用固定细胞阻断酶联免疫吸附试验鉴别诊断猪传染性胃肠炎病毒和猪呼吸道冠状病毒的感染

用固定细胞阻断酶联免疫吸附试验（ＥＬＩＳＡ）对来自丹麦猪的１８０份血清进行了猪传染性胃肠炎病毒（ＴＧＥＶ）和猪呼吸道冠状病毒（ＰＲＣＶ）感染的鉴别诊断，共检出了ＰＲＣＶ抗体阳性血清１０７份（５９．４％），ＴＧＥＶ抗体阳性血清０份。同时也检测了一些来自国内不同ＴＧＥＶ感染类型的猪场血清。该鉴别诊断方法在我国的建立和应用为从ＰＲＣＶ阳性国家进口猪的ＴＧＥ的检疫提供了一条有效途径。     

用固定细胞阻断酶联免疫吸附试验鉴别诊断猪传染性胃肠炎病毒和…

用固定细胞阻断酶联免疫吸附试验对来自丹麦猪的１８０份血清进行了猪传染性胃肠炎病毒和猪呼吸道冠状病毒感染的鉴别诊断，共检出了ＰＲＣＶ抗体阳性血清１０７份，ＴＧＥＶ抗体阳性血清０份。同时也检测了一些来自国内不同ＴＧＥＶ感染类型的猪场血清。     

猪生殖—呼吸道综合征病毒（PRRSV）分离鉴定及其与欧,美PRRSV …

在我国吉林省某地猪生殖呼吸道综合征病毒（ＰＲＲＳＶ）抗体阳性猪群的４头２日龄弱仔猪实质脏器中分离到２株ＰＲＲＳＶ,间接荧光抗体试验（ＩＦＡ）结果表明,ＰＲＲＳＶ（ＬＶ．ＶＲ－２３３２）抗血清与２个分离株呈阳性反应;分离到病毒的弱仔猪血清与参考株（ＬＶ．ＶＲ－２３３２）也呈阳性反应,而分离株与ＨＣＶ,ＰｒＶ,ＰＰＶ,ＴＧＥＶ,ＰＥＤＶ和ＨＥＶ无交叉抗原,以上试验证明,我们已成功地分离到２株地方性ＰＲ     

二种方法检测猪传染性胃肠炎病毒抗体的比较

分别用血清中和（ＳＮ）试验和单克隆抗体（ＴＧＥｍＡｂ和ＴＧＥ／ＰＲＣＶｍＡｂ）阻断酶联免疫吸附试验（Ｂ－ＥＬＩＳＡ）对８１头美国进口猪血清作猪传染性胃肠炎（ＴＧＥ）抗体检测。ＳＮ试验检出７份阳性血清，检出率为８．６４％；Ｂ－ＥＬＩＳＡ试验检出７份ＰＲＣＶ抗体阳性血清，检出率为８．６４％，无ＴＧＥ阳性。ＳＮ试验检出７份ＴＧＥ抗体阳性血清与Ｂ－ＥＬＩＳＡ试验检出的７份ＰＲＣＶ抗体阳性血清完全重合。结果证明，应用单克隆抗体进行的Ｂ－ＥＬＩＳＡ可鉴别诊断ＴＧＥ与ＰＲＣＶ感染，优于ＳＮ试验     

二种方法检测猪传染性胃肠炎病毒抗体的比较

分别用血清中和试验和单克隆抗体阻断酶联免疫吸附试验对８１头美国进口猪轿清作猪传染性胃肠炎抗体检测。ＳＮ试验同７份阳性血清，检出率为８．６４％，Ｂ－ＥＬＩＳＡ试验检出７份ＰＲＣＶ抗体阳性血清，检出率为８．６４％，无ＴＧＥ阳性。ＳＮ试验检出７份ＴＧＥ抗体阳性血清与Ｂ－ＥＬＩＳＡ试验检出的７份ＰＲＣＶ抗体阳性血清完全重合。结果证明，应用单克隆抗体进行的Ｂ－ＥＬＩＳＡ可鉴别诊断ＴＧＥ与ＰＲＣＶ感染，优于Ｓ     

