百里香酚对爪哇根结线虫的毒杀活性研究

百里香酚是一种天然的化学物质,因具有很好的生物活性而被广泛应用。但其对爪哇根结线虫（Meloidogyne javanica）的毒杀活性未见报道。本研究测定了百里香酚对爪哇根结线虫（M.javanica）的毒杀活性。试验结果表明：百里香酚对爪哇根结线虫（M.javanica）具有较好的杀线虫活性,在125、 250、500、1 000和2 000 μg/mL质量浓度下,死亡率分别为4.59%、25.44%、69.18%、89.38%和94.22%。通过线性回归方程分析得到剂量对数—机率值回归线的回归方程：y＝-2.537 53＋2.893 97x ,R＝ 0.981 52 ,LD50为402.31 μg/mL,杀线虫活性较好。     

茶枯饼乙醇抽提物对爪哇根结线虫的毒杀活性

【目的】研究了茶枯饼乙醇抽提物对爪哇根结线虫(Meloidogyne javanica)的毒杀活性,以及茶枯饼粉末拌土处理对空心菜和落葵爪哇根结线虫病的盆栽防治效果,为线虫病的生物防治提供理论依据。【方法】以茶枯饼为材料,采用药液直接浸泡法和粉末拌土盆栽法,分别研究了茶枯饼乙醇抽提物对爪哇根结线虫2龄幼虫的毒杀活性、对卵的孵化抑制性,以及茶枯饼粉末拌土处理对空心菜和落葵爪哇根结线虫病的防效。【结果】茶枯饼乙醇抽提物对爪哇根结线虫2龄幼虫有较强的毒杀活性,以50,100,150mg/mL茶枯饼乙醇抽提物处理72h,经清水复苏24h后,校正死亡率分别为39.94%,58.80%,70.68%;对爪哇根结线虫卵的孵化表现出较强抑制活性,以50,100,150mg/mL茶枯饼乙醇抽提物处理5d后,抑制孵化率均达到58%以上。茶枯饼粉末拌土处理对空心菜(9g/L)及落葵(11g/L)爪哇根结线虫均有较好的防治效果,茶枯饼粉末拌土能显著降低根结数及雌虫产卵量,并使植株地上部鲜质量显著增加。【结论】茶枯饼中存在杀线虫成分,可作为潜在的防治根结线虫病资源用于线虫病的防治。     

腐烂茎线虫不同群体致病性差异分析

为明确不同来源腐烂茎线虫致病性差异,采用盆栽试验,对分离自马铃薯（DXP2、HLJP1 和SXP1）、党参（TCC1）和当归（WYA3和HZA3）的6个群体进行致病性测定。每个群体分别接种马铃薯、甘薯和党参（500 条/盆,3个重复）,60 d后统计病情级别和繁殖系数。结果表明,6个群体均可侵染马铃薯,4个群体可侵染甘薯,所有群体均未侵染党参。不同群体的致病性存在明显差异,马铃薯线虫群体对甘薯和马铃薯具有较强致病性,党参线虫群体可侵染马铃薯和甘薯,但病情级别和繁殖系数较低。当归线虫群体只侵染马铃薯,且致病性和繁殖系数极低。     

水稻酯酶同工酶谱差异研究

用聚丙烯酰胺凝胶电泳法对５种杂交稻及其亲本和１０种常规稻之间的酯酶同工酶谱研究表明，５种杂交种子均具９Ａ（Ｒｆ＝０．６１８）特征带，１０种常规稻绝大多数不具此带。杂交稻亲本表现较强的２Ａ（Ｒｆ＝０．６４３）和３Ａ（Ｒｆ＝０．５４３）酶带，萌发生长８～１８天的汕优６３稻苗具有活性较强而稳定的１２Ａ（Ｒｆ＝０．５４３）酶带，萌发生长８～１８天的汕优６３稻苗具有活性较强而稳定的１２Ａ（Ｒｆ＝０．３１２）     

堆肥浸提物和堆肥茶抑制爪哇根结线虫的盆栽试验

利用腐熟堆肥的浸提液（1：3，W／V）和由浸提液制备的堆肥茶作为盆栽番茄的液态肥，以评估其对爪哇根结线虫（Meloidogyne javanica）种群的影响。盆栽番茄苗并于4周龄时接种根结线虫第二期幼虫（J2）。试验期间用30％稀释的堆肥浸提液和堆肥茶原液淋灌。与对照组相比，在接种35d后，堆肥茶使根部的根结数量约下降56．9％，土壤和根中的线虫数量分别下降了45．5％和33．9％；接种70d后，根结数量约下降51．4％，土壤和根中的线虫数量分别下降了49．4％和66．3％。随着堆肥浸提物和堆肥茶使用浓度的增加，根结数量和最终种群数量均呈指数降低，堆肥茶的效果略优于浸提液。     

