板内和板间重复性试验的变异系数均小于10%。该方法与牛常见病毒阳性血清均无交叉反应。说明建立的间接ELISA抗体检测方法特异性、敏感性和重复性良好,可用于大批量样本的临床检测和流行病学研究。     

双抗体夹心阻断ELISA检测血清牛病毒性腹泻—粘膜病病毒抗体的研究

本研究建立了检测血清中牛病毒性腹病（ＢＤＶ－ＭＤ）病毒抗体的双抗体夹心阻断ＥＬＩＳＡ，并用其检测了长春地区２９３头奶和２６２头黄牛的血清。结果，奶牛的阳性率为５４．９％，黄牛的阳性率４３．５％。本文法是一种敏感、特异、快速的检测抗体方法。可在基层推广应用。     

牛病毒性腹泻病毒检测方法研究进展

牛病毒性腹泻病(bovine viral diarrhea, BVD)是由牛病毒性腹泻病毒(Bovine viral diarrhea virus, BVDV)感染导致的传染病。该病会导致牛生产性能下降,给全球养牛业带来严重的经济损失。BVD的临床表现和病理变化与其他牛源腹泻病毒病相似,因此有必要根据不同的条件选择快速高效的BVDV诊断方法,及时采取措施阻断BVDV在牛群间、BVDV持续感染牛(persistently infected, PI)与健康牛之间传播,减少BVDV对养牛业造成的经济损失。用于BVDV检测的方法很多,主要有病毒分离鉴定、荧光定量RT-PCR、RT-PCR、环介导等温扩增技术(LAMP)、重组酶聚合酶扩增技术(RPA)、胶体金免疫检测技术(GICT)、酶联免疫吸附试验(ELISA)、抗原捕获ELISA(AC-ELISA)、间接免疫荧光法(IFA)等。近年一些新兴技术和优化的方法被应用于BVDV的检测,如抗体液相芯片技术、CRISPR-LwCas13a系统、双重纳米RT-PCR法等,均具有特异性强和灵敏度高等优点。作者从抗原、抗体两个方面总结了BVDV检测方法的研...     

用猪瘟胶体金快速检测试纸卡检测牛病毒性腹泻抗体的试验

用猪瘟胶体金快速检测试纸卡和牛病毒性腹泻(BVD)抗体ELISA试剂盒分别对50份免疫场乳牛血清和184份非免疫场牛血清进行BVD抗体检测。结果50份免疫场牛血清阳性率分别为86%和92%,184份非免疫场牛血清阳性率分别为78.8%和82.1%,检测结果相近,说明用猪瘟胶体金快速检测试纸卡检测牛病毒性腹泻抗体水平具有一定的参考价值。     

牛病毒性腹泻的研究进展

牛病毒性腹泻（ＢＶＤ）是由牛腹泻病毒（ＢＶＤＶ）引起的一种重要的牛传染性疾病，该病分布许多国家，我国的许多地区也有本病的报道，据统计牛群的血清抗体阳性高达５０－９０％，对养牛业造成严重威胁。由于病毒的持续性感染，发病牛群的净化和控制费用是极其昂贵的，由此带来的出口限制，造成的损失也是不可估量的。因此，许多国家对该病的研究和都很重视，并取得重要的进展，许多概念有了新的内容和含意，并在疾病的防治中起重     

牛病毒性腹泻病毒抗体胶体金检测试纸条的制备

采用sf9昆虫细胞-杆状病毒系统重组表达牛病毒性腹泻病毒P80蛋白抗原,经纯化鉴定后将P80蛋白用胶体金标记作为示踪抗原,未标记的P80抗原作为捕获抗原,并以羊抗牛IgG抗体作为质控抗体,建立了牛病毒性腹泻病毒抗体快速诊断试纸条。试验结果表明,该试纸条检测灵敏度高,特异性良好,与牛口蹄疫病毒、牛传染性鼻气管炎病毒无交叉反应。使用建立的胶体金试纸条和IDEXX牛病毒性腹泻病毒ELISA抗体检测试剂盒同时检测80头份牛血清,阳性结果符合率为86.7%,阴性结果符合率为100%,总符合率为95%。该试纸条可用于临床牛病毒性腹泻病毒抗体的诊断和检测。