不同前体对黄芪悬浮培养细胞中黄芪多糖积累的影响

[目的]研究苯丙氨酸、草酸和油酸等前体对黄芪细胞生长和黄芪多糖合成的影响.[方法]在细胞培养的第O天,向细胞悬浮培养液中加入3种前体,测定细胞干重增殖倍数和黄芪多糖的含量.[结果]添加2 mmol/L的草酸可以明显地促进黄芪细胞中黄芪多糖的积累,其含量为对照组的1.80倍;较低浓度苯丙氨酸能有效促进黄芪细胞中黄芪多糖的合成;当苯丙氨酸浓度为1.Ommol/L,黄芪多糖的含量达最大,为33.429 mg/g,为对照组的1.70倍;当油酸添加浓度由0.1mmol/L增加至2 mmol/L时,细胞中黄芪多糖的含量逐渐提高;2 mmol/L的油酸使黄芪多糖的含量达37.565 mg/g,为对照组的1.91倍.[结论]前体的添加可有效促进黄芪悬浮培养细胞中黄芪多糖的积累.     

不同氨基酸前体饲喂对卷叶贝母培养物中有效组分的影响

[目的]通过在卷叶贝母液体培养基中添加不同氨基酸研究其对卷叶贝母培养物中有效组分的影响。[方法]分别在卷叶贝母液体培养基中添加不同浓度的苯丙氨酸、酪氨酸和色氨酸,并利用分光光度法测定培养25 d后其培养物中总生物碱含量。[结果]添加苯丙氨酸、酪氨酸和色氨酸前体物均能显著地提高卷叶贝母培养物的增殖倍数和总生物碱含量。[结论]添加浓度为0.50 mmol/L的酪氨酸试验组其培养物增殖倍数最高为2.60,以添加浓度为0.50 mmol/L的色氨酸试验组其总生物碱含最高,为0.212%。     

诱导子和前体协同添加对悬浮培养的鸡血藤细胞产异黄酮的影响

在鸡血藤细胞悬浮培养的动力学基础上,研究诱导子(茉莉酸甲酯)、前体(苯丙氨酸、乙酸钠)以及两者协同添加对鸡血藤细胞产异黄酮的影响。结果表明:悬浮培养的鸡血藤细胞的异黄酮合成与细胞生长之间存在半偶联关系,指数生长期前期的第3d有最大生长加速度,此时是最优添加时间。诱导子和前体单独添加均能促进异黄酮的合成,茉莉酸甲酯、苯丙氨酸和乙酸钠的最佳添加浓度分别为100、300、100μmol/L,异黄酮含量分别为对照的1.34、1.83和1.57倍。诱导子和前体协同添加对异黄酮合成的促进作用强于单独添加,茉莉酸甲酯+苯丙氨酸+乙酸钠处理下异黄酮含量高达19.32mg/L,为对照的3.62倍。     

西洋参细胞悬浮培养体系的建立

目的:建立西洋参细胞悬浮培养体系。方法:通过不同激素和物理影响因素筛选出西洋参细胞培养的最佳条 件。结果:将西洋参愈伤组织接种于附加0.5mg·L-1 2,4-D + 0.1 mg·L-1 KT + 0.2 mg·L-1 NAA 的MS 培养基上最适合 西洋参愈伤组织的生长;用西洋参愈伤组织制作西洋参细胞,发现西洋参悬浮细胞生长曲线类似“S”型;通过改变西洋 参细胞悬浮培养的外界条件发现,西洋参悬浮细胞生长的最佳接种量为1.5 g/30mL,摇床转速和光照条件对西洋参细 胞生长影响没有显著差异。结论:建立了西洋参细胞悬浮培养体系,该技术为西洋参细胞的扩大培养和有效成分的提 取提供了物质基础。     

川贝母多倍体诱导条件的优化及含量测定

采用正交试验法考察秋水仙素浓度、浸泡时间、二甲基亚砜体积分数、处理温度对川贝母(Fritillaria cirrhosa)愈伤组织多倍体诱导的影响.以多倍体诱导率为指标,用正交试验表L9(34)进行试验,筛选最佳诱导条件.在考察的因素中,对川贝母多倍体诱导率影响的大小次序依次为秋水仙素浓度＞浸泡时间＞二甲基亚砜体积分数＞处理温度.多倍体诱导条件的最优组合是秋水仙素浓度为900 mg/L、浸泡时间为48h、二甲基亚砜体积分数为4％、处理温度为20℃,在此条件下,其诱导率可达94.3％;细胞染色体鉴定结果为四倍体染色体数为2n=4x=48,诱导后的愈伤组织为多倍体;对野生、组培二倍体、组培多倍体川贝母鳞茎进行有效药用成分生物碱总含量测定,其中组培多倍体生物碱总含量最高为0.657％.     

