枣离体叶片高效再生植株的研究

 以‘黄骅冬枣’组培苗叶片为试材, 研究了叶片幼嫩程度、叶片来源、组培苗状态以及植物生长调节剂等对离体叶片诱导不定芽再生的影响, 并获得了完整的再生植株。结果表明, 以未生根组培苗中上部叶片再生效果较好; TDZ诱导叶片再生不定芽的效果显著优于BA; 离体叶片在MS + TDZ 1.0 mg·L ^{- 1} + IBA 0.1 mg·L ^{- 1}培养基中诱导培养28 d后, 转入MS + IBA 0.1 mg·L ^{- 1} + GA₃ 0.05 mg·L ^{- 1}培养基中二次培养, 叶片再生效果最好, 再生率可达92.45%。将叶片再生植株转入MS +BA 1.0 mg·L ^{- 1} + KT0.5 mg·L ^{- 1} + IBA 0.1 mg·L ^{- 1}培养基中继代增殖培养, 增殖系数达3.64。以1 /2MS + IAA 1.0 mg·L ^{- 1}培养基诱导生根, 生根率87.1%。生根苗大田移栽成活率达到57%。     

墨兰与大花蕙兰种间杂种原球茎的诱导及增殖研究

 利用墨兰与大花蕙兰进行种间杂交, 成功获得了5 个组合的杂种原球茎和植株。墨兰×大花蕙兰及大花蕙兰×墨兰, 均以原球茎方式萌发。以墨兰×大花蕙兰的杂种原球茎为材料, 通过L₉ (3⁴ ) 正交设计研究了NH₄NO₃ 、KH₂ PO₄ 、6-BA 和NAA 等因素对杂种原球茎增殖的影响, 发现NAA 对原球茎的增殖影响不大, NH₄NO₃ 1650 mg·L^-1 (MS 正常浓度水平) , 提高KH₂PO₄ 浓度(170～850 mg·L^-1 ) 和6-BA 浓度(1～10 mg·L ^-1) 有利于原球茎的增殖。9 个培养基中以MS + NH₄NO₃ 1650 mg·L ^-1 + KH₂PO₄340 mg·L ^-1 + 6BA 10 mg·L ^-1效果最好。     

百合鳞茎苯丙氨酸解氨酶的分离纯化及酶学性质研究

经40 %～75 %硫酸铵分级沉淀和DEAE-Sepharose离子交换层析,从兰州百合（Lilium davidii var. unicolor）鳞茎中分离纯化苯丙氨酸解氨酶（PAL）,纯化倍数为13.19,酶回收率4.68%。纯化的PAL经 SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS-PAGE）检测为单一蛋白带,其亚基分子量约58.7 kD。酶学性质研究表明：百合鳞茎的PAL不耐碱,更不耐酸;随着水浴时间延长和水浴温度提高,PAL活性逐渐降低,但40 ℃水浴30 min后酶活性仍保留47%;以L-苯丙氨酸为底物,40 ℃下的Km值为4.1×10^-3 mol·L^-1;金属离子Mn²⁺、Fe²⁺、Cu²⁺、Fe³⁺促进PAL活性,1.0、1.0、2.0和1.0 mmol·L^-1分别为在供试范围内的最佳处理浓度,Ag⁺、Co²⁺、Ca²⁺抑制其活性,其中Ag+的抑制作用最强。     

云南野生早花象牙参叶片再生体系的建立

 以云南野生的早花象牙参叶片为外植体, 探讨了叶片的不同部位、植物生长调节剂组合、暗培养、水解酪蛋白和椰子汁对愈伤组织诱导和不定芽再生的影响。结果表明: 叶片基部, 暗培养, 水解酪蛋白和椰子汁均有利于愈伤组织的诱导; 暗培养促进了不定芽的再生。适宜早花象牙参叶片愈伤组织形成的诱导培养基为MS + 6-BA 1.5 mg·L ^{- 1} +NAA 0.1 mg·L ^{- 1} +水解酪蛋白800 mg·L ^{- 1} +椰子汁50 mL ·L ^{- 1} , 再生培养基为MS + 6-BA 1.5 mg·L ^{- 1} +NAA 0.1 mg·L ^{- 1} , 增殖培养基为MS + 6-BA 0.6 mg·L ^{- 1} + NAA 0.1 mg·L ^{- 1} , 生根培养基为1/2MS +NAA 0.8 mg·L ^{- 1}。     

