成龄桑树冬芽分离培养的研究——Ⅲ.试管植株的室外移栽

<正>前文曾报告了桑树多芽苗及其试管植株的诱导和继代培养的试验结果(蚕业科学,第9卷第2期).为了使成龄桑树冬芽分离培养的技术臻于完善,于1983—1984年继续进行了桑树试管植株移栽至室外的试验研究.1983年春季移栽室外的火桑、剑持二个品种的试管苗共计14株,全部成活,生长旺盛并已定干培养,1984年起开始采叶饲蚕.材料与方法试验材料为火桑、剑持二个品种,经由多芽苗而诱导的试管植株,已经盆栽成活,平均株高50厘米.移栽时间:1983年3月21     

湖桑硬枝扦插研究

本试验以发根力弱的当家品种湖桑32号剪梢枝条为插穗,通过扦插生根规律研究和采用温床捆插(每捆20株,每平方米扦插2000株左右)、加温(床温27～28℃,气温11～13℃)催根、床内炼苗、大田移栽等措施,湖桑扦插有了突破。即使不用激素处理,插穗发根率达95％左右,移栽成活率60～70％。扦插1株所花成本0.015元左右。试验还表明:春伐枝条的中下部作插穗,经NHM生根剂处理,在温床内可使发根率由58％提高到95％。插穗充实粗壮(直径1.2厘米左右),发根苗移栽成活率高,扦插适期苏州地区三月十日前后,留床38天左右移入大田,插穗生根率和移栽成活率分别达95％和76％。     

桑树叶片不定芽的快速诱导

<正> 用桑树冬芽未成熟叶和桑试管苗叶片为外植体均已成功地再生出完整植株。业已证实桑树叶片能够作为外源基因的受体。由于桑树基因工程操作包含许多环节,又往往需要反复试验才能成功。因此,建立桑树叶片不定芽的快速诱导实验体系具有重要意义。我们用萌发桑种子在 MS 培养基上建立试管苗,取其叶片接入分化培养基后20天就得到了不定芽,为桑树基因工程研究的开展建立了良好的实验体系。材料与方法一、试管苗的建立     

成龄桑树冬芽的分离培养——Ⅲ、试管植株的室外移载

<正> 前文报告了桑树多芽苗及其试管植株的诱导和继代培养建立的试验结果。为了使成龄桑树冬芽分离培养的技术臻于完善,我们于1983年至1984年继续进行了桑树试管植株移栽至室外的试验研究。结果1983年春季移栽至室外的火桑、剑持二个品种的试管苗共计14株全部成活,生长旺盛,并已定干培养;1984年起开始采叶饲蚕。     

Chi基因的克隆及转基因马铃薯植株的获得

为了提高马铃薯对真菌病害的抗性,本试验进行了马铃薯转基因抗病育种的初步研究。通过PCR扩增,从生防木霉菌Trichoderma atroviride的cDNA中克隆到一个内切几丁质酶基因Chi,构建了植物表达载体p33ECR-Chi。通过农杆菌介导的转化方法将Chi基因转化到马铃薯栽培品种“费乌瑞它”和“夏波蒂”试管薯片中。经侵染和共培养后,用卡那霉素和羟苄青霉素筛选抗性芽,共获得18株植株,对所得转化植株进行PCR检测,结果12株为阳性,占67%。本试验为利用基因工程技术提高马铃薯的生防能力奠定了基础。     

鸡源和兔源屎肠球菌的耐药性及相关基因分析

2020年4月,山东省某鸽场及某兔场发生腹泻情况,发病率较高.试验从病鸽及病兔肝脏中各分离到一株革兰氏阳性球菌,通过16S rRNA测序鉴定均为屎肠球菌.两株分离菌均未检测到cylA、gelE、ace等8种毒力基因.药敏试验和耐药基因结果显示,两个菌株都对β-内酰胺类耐药,耐药基因检测结果也一致.这些结果提示屎肠球菌或...     

