BA-BLISA检测牛结核血清抗体的研究

本试验建立了 BA-BLISA 检测牛结核血清抗体的方法.以结核清净场604头牛血清,经 BA-ELISA 检测,阴性平均值 ()=0.18.以平均值 3倍标准差为临界值,检测了结核菌素(OT)变态反应阳性牛115头,BA-ELISA的阳性率为61.73%,比常规 ELISA 的阳性率(54.78%)提高6.95%.BA-ELISA 的敏感性是 ELISA 的4倍.对10头变反阳性、50头变反阴性牛的 BA-ELISA 检测结果,与病变及细菌学检查的阴、阳性符合率均为100%.对5种病牛血清(牛副结核、牛布氏杆菌病、牛腹泻粘膜病,牛白血病、牛传染性鼻气管炎)及3种分枝杆菌(草分枝杆菌、偶发分枝杆菌、堪萨斯分枝杆菌)的免疫血清检测结果证明,BA-ELISA 具有较好的特异性,所建立的 BA-ELISA 是检测牛结核血清抗体的一种敏感性高、特异性强的新方法.     

ESAT-6及PPD ELISA检测疫区和非疫区牛结核病的比较研究

本实验克隆、表达了牛结核早期分泌靶抗原蛋白6（ESAT-61抗原,建立了ESAT-6酶联免疫吸附检测方法（ELISA）。同时应用牛结核提纯菌素（PPD）ELISA和ESAT-6-ELISA对采自疫区的641头牛和非疫区的324头牛进行检测,其中PPD-ELISA检测中,疫区有581头阳性牛,阳性率为90．64％,非疫区有2头阳性牛,阳性率为0、62％;ESAT-6-ELISA检测中,疫区有567头阳性牛,阳性率为88．45％,非疫区没有阳性牛。对采自疫区的23例变态反应阳性牛和非疫区的7例变态反应阳性牛进行检测,其中PPD-ELISA检测中,疫区有20头为阳性。与变态反应的符合率为86．90％,非疫区有1头为阳性,与变态反应的符合率为14％;在ESAT-6-ELISA检测中,疫区有18头为阳性,与变态反应的符合率为78．30％,非疫区没有阳性。这些结果表明：ESAT-6-ELISA的敏感性要低于PPD-ELISA;牛结核ELISA在非疫区应用效果较差,在疫区更具有应用价值。     

聚合OT抗原ELISA检测牛结核血清抗体

以聚合OT为抗原的ELISA检测了结核清净场1026头牛血清的ELISA值((?)=0.07,SD=0.05)。以(?) 3SD为临界值,检测了结核菌素(OT)变反阳性牛118头,阳性率56％。屠宰牛中,OT变反阳性6头,3头有结核病变,细菌学检查阳性,ELISA阳性;另3头无可见病变,1头有肝片吸虫寄生,2头细菌分离培养在肺门淋巴结培养出快生长抗酸菌,此3头ELISA阴性,检测了四种疾病及三种分枝杆菌免疫血清,阳性1例,交叉反应率1.75％。     

牛副结核ELISA诊断方法研究

本文建立了牛副结核病ELISA诊断方法。采用亲和层析抗原。被检血清以高压粉碎草分枝杆菌吸收原进行吸收。该方法的敏感性76％,特异性97％,通过对2483头奶牛进行检测,检出率为6.1％,并与常规的补反和变态反应进行了比较。作者认为:牛副结核ELISA可以替代补反,做为检测牛副结核的一种有力手段。     

应用酶联SPA-ELISA检测结核病奶牛血清抗体的研究

以牛PPD作包被抗原,应用醇联SPA—ELISA方法检测了结核变态反应阳性及阴性奶牛血清各40份,结果两者差异极显著(OD值分别为=.854,Sx=0.131=0.32 Sx=0.036)。在应用牛PPD、牛OT、禽PPD作包皮抗原时,在上述血清中,只有牛PPD抗原是特异的,4份结核变态反应阳性牛血清经牛PPD吸收后,其OD直均下降至接近阴性血清水平。此外还对包皮抗原浓度,待检血清最适稀释度做了筛选试验。本试验为应用酶联SPA-ELISA法诊断牛结核病提供了依据。     