外源钙对苹果果实乙烯生成的影响

 外源Ca2 + 浓度低于350 mmol ·L^-1时, 可促进‘红富士’苹果果实乙烯释放, 在400 ～1 000 mmol·L^-1之间时, 乙烯的释放速率仅为对照的29. 8 %～41 %。分别用高浓度(500 mmol·L^-1) 与低浓度(80 mmol·L^-1) CaCl₂处理果实12 h, 随处理时间延长, 低浓度钙促进乙烯释放量持续增加, 12 h 时乙烯释放量是2 h 时的2. 9 倍, 而高浓度钙抑制乙烯生成的效应比较稳定, 保持在12. 6～14. 4 nL·g^-1。低浓度的Mg²⁺、Mn²⁺也有刺激乙烯生成的作用。Ca²⁺的胞内流动抑制剂La³⁺及CaM的抑制剂TFP (三氟啦嗪) 在80 mmol·L^-1的CaCl₂存在时, 明显抑制乙烯释放。     

不同浓度NO3- 胁迫下黄瓜幼苗根系分生区细胞内Ca2+分布变化的差异

 以‘新泰密刺’黄瓜为试材, 采用焦锑酸钙沉淀的电镜细胞化学方法, 研究不同浓度NO₃^- 胁迫下黄瓜幼苗根系分生区细胞内Ca²⁺的分布变化, 以期为探讨不同浓度NO₃^- 胁迫下细胞Ca²⁺行为特征与黄瓜对NO₃^- 适应性之间的关系。结果表明, 对照生长条件下(14 mmol·L^-1 NO₃^- ) , 黄瓜根系分生区细胞内Ca²⁺主要出现在细胞膜和小液泡内, 线粒体、细胞质和细胞核及核仁内也有少量的较小颗粒钙沉淀。而其它浓度NO₃^- 胁迫下, 其根系分生区细胞Ca²⁺定位分布变化明显。在56和140 mmol·L ^-1NO₃^- 浓度下, Ca²⁺有向细胞基质分布的趋势, 其细胞间隙、细胞质和线粒体中亦出现大量钙沉淀颗粒。且不同处理浓度下, 线粒体和小液泡数量及结构变化较大。而当NO₃^- 浓度达182 mmol·L ^-1时, 根系分生区各细胞器内钙沉淀颗粒明显减少, 此时Ca²⁺的变化是各细胞器及膜系统遭严重破坏的结果。综上可知, 黄瓜幼苗可通过根系分生区液泡内Ca²⁺向细胞基质分布变化, 来增加对高浓度NO₃^- 胁迫的抗性。     

小菊悬浮细胞培养与植株再生研究

 以小菊‘七月红’品种为试材, 进行了细胞悬浮培养及植株再生诱导的探讨。结果表明, MS+ 1.0 mg·L ^-1 2, 4-D + 0.2 mg·L ^-1 6-BA培养基适合从试管苗茎段有效诱导生长迅速、质地疏松的愈伤组织。获得的愈伤组织在MS + 0.5 mg·L ^{- 1} 2, 4-D + 0.2 mg·L ^{- 1} 6-BA液体培养基中振荡培养, 建立细胞悬浮培养体系。悬浮细胞的生长曲线呈上升的半抛物线型, 细胞生长大致分缓慢生长期(0～2 d) 、对数生长期(2～10 d) 和停滞期(10 d以后) ; 随着悬浮细胞生长, 培养液pH值迅速下降。悬浮细胞固液双层培养表明, 在培养基MS + 0.2 mg·L ^{- 1} KT + 0.2 mg·L ^{- 1} 2, 4-D上植板率最高; 4℃低温2 h处理能促进悬浮细胞生长, 提高植板率; 随着继代次数增加植板率呈下降趋势。培养1个月后, 形成了直径约0.2 cm的愈伤组织, 将其转到MS + 2 mg·L ^-1 6-BA + 0.1 mg·L ^{- 1} NAA培养基后, 继代4次, 分化后出芽; 分化芽在培养基MS + 0.5 mg·L ^-1 NAA上诱导生根, 形成小植株。     

