柔嫩艾美耳球虫癸氧喹酯耐药株的诱导研究

采用药物浓度递增法,在实验室条件下进行柔嫩艾美耳球虫耐药虫株的诱导。以5.4 mg/kg癸氧喹酯为起始诱导浓度连续传代,以病变记分减少率(RLS)、最适抗球虫指数(POAA)和抗球虫指数(ACI)3项指标综合判定耐药性,经9次传代,成功地诱导出对54 mg/kg癸氧喹酯具有完全抵抗力的耐药虫株,为进一步的球虫耐药的分子机理研究提供材料。     

柔嫩艾美耳球虫地克珠利抗药株和马杜拉霉素抗药株的实验室诱导

采用药物浓度逐渐递增的方法 ,以 0 .0 5× 10 - 6 地克珠利和 2 .0× 10 - 6 马杜拉霉素为起始诱导浓度 ,分别经过 18次和 2 0次传代 ,在实验室诱导了柔嫩艾美耳球虫 (Eimeria tenella)对地克珠利和马杜拉霉素的抗药性虫株。经抗药性检测 ,以最适抗球虫指数 (POAA)、病变记分减少率 (RL S)、相对卵囊产量 (ROP)和抗球虫指数 (ACI) 4项指标综合判定及综合抗药性指数 (GI) 2种方法共同判定 ,获得的地克珠利抗药株对 1.2× 10 - 6地克珠利具有完全抵抗力 ,而对马杜拉霉素完全敏感 ;马杜拉霉素抗药株对 7.0× 10 - 6 的马杜拉霉素具有完全抵抗力 ,而对地克珠利完全敏感。     

尼卡巴嗪对鸡柔嫩艾美耳球虫田间株的敏感性试验

以最适抗球虫活性百分率(POAA)、病变记分减少率(RLS)、相对卵囊产量(ROP)和抗球虫指数(ACI)为指标,检测了尼卡巴嗪对秦皇岛株和唐山株柔嫩艾美耳球虫的敏感性.结果表明,唐山株柔嫩艾美耳球虫对尼卡巴嗪无耐药性,秦皇岛株对其呈轻度耐药性.提示尼卡巴嗪在唐山和秦皇岛地区可以继续合理使用,但应控制用量和使用时间,以...     

Eimeria acervulina Infections from Each of the Four Sporocysts of a Single Oocyst

Oocysts were found in all four birds each infected with one of the four sporocysts of a single oocyst of Eimeria acervulina and in three of the four birds infected with single sporocysts from two other oocysts. Possible use of these infections for genetic studies was discussed. An efficient method for collecting fecal material containing sometimes rather low levels of oocysts was also described.     

鸡巨型艾美耳球虫单卵囊分离及雏鸡扩增试验

采用饱和食盐水漂浮法收集就诊病死球虫阳性鸡小肠中段内容物中的球虫卵囊,恒温培养至孢子化后,用2%琼脂薄板进行球虫单卵囊分离,分别感染7只5日龄雏鸡,对据形态学鉴定为巨型艾美耳球虫的分离株进行2代单卵囊分离和雏鸡感染,取其后代以每只1.0×10⁴个卵囊感染10只10日龄雏鸡进行卵囊扩增,获得大量纯种巨型艾美耳球虫卵囊。结果表明,刀片切割琼脂薄板单卵囊分离法操作简便,单卵囊感染成功率较高,准确率达100%,适用于纯种卵囊的分离与扩增。     

柔嫩艾美耳球虫大配子发育和卵囊的超微结构

利用透射电镜对柔嫩艾美耳球虫大配子发育和卵囊的超微结构进行了观察。结果表明，大配子体和小配子体寄生于相邻的宿主细胞内，相伴产生。大配子体的发育、大配子的形成、受精及卵囊形成均于带虫空泡内完成。大配子体系由末代裂殖子侵入肠上皮细胞后，缩短、长大、变圆而形成，大配子体和大配子外被单位膜，细胞核位于大配子体中央，早期大配子体的细胞核有1个明显的核仁，细胞质内逐渐形成大量成囊体1、成囊体2、大量支链淀粉和脂肪体，成囊体1比成囊体2形成的早。卵囊壁有5'层，内有大量支链淀粉和指肪体。含有大配子体、大配子和合子的带虫空泡内有丰富的泡内小管，它们是大配子体、大配子和合子获得营养物质和排出代谢废物的途径。     