堆肥浸提物和堆肥茶抑制爪哇根结线虫的盆栽试验

利用腐熟堆肥的浸提液(1∶3,W/V)和由浸提液制备的堆肥茶作为盆栽番茄的液态肥,以评估其对爪哇根结线虫(Meloidogyne javanica)种群的影响。盆栽番茄苗并于4周龄时接种根结线虫第二期幼虫(J2)。试验期间用30%稀释的堆肥浸提液和堆肥茶原液淋灌。与对照组相比,在接种35 d后,堆肥茶使根部的根结数量约下降56.9%,土壤和根中的线虫数量分别下降了45.5%和33.9%;接种70 d后,根结数量约下降51.4%,土壤和根中的线虫数量分别下降了49.4%和66.3%。随着堆肥浸提物和堆肥茶使用浓度的增加,根结数量和最终种群数量均呈指数降低,堆肥茶的效果略优于浸提液。     

3种桉属植物乙醇抽提物对爪哇根结线虫的毒杀活性

采用直接浸泡法,测定了桉属(Eucalyptus)植物柠檬桉(E.citriodora)、杂交桉(E.urophyla×E.grand)和尾叶桉(E.urophyla)小枝条乙醇抽提物对爪哇根结线虫(Meloidogyne javanica)卵孵化的抑制活性以及对2龄幼虫的毒杀活性。结果表明:柠檬桉、杂交桉和尾叶桉乙醇抽提物对爪哇根结线虫卵的孵化均有较强抑制活性,以20 mg/mL乙醇抽提物液处理24、48、72 h后,抑制孵化率均达94%以上;对爪哇根结线虫2龄幼虫也有较强的毒杀活性,3种桉属植物以20 mg/mL乙醇抽提物液处理2龄幼虫72 h后,线虫校正死亡率均达90%以上。将柠檬桉和杂交桉的茎、叶干粉分别拌土盆栽防治空心菜(Ipomoea aquatica)和黄瓜(Cucumis sati-vus)爪哇根结线虫病。结果表明:柠檬桉和杂交桉茎、叶干粉对爪哇根结线虫病均有较好的防治效果,植株根系的根结数、根结内雌虫数和雌虫产卵粒数均下降,植株地上部鲜质量增加,且均与对照差异显著。     

桃树砧木品种筑波4号筑波5号对爪哇根结线虫的抗性

为探明桃树砧木品种筑波4号(Prunus persica'tsukuba-4')和筑波5号(P.persica'tsukuba-5')的抗根结线虫性能和抗原价值,对实生钵苗采用人工接种、根系次氯酸钠-酸性品红染色等方法研究了其对爪哇根结线虫(Meloidogyne javanica)的抗性.结果表明:接种后30～40 d,90株筑波4号中9株有线虫侵入,1株产生根结,侵入根中的13条线虫有11条未发育,2条发育至3龄阶段,无雌成虫形成;90株筑波5号中11株有线虫侵入,5株产生根结,侵入根中的24条线虫20条未发育,4条发育至3龄阶段,无雌成虫形成.表明2品种高抗爪哇根结线虫;实生苗个体间存在显著的抗性分离现象,但分离范围较小,只存在免疫和高抗2种基因型;免疫株率分别为98.9%和94.4%;对爪哇根结线虫均具有极强的抗侵入与抗发育能力,接种侵入率分别为0.014%和0.027%,根中线虫分别有15.4%和16.7%发育至3龄幼虫阶段,未形成成虫.筑波4号、筑波5号是极优异的抗爪哇根结线虫桃砧木品种和抗原植物种质资源.     