植物生长调节剂对线艺春兰根状茎的增殖与分化的影响

 以线艺春兰‘绿云’的类原球茎为材料, 研究了植物生长调节剂等因素对根状茎的增殖与分化的影响。结果表明: 长期继代培养及保存宜选用1 /2MS固体培养基。细胞分裂素6-BA浓度为1.0 mg·L ^{- 1}时根状茎的增殖效果最佳。0～3.0 mg·L ^{- 1}范围内IBA促进根状茎的生长较NAA效果好。1/2MS + 6-BA 1.0 mg·L ^{- 1} + IBA 1.0 mg·L ^{- 1}培养基最利于根状茎的分化, 芽分化率达到36.9%。培养基添加芋艿糊可显著促进根状茎的增殖与生长。根状茎分割以掰开方式且接种团块带有3～5条根状茎较适宜。线艺春兰叶片上的腹轮艺通过组培可以稳定遗传。     

Cu2+、Zn2+和Mn2+对低温胁迫下黄瓜幼苗叶片叶绿素荧光参数的影响

以黄瓜为对象,研究了低温胁迫下不同Cu²⁺、Zn²⁺和Mn²⁺浓度对其幼苗叶片叶绿素荧光参数的影响。结果表明：低温胁迫下,提高营养液Cu²⁺、Zn²⁺和Mn²⁺浓度能使黄瓜幼苗叶片Fv/Fm、ΦPSⅡ等叶绿素荧光参数明显增强,表明Cu²⁺、Zn²⁺和Mn²⁺浓度的提高能显著增强黄瓜叶片光合机构抗低温损伤的能力。     

酿酒葡萄‘神索’体胚发生及再生体系遗传稳定性分析

 以酿酒葡萄‘神索’未成熟合子胚为外植体, 通过植物生长调节剂、光照、温度等因素的控制, 研究了葡萄体胚的产生、保存及植株再生。结果表明, 以NN为基本培养基, 诱导胚性愈伤组织的适宜植物生长调节剂水平是1.0 mg·L ^{- 1} 2,4-D; 诱导体胚的生长调节剂水平是1.0 mg·L ^-1 NAA + 0.5 mg·L ^{- 1} BA, 体胚诱导率为37.5%; 5℃微光条件, 适宜体胚的保存; 体胚成熟及植株再生的植物生长调节剂水平是0.05 mg·L ^{- 1} NAA + 0.5 mg·L ^{- 1} BA, 成苗率为42.1%。利用流式细胞仪并结合染色体计数对体胚及再生植株细胞核DNA含量及染色体鉴定表明, 体胚细胞染色体存在一定的变异, 而体胚再生植株倍性稳定, 细胞核DNA含量及染色体数与供体母株一致。     

霍山石斛类原球茎诱导及其发育过程研究

 以霍山石斛试管苗带节茎段为材料, 诱导产生类原球茎, 并研究类原球茎发育过程。结果表 明, 霍山石斛类原球茎诱导的适宜培养基为Knudson + 2, 4-D 0.1 mg·L ^{- 1} + KT 0.05 mg·L ^{- 1} , 诱导率为25.50%。以固体静置、固液双层静置、液体静置、液体振荡4种不同培养方式进行增殖培养, 其中液体振荡培养方式更适于类原球茎快速增殖。类原球茎通过胚状体发生途径形成, 类似于合子胚的发育, 即经历原胚、心形胚、鱼雷形胚和子叶胚, 最后发育为成熟胚。类原球茎发育进程大致可分为类原球茎形成期、类原球茎肥大期、茎叶分化期、茎叶形成期以及茎叶伸长期等阶段。     