猪生殖-呼吸道综合征病毒(PRRSV)分离鉴定及其与欧、美PRRSV抗原的比较

在我国吉林省某地猪生殖－呼吸道综合征病毒（ＰＲＲＳＶ）抗体阳性猪群的４头２日龄弱仔猪实质脏器中分离到２株ＰＲＲＳＶ。间接荧光抗体试验（ＩＦＡ）结果表明,ＰＲＲＳＶ（ＬＶ．ＶＲ－２３３２）抗血清与２个分离株呈阳性反应;分离到病毒的弱仔猪血清与参考株（ＬＶ．ＶＲ－２３３２）也呈阳性反应;而分离株与ＨＣＶ、ＰｒＶ、ＰＰＶ、ＴＧＥＶ、ＰＥＤＶ和ＨＥＶ无交叉抗原。以上试验证明,我们已成功地分离到２株地方性ＰＲＲＳＶ。进一步用六种ＰＲＲＳＶ单抗（Ａ～Ｆ）进行ＩＦＡ试验,结果２个分离株与ＶＲ－２３３２的荧光反应谱相同。说明它们之间在抗原结构上具有同源性。     

猪繁殖-呼吸综合征病毒上海株的分离鉴定

从上海地区５个发病猪场的病料中，分离到３株致Ｍａｒｃ－１４５细胞病变的病毒：ＳＨ１、ＳＨ２和ＳＨ３，理化特性研究表明，３株分离毒均对氯仿、乙醚、甲醛、热（５６℃）、酸（ｐＨ６以下）、碱（ｐＨ８以上）敏感。负染可见病毒以大小不等的具囊膜的球形粒子为主，囊膜上有纤突，直径为６０￣１００ｎｍ；超薄切片可见病毒粒子分散在细胞浆内，直径为４５￣８０ｎｍ。间接免疫荧光试验表明，３株分离毒均与ＰＲＲＳＶ高免血清呈强阳性反应，而与ＨＣＶ、ＰＰＶ、ＰＲＶ、ＴＧＥＶ高免血清的反应均呈阴性。综上可见，所分离的病毒为ＰＲＲＳＶ。     

猪传染性胃肠炎病毒的血凝位点的定位研究

通过转瓶培养ＩＢＲＳ２细胞，选择最佳接毒剂量、接毒时间和收毒时间生产出凝集价（ＨＡ）达２１２的猪传染性胃肠炎病毒（ＴＧＥＶ）血凝抗原。用抗ＴＧＥＶＳ蛋白和 Ｍ蛋白的单克隆抗体与不同稀释度的ＴＧＥＶ血凝抗原等量混合，在 ３７℃作用 ３０分钟后接种ＩＢＲＳ２细胞和做中和试验（ＮＴ）和血凝抑制（ＨＩ）试验。结果表明ＴＧＥＶ血凝位点与中和位点一致，血凝素位于Ｓ蛋白Ａ位点或其附近。     

猪传染性胃肠炎病毒的分子生物学研究进展

猪传染性胃肠炎病毒的分子生物学研究进展刘爵（北京农业大学）猪传染性胃肠炎病毒（ＴＧＥＶ）可引起仔猪发生以呕吐、急性腹泻和脱水为特征的胃肠炎，该病对２周龄以内的仔猪具有高度致死性，给养猪业造成严重的损失。ＴＧＥＶ属于冠状病毒科冠状病毒属，呈多形性，表面...     

猪传染性胃肠炎病毒在PK15和ST细胞上的增殖特性比较

猪传染性胃肠炎病毒 (ＴｒａｎｓｍｉｓｓｉｂｌｅＧａｓｔｒｏｅｎｔｅｒｉｔｉｓＶｉｒｕｓ;ＴＧＥＶ)属于冠状病毒科 ,临床上引起各种不同年龄、品种猪的水样腹泻和新生猪的高死亡率 ,造成规模化猪场的严重经济损失。该病毒可以在多种细胞上 (猪肾细胞、甲状腺细胞、唾液腺细胞和睾丸细胞等 )繁殖 ,且在不同细胞上的生物学特性也不尽一致。本研究旨在通过了解ＴＧＥＶ在ＰＫ1 5和ＳＴ细胞上的生长特性 ,以期能发现毒价高、病变明显的细胞 ,为疫苗生产及临床诊断服务。1　材料1 .1　毒株 :从比利时引进的ＴＧＥ强毒 ,经剥夺初奶的新生猪口…     