川贝母鳞茎组织培养过程中褐化的控制初探

本试验以川贝母鳞茎为外植体,研究了川贝母鳞茎在组织培养过程中的褐化发生及其控制措施。研究发现,引起川贝母鳞茎褐化的主要原因为创伤和消毒剂作用,可以通过减小伤口、降低消毒剂浓度和作用时间来进行控制,此外,控制褐化的有效措施还有调节培养温度、添加褐化抑制剂。结果表明,外植体采用HgCl₂和次氯酸钠消毒8 min,置于添加了聚乙烯吡咯烷酮的培养基中,在光照周期8 h·d^-1、温度为(25±2)℃,暗周期16 h·d^-1,温度为(15±2)℃条件下培养可以明显降低褐化率,提高组培苗获得率。     

NC89烟草悬浮细胞生产辅酶Q10的条件优化

研究了NC89烟草悬浮细胞的最佳培养方案,为进一步提高辅酶Q10的产量提供理论依据.通过单因素试验和正交试验考察了培养基种类、蔗糖浓度、接种量、转速、pH值和装液量对烟草细胞生长及辅酶Q10合成的影响.结果表明:接种量对细胞的生长及辅酶Q10合成的影响作用极显著;蔗糖浓度对二者的影响均不显著,优选蔗糖浓度为20g·L-1;装液量对辅酶Q10合成的作用显著,而对细胞生长作用不显著;优选转速为110r·min<-1>,pH值为6.2.可见,适于NC89烟草细胞生长及辅酶Q<,10>合成的优选培养条件为White基本培养基,附加蔗糖20g·L-1,装液量为20mL(100mL三角瓶),接种量75g·L-1,初始pH值为6.2,摇床转速为110r·min-1.在该条件下细胞产量和辅酶Q10含量分别为16.653g·L-1和14.780mg·L-1.     

虫草菌液体悬浮培养条件研究

通过单因素试验对虫草菌的液体悬浮培养条件进行优化,确定虫草菌的最优培养条件为:培养温度24℃,培养基初始pH值6.0,500 mL摇瓶装液150 mL,摇床转速150 r/min。在此条件下培养96 h,菌体干重最高达到10.43 g/L。     

向日葵耐盐细胞系悬浮培养条件的初步筛选

本实验以1414向日葵品种为材料,研究耐盐向日葵细胞的最佳培养条件。实验结果表明,向日葵细胞在含6-BA0.5mg/L、2-4 D 0.001mg/L、蔗糖5%的MS培养基中,用100目细胞筛网过滤,其细胞分裂能力最强。     

药用植物青天葵的悬浮培养条件优化

以悬浮细胞干重增加率、酶活力为考察指标,研究不同培养基、光照条件、蔗糖浓度、培养基pH值对药用植物青天葵细胞生长的影响,对青天葵悬浮细胞培养方法进行条件优化。结果表明,1/4MS和1/2MS培养物外观形态最佳,1/2MS组培养物干重增加率最大,MDA含量最低,POD含量最高;暗培养条件有利于愈伤组织干重的增加;蔗糖浓度为1%时愈伤组织干重增加率显著高于其他处理组,pH6.0为青天葵悬浮培养的合适pH值,培养基中添加MES可明显提高干重增加率。     

不同来源卷叶贝母鳞茎药效学研究

[目的]对不同来源的3种卷叶贝母鳞茎进行药效学比较研究。[方法]选择组织培养卷叶贝母鳞茎、野生卷叶贝母鳞茎和人工栽培（抚育）卷叶贝母鳞茎为试验材料,采用氨水引咳法和气管酚红排泌法进行药效学研究。[结果]不同来源的卷叶贝母鳞茎均有显著的止咳和祛痰作用。通过统计学分析,3种鳞茎的止咳和祛痰作用均无显著性差异。[结论]可以用组织培养的卷叶贝母鳞茎代替野生卷叶贝母和人工栽培卷叶贝母鳞茎入药。     

卷叶贝母愈伤组织超低温保存关键技术研究

[目的]建立一套完整、快速和经济的卷叶贝母超低温保存关键技术。[方法]对卷叶贝母愈伤组织超低温保存技术中的预培养时间、保护剂类型和解冻方式进行了研究。[结果]预培养时间、冷冻保护剂类型和解冻方式均是影响卷叶贝母愈伤组织冷冻保存过程中的关键因素。经预培养9 d、由10%二甲基亚砜和0.5 mol/L山梨醇组合的复合冷冻保护剂冷冻、在40℃水浴条件下解冻的卷叶贝母愈伤组织其保存效果最佳,保存后细胞的存活率可达87.39%。[结论]为更好地保护卷叶贝母种质资源提供了参考。     