GA3 和 Ca2+ 对安祖花佛焰苞花青苷含量及花梗 PAL 活性的影响

 以安祖花(Anthurium andraeanum Lind．)为试材，探讨了环境条件对佛焰苞花青苷含量的影响及弱光下Ca²⁺ 、GA₃，处理改善花朵品质的效应。研究结果表明，光照不足是导致花青苷含量下降的主要原因，5.4 mmol·L^-1 的CaCl₂、1.16 mmol·L^-1 的GA₃，单独及复合处理均能有效地提高弱光下安祖花佛焰苞花青苷含量与花梗苯丙氨酸解氨酶(PAL)活性。通过钙调蛋白、RNA及蛋白质等的不同抑制剂处理，发现抑制剂均可抑制安祖花离体花梗CaM含量与PAL活性，讨论了Ca²⁺ 、GA₃的可能作用机理。     

梨组织中苹果褪绿叶斑病毒的原位RT-PCR检测

 为了建立梨树苹果褪绿叶斑病毒原位RT-PCR检测技术, 用已知带有苹果褪绿叶斑病毒的库尔勒香梨和无病毒实生苗叶片为材料, 利用D IG标记, 研究了香梨病毒的叶片石蜡切片IS-RT-PCR检测技术。包括AMV逆转录酶、dNTPs、RNasin及互补引物浓度对cDNA合成的影响, 退火温度、Taq DNA聚合酶、Mg²⁺ 、引物浓度及循环次数对原位PCR效果的影响。结果表明: RNasin的用量大于0.2 U·μL^-1时,信号强度随着RNasin量的加大而增强; 只有当dNTPs浓度达1.0 mmol·L^-1时才能生成一定量的cDNA;AMV浓度在0.3～0.5 U·μL^-1均可进行正常的逆转录, 而且在该范围内产物的量随AMV浓度提高而增多; 引物浓度达到0.9μmol·L^-1以上时才能进行有效的逆转录, 并且生成的cDNA的量随引物浓度增大而增加。原位扩增ACLSV的cDNA适合退火温度为56℃。循环20～30次可出现较强的蓝色信号, 引物浓度在0.8～1.2μmol·L^-1时显色较好; Taq酶浓度为20 U·mL^-1以上, 均显示较深的蓝色; Mg^{2 +}浓度为1.5mmol·L^-1就可满足原位PCR所需。获得了苹果褪绿叶斑病毒的原位PCR优化检测体系, 利用建立的优化程序对香梨样品进行了检测验证, 取得了很好效果。     

苹果砧木根系钙素吸收动力学研究

 以苹果砧木——平邑甜茶(Malus hupenensis Rehder)实生苗和3年生盆栽富士苹果／平邑甜茶幼树为试材，研究了根系Ca²⁺ 吸收动力学以及代谢抑制剂和温度对Ca²⁺ 吸收的影响。结果表明，在供钙浓度0.02～0.5 mmol/L范围内，苹果砧木根系钙离子吸收速率与钙浓度的关系符合米氏酶动力学模型，而在供钙浓度0.5～5.0mmol/L范围内，钙吸收速率随供钙浓度的增加呈直线上升，并且连体根钙吸收速率的上升速度明显高于离体根。不论离体根还是连体根，钙吸收速率均受到代谢抑制剂2，4-二硝基酚的抑制，低供钙浓度(0.2 mmol/L)下受抑制的程度更高。低供钙浓度下，温度对平邑甜茶根系钙素吸收有明显影响，其中15～20℃时α值和钙吸收速率最高。以根系表面积为单位计算的吸收根和延长根的钙吸收能力相近，而木质根α值为吸收根和延长根的54%左右。     