猪流行性腹泻病毒适应Vero细胞培养及以传代细胞毒制备氢氧化铝灭活疫苗免疫效力试验

采用在病毒培养液中加５～１０μｇ／ｍｌ胰酶的培养方法，将猪流行性腹泻病毒（ＰＥＤＶ）ＣＶ＿（７７７）适应于Ｖｅｒｏ细胞，并传４５代．细胞病变规律．经免疫荧光检查阳性，电镜观察可见典型冠状病毒粒子，猪传染性胃肠炎（ＴＧＥ）免疾荧光检查阴性，猪流行性腹泻（ＰＥＤ）血清可抑制细胞病变（ＣＰＥ）．ＰＥＤＶＣＶ＿（７７７）毒株１１、２５、２８、４０及４４代传代毒的毒价分别为１０￣（３．５）、１０￣（５．５）、１０￣（６．５）、１０￣（７．０）和１０￣（７．０）ＴＣＩＤ＿（５０）／０．３ｍｌ。以１１、２１及２２代的毒１０ｍｌ头口服接种未吃初乳仔猪，可使之典型发病，免疫荧光及电镜观察均呈阳性．分别以２５、２８及３１代毒０．５ｍｌ／头、１ｍｌ／头、２ｍｌ／头口服接种３日龄仔猪１８头．除０．５ｍｌ组有１头反应外，均未发病，攻毒试验的总保护率为８７．５％，对照组１００％发病．以２８代毒制备氢氧化铝灭活苗，后海穴位接种，主动免疫组８５．１９％保护，被动免疫组８５％保护，对照组１００％及９２．３％发病．     

猪流行性腹泻病毒适应Vero细胞培养及以传代细胞毒制备氢氧化铝灭…

采用在病毒培养液中加５－１０μｇ／ｍｌ胰酶的培养方法，将猪流行性腹泻毒ＣＶ７７７适应于Ｖｅｒｏ细胞，并传４５代，细胞病毒规律，经免疫荧光检查阳性，电镜观察可见典型冠状病毒粒子，猪传染性胃肠炎免疫荧光检查阴性，猪流行性腹泻血清可抑制细胞病变。ＰＥＤＶ ＣＶ７７７毒株１１，２５，２８，４０及４４例传代毒的毒价分别为１０＾３．５，１０＾５．５，１０＾７．０和１０＾７．０ＴＣ１Ｄ５０／０．３ｍｌ。以１１，     

伪狂犬病病毒糖蛋白gp50基因的克隆和表达

从包含伪狂犬病病毒（ＰＲＶ）闽Ａ株ＢａｍＨＩ－７片段的重组质粒ｐＰＲ１２８中分离出含有完整糖蛋白ｇｐ５０基因的２．１ｋｂＤＮＡ片段，用ＫｐｎＩ和ＳｔｕＩ酶切后，将其酶切片段分别克隆到ｐＵＣ１９载体中，构建了２．１ｋｂ片段完整测序用质粒。对其序列进行分析，发现与文献报道结果一致，证明分离的ｇｐ５０基因是正确的。将包含ｇｐ５０基因的２．１ｋｂ和１．６ｋｂＤＮＡ片段分别插入带有痘苗病毒天坛株ＴＫ基因区段的ｐＧＪＰ－５质粒Ｐ７．５启动子的下游，构建了ｐＧＢＴ５０－３６和ｐＧＢＴ５０－Ｓ２２个嵌合载体。将嵌合载体通过磷酸钙共沉淀法转染预先感染ＴＫ＋痘苗病毒天坛株的人ＴＫ－１４３细胞或ＣＶ－１细胞，进行体内同源重组。经蚀斑纯化，在ＢｄＵＲ选择压力下，通过光敏生物素标记的探针杂交，获得带有ＰＲＶｇｐ５０基因的重组痘苗病毒。用ＥＬＩＳＡ检测，重组痘苗病毒有特异性ＰＲＶｇｐ５０抗原存在。     

免疫鸡羽毛根中火鸡疱疹病毒的分离与鉴定

用常规剂量的商用火鸡疱疹病毒（ＨＶＴ）冻干苗经腹腔免疫１日龄非免疫鸡，于第３周采集羽毛根，分别采取直接法和间接法（即经过滤获取脱细胞的游离物）接种次代鸡胚成纤维细胞（ＣＥＦ），以进行病毒的分离。结果显示，在免疫后第３、４、５、６周，２种方法都分离到病毒，第７周仅直接法分离到病毒，而第８周２种方法都没有分离到。根据分离到病毒的细胞病变（ＣＰＥ）特征，结合地高辛标记的Ⅰ型马立克氏病病毒（ＭＤＶ－１）核酸探针检测结果，表明ＨＶＴ免疫鸡羽毛根中含有可脱离细胞的、具有感染性的疫苗株ＨＶＴ粒子，且其可检出时间具有阶段性。     