ELISA检测乳中牛结核抗体的研究

结核病是由结核分支杆菌引起的一种严重的慢性人畜共患传染病,曾经是人类历史上最猖獗的传染病之一。试验以牛乳为试验材料,建立一种诊断牛结核病的间接ELISA方法,目的是为诊断牛结核病找到一种更快捷、简便的方法,减少人力资源的投入,减轻医务工作者的劳动强度,便于ELISA方法在临床上应用。1材料与方法1.1材料1.1.1抗原牛结核PPD,购于黑龙江省生物制品一厂(批号为9902)。1.1.2牛乳阳性牛乳为牛结核变态反应阳性,涂片镜检或细菌分离培养呈阳性,其血清经多次ELISA检测OD值大于临界值的病牛的牛乳。阴性牛乳为牛结核变态反应阴性,细菌…     

皮试法与γ-干扰素ELISA法在奶牛结核病检疫中的对比试验

为制定奶牛结核病净化方案提供参考,通过颈部皮内变态反应(SICT)检测上海某奶牛场的483头奶牛,然后用γ-干扰素ELISA方法检测皮试法阳性牛及与阳性牛密切接触牛共50头。结果发现:颈部皮内变态反应与γ-干扰素ELISA的阳性符合率100%;在变态反应阴性牛中,仍然检出了部分ELISA阳性牛。我们考虑在高风险牛场增加皮内变态反应试验频率,再随之实施抗体检测,会更有利于结核牛场的净化与防制。     

间接ELISA检测牛分枝杆菌抗体方法的建立及初步应用

针对现行牛结核病检疫方法结核菌素皮内变态反应(TST)的不足,本研究选用牛分枝杆菌特异性抗原MPB83、MPB70及CFP10与ESAT-6融合蛋白(CFP10-ESAT-6)分别建立了检测牛分枝杆菌特异抗体的间接酶联免疫吸附方法(ELISA)。上述3种抗原中一种以上抗原的特异性抗体为阳性时,即可判断为结核检测阳性。以TST为标准,判断ELISA方法的敏感性与特异性。结果证明,ELISA方法具有较好的敏感性(71.4%)。对ELISA检测为强阳性的奶牛进行细菌分离,并对5头结核菌分离阳性奶牛进行TST检测,结果有3头为TST阳性,2头可疑,显示出ELISA方法对严重感染牛的检测较TST具有更高的敏感性。由于TST与ELISA分别以细胞免疫与体液免疫为基础,两种检测方法结合应用可进一步提高牛结核病的检出率。     

Dot-ELISA检测牛副结核病抗体的研究

本文利用提纯的副结核分枝杆菌胞浆特异性抗原,建立了检测牛副结核抗体的Dot-ELISA方法。用该方法对粪便培养阳杜的32头份牛副结核病血清检测,检出27头,阳性检出率为84.4％,其敏感性与ELISA相似。与10头OT变态反应阳性牛血清检测,无交叉反应。M.phlci.M.fortuitum.M.kansasii人工高免血清经两次用M.phlci悬液吸收,用建立的Dot-ELISA方法也无交叉反应。表明设立的Dot-ELISA具良好的敏感性特异性。     

3种方法检测结核污染牛场的比较

应用牛结核变态反应、牛结核斑点免疫金银染色法(Dot—IGSS)和ELISA3种方法，同时检测结核污染牛场的498头份牛血清。结果发现，阳性检出率以变态反应为最高(28．3％)。Dot—IGSS居中(27．3％)，ELISA最低(17．2％)；变态反应与Dot—IGSS和ELISA的符合率较差，而ELISA和Dot—IGSS具有较好的符合率；在变态反应阴性牛中，仍然检出了部分Dot—IGSS和ELIsA阳性牛。由此认为，先以变态反应检疫牛群，再随之实施抗体检测，会更有利于结核污染牛场的净化与防制。     