无乳链球菌及其血清型的PCR方法鉴定

无乳链球菌(S.agalactiae)是引起奶牛乳房炎和新生儿期侵袭性感染(包括败血症、肺炎和脑膜炎)的重要病原菌.为快速准确地鉴定S.agalactiae及其血清型,本研究对22株从国内不同地区分离的牛源链球菌进行生化鉴定以及针对S.agalactiae保守基因sip进行PCR鉴定,并采用多重PCR技术扩增sip基因阳性菌株的cps基因进行血清分型.结果显示,PCR扩增sip基因阳性17株,其中15株生化试验与PCR结果一致;多重PCR扩增cps基因显示,其中Ia型4株、Ⅱ型11株、Ⅲ型2株.本研究为鉴定S.agalactiae及其血清型提供了参考.     

鸡传染性喉气管炎病毒贵州株gD基因的遗传进化分析

为了解在贵州省开阳县某养鸡场分离的1株鸡传染性喉气管炎病毒(ILTV贵州株)的遗传进化情况,试验设计、合成1对鸡传染性喉气管炎病毒gD基因引物,并通过扩增、克隆、测序该基因,分析其遗传进化情况.结果:PCR扩增基因为1134 bp.基因测序显示,ILTV贵州株与国内黑龙江、江苏、上海和国外澳大利亚、突尼斯、美国、意大利...     

根癌农杆菌介导的1─磷酸甘露醇脱氢酶基因转化百脉根的研究

本文以百脉根子叶外植体为受体材料，通过根癌农杆菌介导的方法，导入外源目的基因1－磷酸甘露醇脱氨酶（mtlD）基因和npt－Ⅱ基因，建立了转化系统，获得转基因植株，转化频率为9．7％．转化处理的外植体再生植株的茎段在含卡那霉素的分化培养基上膨大，再生成苗和植株。抗性植株的形态正常，移入盆栽后生长良好。PCR扩增与扩增产物的Southern杂交证明外源基因已整合到百脉根基因组上。     

猪布鲁菌S2omp10基因缺失株的构建及特性

现有的布鲁菌减毒活疫苗存在一定毒力,且野强毒株和减毒活疫苗株间缺少可供鉴别的抗原,导致在血清学检测上自然感染与疫苗接种很难区分,限制了现有的减毒活疫苗的广泛应用.本文拟对布鲁菌的减毒活疫苗株S2进行遗传改造,克服上述缺陷.本研究利用同源重组的方法,得到了布鲁菌S2株omp10基因缺失株.分别用基因缺失株和疫苗株感染小鼠,比较基因缺失株小鼠体内的存活能力.结果成功构建了布鲁菌S2株omp10基因缺失株,动物试验结果表明,基因缺失株仍能在小鼠体内存活,具备作为减毒活疫苗的特性.与原始S2株比较,基因缺失株的感染力进一步减弱.表明omp10基因在布鲁菌的毒力及体内生存方面发挥了作用,为基因标记疫苗的研制奠定了基础.     

猪链球菌2型湖南分离株多重耐药性及相关耐药基因研究

基因突变和基因转移是细菌耐药性产生和存在的重要内因,检测与抗生素耐药性相关的基因具有重要的意义.试验选取25份猪链球菌2型湖南分离株对16种抗生素进行药敏试验,检测菌株耐药性;选出了23株有红霉素抗性的菌株,用PCR检测其erm(B)基因.结果显示,猪链球菌湖南分离株对红霉素、四环素、万古霉素和克林霉素具有高耐药性,在23株红霉素抗性菌株中有18株存在erm(B)基因,由erm(B)基因产生的红霉素耐药菌株占到其中的78.3%.因此,erm(B)基因是链球菌2型湖南分离株对红霉素耐药的主要抗性决定基因.     