鸡柔嫩艾美耳球虫敏感株与马杜拉霉素耐药株EST-SSR信息分析

从NCBI公共数据库获得2806条柔嫩艾美耳球虫敏感株与马杜拉霉素耐药株表达序列标签(EST),通过前处理得到全长为421.186kb的无冗余EST共1519条。在这些序列中搜索出202个简单重复序列(SSR),分布于1519条EST中,出现频率是17.45%。三核苷酸重复和四核苷酸重复是主要的类型,其中三核苷酸占67.92%,四核苷酸占25.28%,占总SSR的近93.20%。AAG/CTT和ACGT/ATGC是三、四核苷酸中的优势重复类型,分别占三、四核苷酸重复的62.72%和56.76%。     

银染mRNA差异显示法克隆柔嫩艾美耳球虫(Eimeria tenella)抗药性相关基因

以柔嫩艾美耳球虫（Eimeria tenella）敏感株、地克珠利抗药株和马杜拉霉素抗药株孢子化卵囊为材料，用银染mRNA差异显示方法筛选和克隆与球虫抗药性相关的基因。首先提取这3个虫株孢子化卵囊的总RNA为模板．用Oligo（dT）12GG为锚定引物和2个10碱基随机引物组合进行RTPCR，产物经变性聚丙烯酰胺凝胶电泳后银染。分别切取5务差异条带，进行2次PCR扩增，产物回收后与PGEM—T—easy Vector连接转化。经PCR鉴定正确后，再进行斑点杂交试验、序列分析和同源性比较。结果发现，地克珠利抗药株和马杜拉霉素抗药株分离的差异片段中都有2个cDNA片段（可能为新的基因片段），这为克隆全长cDNA和探索球虫抗药性产生的分子机理奠定了一定的基础。     

柔嫩艾美球虫（Eimeria tenella）体外细胞培养

试验比较了玻璃珠层析法,ＤＥＡＥ纤维素层析法,Ｇ３漏斗过滤法３种提纯柔嫩艾美球虫（Ｅｉｍｅｒｉａｔｅｎｅｌｌａ）子孢子的方法,柱高８ｃｍ,直径２００μｍ的玻璃株柱用ｐＨ８．０的Ｒｉｎｇｅｒ’ｓ缓冲液作洗脱提纯子孢子,回收率为６４．１％,子孢子洗脱高峰期集中,且易于无菌操作,柱高５ｃｍ的ＤＥＡＥ纤维素柱用ｐＨ８．０的甘氨酸缓冲液作洗脱液,提纯子孢子回收率为６３．２％,但严格无菌操作困难,Ｇ３漏斗法易     

四种兔艾美耳球虫卵囊产量的比较

分别用4种兔艾美耳球虫经口接种45日龄无球虫感染兔,接种剂量为1×104个卵囊/兔。感染后4d～20d,以麦克马斯特氏法计数每天排出的卵囊。结果表明,肠艾美耳球虫排卵量最多,为365.76×106个,中型艾美耳球虫为317.26×106个、黄艾美耳球虫为304.36×106个,大型艾美耳球虫排卵量最少,为200.12×106个。大型艾美耳球虫在感染后第6.5天有卵囊排出,第10.5天达到高峰(66.50×106个/只),占总量的33.23%;肠艾美耳球虫在感染后第9天有卵囊排出,第13天达到高峰(138.40×106个/只),占总量的37.83%;黄艾美耳球虫在感染后第9天有卵囊排出,第11天达到高峰(102.80×106个/只),占总量的33.78%;中型艾美耳球虫在感染后第4.5天有卵囊排出,第6.5天达到高峰(167.8×106个/只),占总量的52.89%。     