以番茄为寄主的香蕉穿孔线虫不同群体的致病性差异

为了建立一种简单易操作的室内香蕉穿孔线虫侵染寄主的致病性测定体系,本研究在（25±1） ℃ 下,通过室内试管石英砂培养的方法,以金丰1号番茄为寄主,以不同接种量和接种处理时间接种不同种群,检测线虫繁殖率、根系病害严重度和植株生长量,以分析不同种群的致病力差异。结果显示：以50、100、150和200条/株分别接种4个不同种群雌虫（HN6、SZ-FZ、GJ-LY323和DBSR）至30 d苗龄植株上,在接种9、16、23和30 d后进行观察分析,发现香蕉穿孔线虫主要侵染番茄根系的皮层细胞并在根系内发育繁殖;不同接种量和接种时间对番茄的致病存在差异,线虫繁殖率、根系病害严重度随接种量和时间的增加而增加,而植株生长量则减少;在以150条/株接种23 d后,各项指标差异最显著,能区分不同种群间的致病性;对香蕉穿孔线虫8个种群以150条/株接种30 d苗龄植株23 d后,发现其致病力从大到小依次为SZ-SWK>HaiN-YJ> HL-XY>SZ-FZ≥GJ-LY323>DBSR>HN6>ML-HG。以上结果表明番茄是香蕉穿孔线虫的良好寄主,在室内以150条/株接种量接种30 d苗龄的番茄,在接种23 d后分析线虫繁殖率、根系病害严重度和植株生长量3项指标可以评估不同种群的致病力差异。     

南方根结线虫对番茄致病性测定的初步研究

[目的]调查不同生育期南方根结线虫对番茄生长发育的影响。[方法]通过盆栽试验,系统观察番茄根结线虫病病情发展情况,讨论不同生育期感染根结线虫对番茄生长发育的影响。[结果]接种根结线虫2个月的番茄植株株高明显比健康植株矮,也矮于接种1个月的,而根重和病情指数则比健康植株及接种1个月的高,病情随着接种时间的延长明显加重。[结论]研究根结线虫的病情发展,对了解和防治番茄根结线虫病具有重要意义。     

黄皮酰胺纳米微乳剂的制备和特性及其对爪哇根结线虫杀线活性的测定

【目的】利用纳米技术,将黄皮酰胺(Clausenamide)制备成纳米微乳剂,增强其在使用环境中的稳定性,延长药效并提高其生物活性和防治效率。【方法】使用界面聚合法制备黄皮酰胺纳米微乳剂(NMEC),用zeta激光粒度分析仪和透射电镜(TEM)对纳米颗粒的粒径及形态进行测试和表征观察,在紫外灯下进行光降解测试,并用NMEC对爪哇根结线虫进行室内杀线活性测定和盆栽防效试验。【结果】制备的NMEC的等效粒径为(124.4±5.5)nm,包封率达到(95.17±1.42)%,4和6 h光降解率分别较黄皮酰胺丙酮溶液低18.52%和14.32%。NMEC对爪哇根结线虫的卵和2龄幼虫表现出良好的生物活性,100 mg/L NMEC处理卵的孵化率显著低于对照药剂(常规黄皮酰胺、灭线磷和克线磷)处理;在48 h时,200和400 mg/L NMEC处理2龄幼虫的死亡率分别为90.67%和99.33%,显著高于同质量浓度对照药剂处理,并且200 mg/L NMEC的杀线活性显著高于400 mg/L对照药剂处理。在盆栽试验中,NMEC处理空心菜的鲜质量显著高于清水对照和对照药剂处理;在药剂质量浓度为100 mg/L时,NMEC处理的根结数和根结指数分别为17.67和2.91,均低于或显著低于对照药剂处理;在药剂质量浓度为200 mg/L时,NMEC处理的根结数和根结指数分别为8.91和1.75,与质量浓度400 mg/L对照药剂处理间无显著差异。【结论】NMEC对爪哇根结线虫具有良好的杀线活性和防治效果,应用和开发前景广阔。     