毛皮动物源大肠杆菌毒力和耐药基因检测及药物敏感性分析

为了解秦皇岛昌黎地区毛皮动物大肠杆菌毒力基因和耐药基因的分布及药物敏感性情况,以60只临床患病毛皮动物为试验菌株的分离宿主,采用常规分离纯化、生化鉴定以及分子生物学的方法对病原菌进行鉴定,动物致病性试验检测其致病性,PCR方法检测毒力基因和耐药基因,K-B法对常用西药进行药物敏感性检测,琼脂平板打孔法对中草药药物敏感性进行检测,试管二倍稀释法检测中草药的最小抑菌浓度(MIC)和最小杀菌浓度(MBC)。结果显示:此次分离到的28株大肠杆菌均使小鼠发病死亡;其中,24株大肠杆菌检测到irp2、fyuA毒力基因,检出率为85.7%;5株大肠杆菌临床分离菌株检出Ler、eaeA毒力基因,检出率为17.9%;耐药基因blaTEM、aadA1、blaCTX-M、blaTEM1、blaSHV-1、strA-strB、blaPSE1和blaOXA1的检出率分别为85.7%,89.3%,75.0%,71.4%,25.0%,24.1%,14.3%,14.3%;西药药敏试验结果显示,28株菌对链霉素、头孢拉定、多西环素、复方新诺明、林可霉素、替米考星、青霉素同时耐药;中草药药敏试验结果显示,诃子、乌梅、五味子对这28株大肠杆菌均具有较好的体外抑菌效果,抑菌圈直径为18～31 mm,MIC和MBC为15.63～500.00 g/L。     

变形杆菌的分离鉴定及其毒力与耐药相关基因检测

将从病死的牛、猪和鹅肝脏内分离的3株菌分别进行分离纯化、革兰染色镜检、生化试验和药敏试验,对其16S rRNA基因进行PCR扩增、测序、同源性比对,测定其毒力和耐药相关基因。结果显示,3株均为革兰阴性杆菌。16S rRNA基因序列同源性分析显示,2株分离菌与普通变形杆菌同源性高达999%,另外1株与奇异变形杆菌同源性高达100%。毒力基因检测表明,2株普通变形杆菌携带rpoA和fliL,奇异变形杆菌携带hpmA、hpmB、rpoA和fliL,均为编码溶血素和鞭毛的基因。药敏试验结果显示,3株变形杆菌对多种抗菌药物耐药,仅对头孢吡肟等敏感。对其耐药基因——头孢菌素酶(ampC)基因检测结果与药敏试验的结果基本一致。3株不同来源的分离菌均为变形杆菌,其致病性可能与其含有编码溶血素以及鞭毛的基因有关,对头孢菌素类耐药性可能与其携带ampC基因有关。     

35株不同来源的新城疫病毒(NDV)分离株F-糖蛋白基因序列测定和基因型

采用病毒分离试验、鸡胚平均死亡时间毒力试验、RT－PCR和F－糖蛋白基因序列测定及基因分析，对1996－2000年从国内不同地区多种禽类中分离到的新城疫病毒（NDV）分离毒株进行了研究，绘制了基因树。毒力试验结果表明，其中有32株为强毒株，有3株为中等毒力株。DNA序列分析和基因树结果表明，这35株NDV分为4个类群，其中27株为基因Ⅶ型（主要流行毒株），3株为基因Ⅵ型，4株为基因Ⅱ，1株为基因Ⅲ型。结果指示，我国新城疫感染来源是一个值得关注的问题。     

8株奶牛乳房炎链球菌的分离鉴定与耐药性分析

对湖南地区某奶牛场隐性乳房炎发病牛病原菌感染和耐药情况进行分析.对该牛场连续5次送检的乳样进行分离纯化培养、16sRNA PCR测序、药敏试验以及耐药基因检测.结果显示:共分离出链球菌8株.基因测序鉴定显示乳房链球菌4株、停乳链球菌2株、A群链球菌2株;药敏试验显示8株链球菌对氨苄西林、头孢拉定、万古霉素高度敏感,对阿奇霉素、四环素中度敏感,对诺氟沙星、庆大霉素、链霉素不敏感;耐药基因检测显示大环内酯类耐药基因ermB、喹诺酮类耐药基因gyrA、ParC检出率最高,与细菌耐药谱相关性不强.     

一株鸽新城疫病毒的分离鉴定

对广东地区疑似发生鸽新城疫感染的鸽病料进行病毒分离,通过血凝试验(HA)、中和试验、F基因扩增及序列测定.结果分离到1株血凝效价为4log2,且能被NDV阳性血清中和的病毒;用针对NDV F基因设计的特异性鉴定引物对该分离株进行PCR扩增,可扩增出相应的目的片段;测序及Blast分析表 明其与山东分离株chicken/...     