杂交兰‘韩国桃花’×蕙兰种间杂交种子无菌萌发特征研究

 以大花蕙兰和墨兰杂交育成的品种‘韩国桃花’为母本, 再与蕙兰进行种间远缘杂交, 取其不同成熟度的种子进行无菌播种, 研究了杂交种子萌发、原球茎和根状茎的增殖与分化特征。结果表明: 授粉后240 d的种胚具有较好的萌发能力, 在所试的4种培养基中, 以1/2MS添加6-BA 0.5 mg·L^-1和NAA 2.0 mg·L^-1的处理萌发效果较好; 萌发的种子可以通过原球茎和根状茎两条途径增殖; 1/2MS培养基添加6-BA 0.5 mg·L^-1和NAA 2.0 mg·L^-1适于原球茎增殖, 培养30 d后增殖系数可达4.25; 而NAA 0.5、1.0 mg·L^-1适宜原球茎的发育和植株再生; 根状茎的增殖以NAA:6-BA = 2:1较适宜, 培养40 d后增殖系数可达6. 0以上; 当NAA浓度为1.0 mg·L^-1时, 根状茎发育及植株再生效果佳, 培养70 d后超过80%的根状茎茎端分化成苗。杂交后代通过原球茎和根状茎均可获得再生植株, 且形态无明显差别。     

芹菜与CMS胡萝卜原生质体非对称性融合的初步研究

 以芹菜和胡萝卜瓣化型细胞质不育系为试材, 研究了碘乙酰胺( IOA) 和紫外线对两种原生质体的钝化作用, 以及融合温度、聚乙二醇6000 ( PEG6000) 和Ca2 +浓度对融合效果的影响, 并对融合再生植株进行了鉴定。结果表明, 6 mmol·L - 1 IOA处理7 min以上可钝化芹菜原生质体细胞质, 强度约为20 μmol·m^{- 2} ·s^{- 1}的紫外线持续辐射9 min可使胡萝卜原生质体活力趋于0; 适当低温(5 ℃) 可提高聚合率约20%; PEG6000浓度为40% , 高pH液中Ca^{2 +}浓度为0.1 mmol·L ^{- 1}时最适宜两种原生质体融合; 融合产物液体浅层培养40 d后产生的可见细胞团在不添加植物生长调节剂的MS₀培养基上再生出了完整植株。用AFLP分子标记对12株再生株总DNA的鉴定结果表明, 再生株多不同程度地发生了芹菜和胡萝卜基因的非对称性融合。用STS分子标记鉴定再生株的细胞质基因, 瓣化型雄性不育特异引物STS4的扩增结果显示, 除1号单株外其余11株均成功转入了胡萝卜瓣化型雄性不育基因。     

多花蔷薇胚性细胞悬浮系原生质体分离及再生植株

利用多花蔷薇‘无刺3号’假珠芽诱导的胚性愈伤细胞悬浮系分离得到原生质体,并培养获得再生植株。酶种类和浓度, 酶解时间及悬浮细胞继代时间对原生质体分离有重要影响,最佳酶液组成是2.0%纤维素酶,0.5%离析酶,5.0 mmol·L^-1 MES, 0.5 mol·L^-1甘露醇,0.5% CaCl₂·2H₂O。采用继代3 d的悬浮细胞系,酶解10 h,原生质体产量达到26.67×10⁶g^-1,原生质体活力为92.21%。采用液体浅层培养,肌醇比蔗糖更有利于纯化后的原生质体分裂和生长。愈伤组织形成增殖培养基为1/2MS + 2,4-D 1.0 mg·L^-1+ EBR 0.2 mg·L^-1 + 10 g·L^-1 Ficoll + 500 mg·L^-1谷氨酰胺 + 20 mg·L^-1甘氨酸 + 20 mg·L^-1天冬氨酸,分化培养基为1/2MS + 10 mg·L^-1 TDZ + 500 mg·L^-1谷氨酰胺+ 20 mg·L^-1甘氨酸+ 20 mg·L^-1天冬氨酸,后转入1/2MS培养基上获得完整植株。