番茄响应南方根结线虫侵染相关转录因子的初步分析

为明确番茄接种根结线虫后基因种类和表达量在转录水平的变化规律，利用RNA-seq对未接种及接种南方根结线虫2龄幼虫6、12、24和48 h的番茄进行转录组测序，探究番茄响应南方根结线虫侵染相关的关键转录因子，并采用qRT-PCR方法对测序结果进行验证。结果显示，接种南方根结线虫后6、12、24和48 h分别有350、390、580、1 154个基因差异表达，其中差异表达转录因子分别为11、11、19、50个。这些转录因子属于15个家族，其中数量最多的为MYB家族和bHLH家族（均为20个），其次是ERF家族19个、WRKY家族15个、bZIP家族9个。南方根结线虫侵染过程差异表达最明显的主要为ERF、WRKY、MYB和bHLH家族转录因子，其中Solyc03g005520、Solyc02g094270和Solyc09g066350显著上调，接种后48 h log₂FC分别为 9.16、6.49和6.33；Solyc02g079280、Solyc12g100140 和Solyc04g072460显著下调，接种后48 h log₂FC分别为-2.60、-1.72和-1.70。qRT-PCR验证结果显示，6个随机选取基因的表达趋势与测序结果基本一致。以上结果表明，ERF、WRKY、MYB和bHLH家族转录因子可能参与番茄与南方根结线虫互作，在番茄响应南方根结线虫侵染反应中发挥着重要的调控作用。     

PEG介导的Botryosphaeria dothidea突变体库表型分析及致病突变体筛选

对已建立的PEG突变体库中随机挑选的320株突变体菌株进行表型和致病性筛选,获得表型或致病性显著变化的菌株。将突变菌株及野生菌株接种至PDA培养基,观察生长3d和7d时菌落颜色及形态,测量菌落直径。将表型变化菌株及野生菌株接种于离体富士叶片,测量接种5d后病斑直径。生长速率检测显示有40株生长速率加快,有3株生长速率显著下降。14株突变体菌落颜色发生明显变化,菌落呈黑色或纯白色;15株突变体菌落形状不规则且气生菌丝稀疏;其中7株同时具有两种表型特征。致病性测定获得致病性增强突变体s104和致病性减弱突变体s172。所筛选的320株突变体中,表型异常菌株占6.8%,同时获得两株致病性变化菌株,对进一步揭示Botryosphaeria dothidea的致病机理具有重要价值。     

杨树溃疡病菌三菌系酯酶同工酶,可溶性蛋白质及致病性的研究

对来自不同产地、不同寄主的Ａ、Ｂ、Ｃ杨树溃疡病菌三菌系的酯酶同工酶、可溶性蛋白质以及致病性进行了分析测定，根据实验结果初步将这三个菌系分为两个不同的生理型，Ａ、Ｃ两菌系属同一生理型，Ｂ菌系属另一生理型，该结果与三菌系在形态特征和生理特性方面的差异基本相符合     

鸦胆子废渣抑菌活性成分分析

【目的】探究鸦胆子去油后废渣的抑菌活性成分,为开发生物药肥提供理论依据。【方法】采用菌丝生长速率法、孢子萌发法和滤纸片法等测定鸦胆子废渣粗提物及不同溶剂萃取物对禾谷镰刀菌、茄子黄萎病菌和西瓜枯萎病菌等18种供试植物病原真菌的生物活性,并通过生物活性跟踪对其乙酸乙酯萃取物的化学成分进行分离及鉴定。【结果】在10 mg/mL浓度下鸦胆子甲醇提取物仅对水稻纹枯病菌具有抑制活性,其抑制率为33.33%;但在5 mg/mL浓度下其石油醚萃取物和乙酸乙酯萃取物对供试病原真菌均具有一定的抑制作用,以乙酸乙酯萃取物的抑菌活性最明显,对12种供试病原真菌菌丝生长均具有一定的抑制作用,其中对火龙果溃疡病菌、苦瓜枯萎病菌和水稻纹枯病菌的抑制率分别达75.71%、56.47%和51.72%,对应的致死中浓度（EC₅₀）分别为2.65、3.48和2.10 mg/mL。乙酸乙酯萃取物对火龙果溃疡病菌孢子萌发的抑制作用随浓度的升高而增强,在浓度为2.5000 mg/mL时抑制率达100.00%;在紫外光和自然光条件下乙酸乙酯萃取物对火龙果溃疡病菌的抑菌活性稳定。从乙酸乙酯萃取物中分离得到catechol（1）、benzofuran-2-carboxaldehyde（2）、1H-Indazole（3）、vanillic acid（4）、cleomiscosin A（5）等5种化合物,其中,化合物2和3为首次从鸦胆子中分离获得,但化合物1、2、4和5对供试火龙果溃疡病菌、苦瓜枯萎病菌和水稻纹枯病菌均无显著抑菌活性（P>0.05）。【结论】鸦胆子废渣中含有抑菌活性成分,在植物病害防控上具有良好的应用前景。     