不同紫花苜蓿品种间抗寒性比较研究

以国内3个品种和加拿大两个品种紫花苜蓿为试验材料,进行人工控温试验低温胁迫处理后,测定再生植株的再生活力指数(SCORE1,SCORE2)、再生长率、根重、地上部重等各项再生指标并结合大田试验所得的越冬率,综合聚类后得到5品种间抗寒性次序为:肇东>新疆大叶>驯鹿>中苜1号>皇冠。     

脱水素基因转化紫花苜蓿及其初步抗旱性分析

为了获得抗旱性较强的转基因苜蓿,试验以紫花苜蓿品种"中苜2号"作为基因转化受体,将沙冬青脱水素基因通过农杆菌介导,转化到"中苜2号"中。试验结果表明,子叶和下胚轴作为外植体愈伤组织诱导频率最高,外植体与农杆菌的共培养时间以5d为最佳,试验共获得126株抗性再生植株;PCR和RT-PCR鉴定后,得到了11株阳性转基因苜蓿;通过干旱处理后,经初步的表型和脯氨酸分析显示,转基因苜蓿具有较强的抗旱能力。     

禽多杀性巴氏杆菌C48-3株hexABC基因缺失株的构建及其生物学特性分析

为研究荚膜在禽多杀性巴氏杆菌(Pasteurella multocida)致病过程中的作用,本研究利用同源重组基因敲除技术构建禽P.multocida C48-3株荚膜多糖输出蛋白基因hexABC的缺失突变株,并以小鼠为动物模型检测荚膜缺陷对细菌毒力的影响。PCR、RT-PCR和DNA测序结果均表明253 bp的hexC基因下游序列、798 bp的hexB基因全序列和290 bp的hexA基因上游序列完全被四环素抗性基因替代,表明构建了基因敲除突变株C48-3ΔhexABC。电镜观察结果表明突变株荚膜合成能力缺失,对小鼠的致病性试验结果显示突变株毒力基本丧失。本研究获得的无荚膜突变株为进一步研究禽P.multocida的致病机理奠定基础。     

毛皮动物源肺炎克雷伯菌部分毒力基因、耐药基因检测及药敏试验

为了了解河北秦皇岛毛皮动物(狐、貉、貂)源肺炎克雷伯菌毒力基因、耐药基因分布及药物敏感性等情况,采用常规分离纯化、生化鉴定及分子生物学的方法对病原菌进行鉴定,动物致病性试验检测其致病性,PCR方法检测其主要K血清型、毒力基因和耐药基因,K-B法对常用西药进行药物敏感性检测,琼脂平板打孔法对中药药物敏感性进行检测,试管二倍稀释法检测中药最小抑菌浓度(MIC)和最小杀菌浓度(MBC)。结果显示:此次共分离到48株肺炎克雷伯菌;48株肺炎克雷伯菌均能够使小鼠发病死亡;48株肺炎克雷伯菌均检测到fimH、wabG毒力基因,检出率为100%;mrkD毒力基因检出率为87.5%;blaTEM、aadA1、gyrB、gyrA、blaSHV-1、sul1、sul2、sul3、blaROB-1、tetA和tetD耐药基因的检出率分别为100.0%、100.0%、89.6%、4.2%、39.6%、18.8%、27.1%、16.7%、12.5%、60.4%和37.5%,未检出ermF耐药基因。西药药敏试验结果显示,48株肺炎克雷伯菌临床分离菌株均对头孢拉定、复方新诺明、林可霉素、替米考星、磺胺间甲氧嘧啶耐药。中药药敏试验结果显示,48株肺炎克雷伯菌临床分离菌株对乌梅、五味子极度敏感,抑菌圈直径在20～25 mm之间,MIC和MBC为15.63～62.50 g/L。本试验调查了河北秦皇岛地区毛皮动物源肺炎克雷伯菌的流行情况,对毛皮动物源出血性肺炎的防治具有重要的指导意义,更具公共卫生学意义。