卷叶贝母多倍体鳞茎诱导方法研究

[目的]利用组织培养技术快速诱导生成卷叶贝母（Fritillaria cirrhosaD.Don）多倍体鳞茎。[方法]用一定浓度的秋水仙素溶液浸泡经预分化培养的卷叶贝母紧密愈伤组织团块,再经过诱导分化培养获得多倍体鳞茎。[结果]用浓度为1.2 g/L的秋水仙素溶液浸泡处理卷叶贝母紧密愈伤组织团块24 h后,接种在MS＋6-BA 1.0 mg/L＋NAA 0.3 mg/L的分化培养基上培养,其多倍体鳞茎的诱导率最高为83.3%,细胞染色体数为2n=4x=48,总生物碱含量为0.249%。[结论]用组织培养技术获得优质高产卷叶贝母多倍体鳞茎的方法是可行的。     

川贝母叶高效诱导愈伤组织体系的研究

以川贝母的叶为外植体快速诱导愈伤组织,生产出大量有效组分含量高的组织培养物,为提高川贝母植物资源利用率奠定基础。通过比较川贝母叶的不同叶龄、形态部位、接种方式和培养温度对其愈伤组织产生的影响,获得川贝母愈伤组织诱导的最佳条件。结果得出,选取生长7 d左右的叶的形态学下端为外植体,采用叶基部直接插入培养基的接种方式,在变温的条件下培养,愈伤组织的诱导率最高,为95.20%。     

川贝母新品种川贝1号多点品比试验

[目的]通过川贝母多点品种比较试验,优选川贝母新品系。[方法]从川贝母种质资源中系统选育获得川贝母新品系CB-1、CB-2,以现有栽培品种为对照,于2013、2014年度在甘孜州、阿坝州、宝兴县等5个点开展2年多点品种比较试验,收获后测定小区产量,用RCT99作物品种区试试验管理分析系统进行统计分析。[结果]CB-1在2年多点品比试验中表现出良好的丰产性能,比对照品种增产显著,均排名第1,且其西贝母碱含量高于对照品种,居第1。该新品系已于2014年通过田间技术鉴定,并于2015年通过四川省农作物品种审定委员会审定,品种名为川贝1号。[结论]川贝1号稳定性好、适应性强、产量高、品质佳,是国内首个通过审定的川贝母新品种,可进一步进行推广。     

遮阴对栽培川贝母生长和产量的影响

[目的]研究不同遮阴条件对栽培川贝母生长特性和产量的影响,为其规范化种植提供理论依据。[方法]以川贝母“树儿子”期和“灯笼花”期植株为试验材料,设置阴蔽度、棚高和遮阴网颜色3个因素,每个因素设置3个水平,以不遮阴为对照,研究不同遮阴条件对川贝母生长特性的影响。[结果]遮阴导致川贝母“树儿子”期植株叶片宽度降低（P〈0．05）,对其株高、叶片数、叶片长度、节间长度和鳞茎产量的影响不显著（P〉0．05）;遮阴提高了川贝母“灯笼花”期植株的株高、节间长度,降低了叶片宽度、开花率和挂果率（P〈0．05）,对叶片数、叶片长和鳞茎产量的没有显著影响（P〉0．05）。[结论]大田栽培川贝母“树儿子”期和“灯笼花”期不宜采取遮阴措施。     

川贝中生物碱提取工艺优化

为优化川贝中生物碱的提取工艺,采用超声辅助酸性醇提取法,选取pH值、乙醇体积分数、超声时间、料液比作为考察条件进行单因素试验,并进行L9(34)正交试验。结果表明,pH值、乙醇体积分数对生物碱提取的影响较大。川贝中总生物碱的最优提取组合为A1B2C3D1,即pH值为1,乙醇体积分数50%,超声时间75min,料液比1:10。     

GA3解除川贝母种子休眠过程中酯酶和过氧化物酶同工酶的变化

[目的]研究不同浓度的GA3对解除川贝母种子休眠过程中酯酶同工酶和过氧化物酶同工酶变化的影响。[方法]用浓度0（CK）、20、40、60、80mg／L的GA3处理川贝母种子,对不同浓度GA3下的酯酶同工酶和过氧化物酶同工酶进行电泳分析。[结果]浓度40和60mg／L GA3处理时,川贝母种子酯酶同工酶在图谱上增加2条彤分别为0．3893和0．937的新谱带;而其过氧化物酶同工酶在图谱上分别增加2条可为0．833和0．937的新谱带,且在浓度60mg／LGA3处理时,图谱中又增加1条彤为0．771的新谱带。[结论]浓度40mg／L和60mg／LGA3对川贝母种子休眠的解除有一定的作用。     

浙贝母花的氨基酸成分分析

[目的]测定浙贝母花中氨基酸的种类和含量,为浙贝母花的资源开发提供科学依据。[方法]以采摘后自然阴干,冷冻干燥的和流化床干燥的浙贝母花作为研究对象,采用茚三酮柱后衍生-氨基酸分析法,测定3种处理下的浙贝母花的氨基酸含量。[结果]共测出17种氨基酸,并且氨基酸的总量在3种处理的浙贝母花中均高达200g/kg,其中谷氨酸含量最高,7种人体必需氨基酸均占所测氨基酸总量30.0%以上。[结论]浙贝母花及其相关产物具有较高的药用价值和保健价值,值得进一步开发。