番茄对南方根结线虫抗性遗传规律的研究

以南方根结线虫的抗病亲本P2(0897-2-1-2-3-1-2-1)、感病亲本P1(9905-1-2-1-1-1-1-1)及 F1(P1×P2),F2(F1自交后代),BC1P1(F1×P1)和BC1P2(F1 × P2)为试材,以南方根结线虫二龄幼虫为虫源,进行苗期二龄幼虫人工接种鉴定和病土盘栽自然发病鉴定,研究番茄南方根结线虫病的遗传规律.结果表明,人工接种鉴定的植株在接种15 d左右,感病植株开始发病,接种45 d后感病植株已充分发病,表现为植株矮小,叶片变小、变黄,部分植株下部叶片黄枯,有的枯死;病土盘栽自然发病鉴定的植株较苗期接种鉴定的植株迟12 d左右发病,病症相似.卡方检测表明,F1、F2、BC1P1和BC1P2群体中抗病植株和感病植株分别符合1∶0、3∶1、1∶1和1∶0基因模型,符合孟德尔遗传规律.认为该试验所采用的抗性材料P2对番茄南方根结线虫的抗性是受一对显性基因控制的,为该材料的利用奠定基础,也为抗南方根结线虫番茄品种的选育提供参考.     

南方根结线虫对生姜生长发育的影响

研究了南方根结线虫对生姜生长和发育的影响.结果表明,南方根结线虫侵染生姜后,显著影响生姜的生长,致使生姜减产47.96%;同时降低了根系活力、叶绿素含量和光合速率,并改变光合作用的日变化规律.感染根结线虫的生姜根茎维生素C和挥发油含量降低,纤维素升高,致使品质下降.但根结线虫侵染提高了生姜叶片的硝酸还原酶活性,以及根茎可溶性糖、淀粉和游离氨基酸含量,这些变化则加剧了根结线虫的侵染和繁殖.     

灰葡萄孢霉对不同葡萄品种致病力差异的检测和分析

为了探明适合中国葡萄灰霉病菌致病力检测的方法以及合适的待测葡萄品种,采用菌丝块接种法和改良的保湿培养法,分别测定3个不同致病力类型的灰葡萄孢霉(Botrytis cinerea)菌株SDXL7 1、SDLK1 1、LNXCetz6 1对红提、青提、巨峰、紫奶、玫瑰香5个葡萄品种的致病力,并进行差异分析。结果表明,供试菌株均可引起5种葡萄发病,但致病力不同的菌株所致的平均病斑面积有明显差异,同一菌株在不同葡萄品种上的平均病斑面积也有明显差异。其中,巨峰和青提对灰葡萄孢霉具有较强抗性,红提和玫瑰香对3个灰葡萄孢霉菌株普遍易感,紫奶对菌株LNXCetz6 1具有较强抗性,但对另外两个菌株易感。试验结果为系统和全面地研究中国灰葡萄孢霉菌株的致病力分化提供重要依据。     

多杀性巴氏杆菌强毒株对雏鸭的致病性研究

【目的】探讨鸭源多杀性巴氏杆菌(Pasteurella multocida,PM)强毒株对雏鸭的致病性。【方法】以口服灭菌生理盐水的雏鸭为对照,通过口服和滴鼻接种途径将PM人工感染雏鸭,观察雏鸭的发病情况;于接种后不同时间内随机剖杀试验组和对照组雏鸭,采集肝脏、肺、心脏和脾脏、胸腺、腺胃和小肠等组织,常规方法制备石蜡切片,进行H.E.染色,观察各器官组织学变化;利用建立的间接免疫荧光法对PM在雏鸭体内的分布进行研究。【结果】接种PM后,引起雏鸭出现精神不振,呼吸困难,腹泻等症状;剖检病变以心包积液、肺出血和肝脏点状坏死为特征。PM动态增殖检测结果表明:滴鼻接种后12h,肺中PM含量最高,达到4.47×103 CFU/g,而口服接种后12h,胸腺中PM含量最高,达到5.12×103 CFU/g;2种途径接种PM后18～30h均以雏鸭胸腺PM含量最高。病理组织学变化以肺脏充血、出血,肝脏脂肪变性,脾索紊乱等为特征;荧光阳性信号主要分布于肺、肝脏、胸腺和脾脏等器官。【结论】PM感染主要引起雏鸭的出血、败血性变化;滴鼻接种PM对鸭的致病力明显高于口服接种;胸腺、肺、肝脏和脾脏是PM侵害的主要靶器官。