牛结核γ-干扰素ELISA检测方法在检疫工作中的应用

为评价牛γ-干扰素ELISA检测方法检测牛结核的效果及国产试剂盒的检测效果,本试验首先将国产试剂盒与Prionics试剂盒对42份相对阳性的样品和105份相对阴性的样品进行对比研究。然后对5个规模化牛场的3000头奶牛首先进行国产单纯结核菌素颈部皮内变态反应试验,3天后选取皮内变态反应阳性和可疑及部分阴性牛共418头,进行牛γ-干扰素试验。结果国产试剂盒对阳性和阴性样品的检测敏感性和特异性分别为95.2%和100%,与Priobics试剂盒的符合率为99.3%。表明国产试剂盒与进口试剂盒的检测能力一致,牛γ-干扰素检测方法准确可靠。5个牛场的3000头奶牛单纯结核菌素颈部皮内变态反应试验阳性为138头,可疑105头。γ-干扰素试验对418头奶牛的检测,其中阳性74头,与颈部皮内变态反应（可疑牛暂时视为阴性）的符合率为60.5%。     

结合皮内变态反应与γ干扰素ELISA的牛结核病检疫

巴州辖区内某奶牛场为根除牛结核病对该奶牛场的威胁,技术人员根据该奶牛场情况制定了检疫计划,选用皮内变态反应与γ干扰素ELISA检测相结合的方法,从而达到检疫的目的。初筛检疫使用牛型结核病PPD(纯化蛋白衍生物)皮内变态反应,出现阳性或可疑牛之后,再对其接触较为密切的同群牛进行γ干扰素ELISA(酶联免疫吸附试验),目的在于检出与患病动物接触的牛群是否处在牛结核感染的潜伏期。检测结果:皮内变态反应全检150头奶牛后,出现1例阳性牛和1例可疑牛,之后将阳性、可疑与同属一个圈舍的其他13头牛进行γ干扰素ELISA检测,出现1例牛型结核分枝杆菌阳性、14例阴性。表明牛结核PPD皮内变态反应结合γ干扰素ELISA可以有效提高牛结核病检疫的准确性,节省检疫时间,减少因单纯使用牛结核PPD皮内变态反应出现假阳性而造成的不必要扑杀。     

副结核病的ELISA血清诊断法

Jorgensen 和 Jensen 以副结核分枝杆菌的粗提抗原建立了 ELISA,检查了40头疑为因副结核菌引起腹泻的牛血清,对30头细菌学阳性牛,ELISA 的阳性滴度为1:10到1:640;对10头培养法检查阴     

四种不同检测方法在奶牛结核病诊断中应用的比较研究

应用γ干扰素试验、胶体金试纸条对100头奶牛进行试验,采集这100头奶牛的肝素抗凝全血及血清,经全血培养、抗原刺激,用γ干扰素试剂盒检测上清,用胶体金试纸条检测血清。同时应用传统皮内变态反应、欧盟比较皮内变态反应,对这100头奶牛进行检测,3d后观察结果。在100头被检测的奶牛中,传统皮内变态反应检出结核阳性36头,欧盟比较皮内变态反应检测出结核阳性13头,两种γ干扰素试验试剂盒分别检出结核阳性12头和10头,两种胶体金试纸条分别检出结核阳性11头和9头。     

Dot—ELISA检测牛副结核病抗体的研究

本文利用提纯的副结核分枝杆菌胞浆特异性抗原，建立了检测牛副结核抗体的Ｄｏｔ－ＥＬＩＳＡ方法，用该方法对粪便培养阳性性的３２头份牛副结核病血清检测，检出２７头，阳性检出率为８４．４％，其敏感性与ＥＬＩＳＡ相似，与１０头ＯＴ变态反应阳性牛血清检测，无交叉反应。Ｍ－ｐｈｌｅｉＭ．ｆｏｒｔｕｉｔｕｍ．Ｍ．ｋａｎｓａｓｉｉ人工高兔血清经两次用Ｍ．ｐｈｌｅｉ悬液吸收，用建立的Ｄｏｔ－ＥＬＩＳＡ方法也无交叉反应     