Identification of Cross-Resistance and Multiple Resistance in Eimeria tenella Field Isolates to Commonly Used Anticoccidials in Pakistan

A battery trial was conducted to evaluate the drug sensitivity in Eimeria tenella field isolates against the commonly used anticoccidials salinomycin (60 ppm), maduramicin (5 ppm), and clopidol (125 ppm) in broiler chicks. These anticoccidials were mixed in feed at d 12 of age, and inoculation was given on d 14 of age. Drug sensitivity was determined by using the global index, which is composed of percentage weight gain, FCR, lesion score, oocyst index, and mortality percentage. In the present study, all the E. tenella isolates showed partial resistance against salinomycin, whereas varying degrees of sensitivity were observed against maduramicin and clopidol.     

鸡球虫耐药性检测研究进展

鸡球虫病是由艾美耳球虫寄生于鸡肠道上皮细胞内所引起的以腹泻、血便、生长迟缓、饲料转化率降低、死亡为特征的寄生虫性疾病.集约化鸡场的各种鸡病中球虫的发病率最高,该病死亡率20%～30%,严重时高达80%,病愈的雏鸡生长受阻,长期不能恢复,给养鸡业造成巨大的经济损失.     

鸡球虫单卵囊分离技术与雏鸡感染试验

把收集到的新鲜带血鸡粪用饱和食盐水漂浮法收集鸡球虫卵囊,在装有25 g/L重铬酸钾溶液的平皿中保存,置于29℃的恒温箱中2 d~3 d,得到混合种孢子化卵囊。生理盐水稀释卵囊液至每滴1个~2个卵囊,在载玻片上用自制的毛细吸管在显微镜下吸取1个卵囊于备好的40 g/L琼脂糖薄片上,确保只有1个卵囊,用手术刀切割琼脂糖薄片并包埋卵囊,即完成单卵囊分离。将包埋好的单卵囊感染雏鸡,感染率为60%~90%。     

Dual infections of Eimeria tenella and Escherichia coli in chickens

The interactive effects of Eimeria tenella and Escherichia coli infection in chickens were investigated. Specific pathogen free chickens inoculated orally with E tenella and challenged four days later with E coli via the air sac showed more severe acute septicaemic lesions and subacute serositis than chickens given E coli alone. Moreover, caecal lesions induced by E tenella were more severe in chickens given both E tenella and E coli than in those given E tenella alone. In contrast, oral inoculation of E coli did not result in acute septicaemic lesions or subacute serositis and had no effect on the severity of the caecal lesions caused by E tenella.     

柔嫩艾美耳球虫rhomboid抗原基因在卡介苗中的克隆与表达

以含柔嫩艾美耳球虫rhomboid基因的重组质粒为模板,应用PCR方法扩增该基因完整开放阅读框,克隆至pMD18-T载体中.分别用限制性内切酶Pst I/Cla I和Pvu II/Cla I进行双酶切,将rhomboid目的基因克隆到大肠杆菌-分支杆菌穿梭表达载体pMV261和整合表达载体pMV361中,获得重组质粒pRho-261和pRho-361.将重组质粒电穿孔转化卡介苗,经热诱导后对其表达产物进行SDS-PAGE和western blot分析.结果表明成功构建了两个重组质粒,其表达产物与柔嫩艾美耳球虫阳性血清具有免疫反应性,为重组卡介苗在鸡球虫病防治方面的研究奠定了基础.     

柔嫩艾美耳球虫低温保存方法的研究

在对球虫的研究、疫苗生产和球虫病的诊断中离不开球虫的保存和保种,目前常规的保存方法是将球虫的孢子化卵囊保存在2.5%重铬酸钾中,置于4℃,一般保存期不超过1年.1年内必须进行鸡体传代,以保持球虫活力,这不仅浪费大量的人力和物力,而且增加了虫种被污染的机会.