猪生殖—呼吸道综合征国内分离毒株的病毒纯化及其结构蛋？…

本研究主要对猪生殖－呼吸道综合征国内分离毒株进行了病毒纯化及其结构蛋白的分析。选用聚乙二醇（ＰＥＧ－６０００）沉淀和差速离心法粗提了经Ｍａｒｃ－１４５细胞系增殖的猪生殖－呼吸道综合征病毒（ＰＲＲＳＶ）。并采用非线性蔗糖密度梯度离心法纯化了ＰＲＲＳＶ,经免疫电镜观察化病毒,发现有较多的胶体金颗粒吸附在直径为４２－７８ｎｍ的病毒粒子周围。经Ｄｏｔ－ＥＬＩＳＡ测定纯化病毒的滴度可达１：１６００以上,并利     

猪传染性胃肠炎病毒在组织细胞上增殖的研究

从组织细胞制备、不同试验细胞（ｐｋ１５，ＳＴ）及不同维持液组成成份三个方面对ＴＧＥＶ在组织细胞上增殖情况进行了比较。结果表明，用含１５％ＦＢＳ培养液进行ＳＴ或ｐｋ１５细胞传代并制备悬液，操作方便，能形成良好单层，利用ＴＧＥＶＣＰＥ判定；ＳＴ细胞在病毒增殖和检测毒价两方面均较ｐｋ１５细胞分别高２个滴度和１个滴度以上；维护液中提高血清含量（８％ＦＢＳ）或含一定量胰酶对ＴＧＥＶ增殖效果影响不大。     

猪生殖—呼吸道综合征病毒对妊娠中期母猪和和胎儿的致病性

通过两个实验评价了猪生殖－呼吸道综合征病毒（ＰＲＲＳ）经鼻腔接种母猪和经胎盘感染妊娠中期胎儿以及经子宫接种ＰＲＲＳ毒病直接感染胎儿的可能性。实验１对８头妊娠４５－５０天的母猪经鼻腔接种ＰＲＲＳ病毒（ＡＴＣＣ ＶＲ－２３３２）、４头对照母猪用未感染的细胞培养物接种，接毒后１、３、５、７和９天，接毒母猪出现毒血症，由粪便和鼻分泌物排出病毒并出现白细胞减少症，接毒后７、１４或２１天剖杀实验母猪的７１头胎     

用LSAB免疫组化染色法检测猪生殖—呼吸道综合征病毒抗原？…

本研究在国内首次成功建立了辣根过氧化物酶标记的链霉亲和素－生物系（ＬＳＡＢ）免疫组化染色法检测猪生殖－呼吸道综合征病毒（ＰＲＲＳＶ）抗原。应用ＬＳＡＢ染色技术检测１２头人工感染ＰＲＲＳＶ美洲株（ＡＴＣＣ ＶＲ－２３３２）或国内分离株（Ｂ９６－４，Ｂ９６－５）的ＳＰＦ仔猪组织细胞内的ＰＲＲＳＶ抗原，阳性检出率为１００％。     

鸡传染性支气管炎肾型致病株的分离与鉴定

肾病变为主要特征的病雏中，采集典型病科，通过鸡胚接种、传代，分离到四株肾传支病毒（ＨＮ—Ｍ，ＨＮ—Ｚ，ＨＮ—Ｇ，ＨＮ—Ｃ）。该四株病毒均能适应鸡胚生长，并致鸡胚呈明显的卷曲胚和侏儒胚；其鸡胚适应毒能感用鸡胚肾细胞（ＣＥＫ），并致细胞病变（ＣＰＥ）；应用鸡脓毒或细胞毒回归雏鸡，可复制出与自然发病雏同样的特征性病变；每株无血凝性，以胰酶处理后可出现凝集价；经与７４国际标准毒单抗作细胞交叉中和试验及用克隆和标记的ＩＢＶ非编码区、非Ｓ１片段１０ｋｂ核酸探针作斑点杂交鉴定，确认ＨＮ－Ｍ株为澳大利亚Ｔ抹，另三株为Ｎ—１１５株。应用该四株分离毒制备的油乳剂灭活苗对河南近几年流行的肾型支气管炎起到了十分理想的防制效果．     

猪细小病毒生物学特性研究

应用ＰＫ－１５传代细胞复制猪细小病毒（ＰＰＶ）参考株ＮＡＤＬ－２和云南分离株ＫＭ，研究得出细胞培养物半数细胞感染量分别为１０＾－７．９／ｍｌ和１０＾－６．８／ｍｌ经ＣｓＣｌ密度梯度离心，两种病毒颗粒其浮力密度值分别为１．３３ｇ／ｃｍ＾３和１．３９／ｃｍ，电镜观察病毒粒子呈圆形，直径约２０ｎｍ。ＳＤＳ－聚丙烯酰胺凝胶电泳（ＳＤＳ－ＰＡＧＥ）分析，表明纯化的ＰＰＶ细胞培养毒，主要含两种蛋白成分，分子量