四种方法检测广西奶水牛结核病的比较

应用牛结核菌素对奶水牛进行牛结核病皮内变态反应的检测,然后对皮内变态反应阳性牛采样进行分离培养、γ-干扰素ELISA和聚合酶链反应检测,比较这四种检测方法的符合率。结果共对1850头奶水牛进行皮内变态反应检测,皮内变态反应阳性的奶水牛有78头,从78头反应阳性的奶水牛中分离鉴定为牛分枝杆菌的有2份,γ-干扰素ELISA方法检测为牛分枝杆菌阳性的有5份,PCR方法鉴定阳性的有4份;阳性检出率以变态反应为最高78/1850(4.21%),γ-干扰素ELISA方法为5/78(0.27%),PCR检测方法为4/78(0.21%),而分离培养为最低2/78(0.105%)。变态反应与分离鉴定的符合率最低,为0.105%;γ-干扰素ELISA方法、PCR方法与分离鉴定的符合率较接近,分别为40%和50%。γ-干扰素ELISA检测方法和PCR检测方法具有较好的特异性,可以作为变态反应检测的补充。     

用ELISA检测血清、乳样和尿样中BLV感染的比较K、T、Carli等

从15头BLV阳性牛和20头BLV阴性牛采集血清、乳样和尿样。血清用含0．2％吐温一20，0．001％硫柳汞的＊BS作1：100稀释，乳样作1：4稀释，阳性和阴性参照血清溶于0．sml灭菌蒸馏水中，再作1：100稀释。阳性参照血清稀释后一式3份用于各个试验板中，以便计算阳性临界值。ELISA试验步骤为；100PI稀释血清加入含病毒抗原孔或阴性对照抗原孔．4C“作用18～24h．用稀释缓冲液洗板3次．每孔加入100ul过氧化物酶结合物（抗牛IgGI单克隆），371：温有比，洗涤后加入10On底物（PH4．2，0．SM醋酸盐缓冲液中溶有ZmMABTS，添有外l％H。0，…     

牛型结核菌素皮内变态反应试验和γ-干扰素ELISA试验检测奶牛结核病的比较研究

本研究采用PPD皮内变态反应试验和γ-干扰素ELISA试验,对甘肃省3个地区的1585头奶牛进行结核病检测.结果表明,PPD皮内变态反应共检出7份阳性样品;经γ-干扰素ELISA检测2份为阳性、其余5份为假阳性或禽型阳性,假阳性或禽型阳性样品再经细菌分离鉴定表现为阴性;PPD皮内变态反应检出的21份疑似样品再经γ-干扰素ELISA检测,表现为禽型阳性、假阳性或阴性;PPD皮内变态反应阴性样品经γ-干扰素ELISA试验检测,结果为阴性或禽型阳性.在检测奶牛结核病时,PPD皮内变态反应试验特异性较差,γ-干扰素ELISA试验结果与牛结核分枝杆菌细菌分离鉴定结果一致,而且该技术敏感性、特异性和鉴别假阳性均优于PPD皮内变态反应试验.     

应用皮内变态反应和γ-干扰素体外释放试验检测奶牛结核病的比较研究

本研究首先应用皮内变态反应对10200头奶牛进行结核病检测,然后应用γ-干扰素体外释放试验对前者检测出的阳性牛和可疑牛再次进行结核病检测,比较两者的阳性符合率。结果显示,应用皮内变态反应共检测出结核病阳性牛96头、可疑牛4头;γ-干扰素体外释放试验检测皮内变态反应呈阳性的96头奶牛,结果为阳性牛94头、阴性牛2头,而检测皮内变态反应为可疑的4头奶牛,结果全为阳性。结果表明,两种方法的阳性符合率为97．92％（94／96）,虽然皮内变态反应存在一定的假阳性,且费时、费力,但考虑到γ-干扰素试剂盒比较昂贵,建议用皮内变态反应作为初筛试验,γ-干扰素试验用于初筛阳性样品的复核,以提高结核病检测的准确性。     

ELISA、补体结合反应、变态反应诊断牛副结核病的比较

应用 ELISA、补体结合反应和变态反应检测牛副结核病,结果,ELISA 的检出率为6.7%,补反为2.2%,变态反应为3.7%。应用三种方法对49头粪便检菌阳性牛进行诊断比较,结果,ELISA与粪便检菌的符合率为93.9%,补反为57.1%,变态反应为52.9%。检测部分有副结核临床症状的牛,ELISA 检出率为88.2%,补反为50%,变态反应为25%。