黑核桃体细胞胚状体发生及其基因转化系统的建立

以我国种植的优良品种黑核桃 (JuglansnigiaL .)幼胚和幼叶为外植体诱导出体细胞胚状体 ,通过根癌农杆菌介导将nptⅡ和gus基因导入体细胞胚 ,同时研究了激素、体细胞胚的发育时期及预培养等对转化率的影响 ,建立了黑核桃体细胞胚基因转化系统 ,还分析了体细胞胚胎转化系统的特点和潜力。     

通过农杆菌介导法将哈兹木霉几丁质酶ThEn-42基因导入核桃

 通过根癌农杆菌C₅₈C₁ ATHV Rif^R介导法, 利用烟草花叶病毒35 S 双启动子和苜蓿花叶病毒引导序列控制下的含抗新霉素磷酸转移酶基因(npt Ⅱ) 和哈兹木霉几丁质酶基因(ThEn-42) 的质粒pBin19ESR 为载体, 对3 个核桃体细胞胚系进行遗传转化, 结果获得41 个抗卡那霉素的体细胞胚系。经PCR 和复式PCR 检测, 41个转化系均含有nptⅡ基因, 其中38个转化系含有ThEn-42 基因。Southern 杂交分析表明, ThEn-42基因已被整合到核桃体的基因组中。几丁质酶活性检测结果表明, 转化的体细胞胚系的几丁质酶活性比对照高几十至几千倍。遗传转化的体细胞胚系已萌发成苗。     

三倍体柑桔幼胚离体培养研究

三倍体柑桔幼胚离体培养研究伊华林１邓秀新２史永忠２郭文武２（１华中农业大学园艺系；２华中农业大学作物遗传改良国家重点实验室，武汉４３００７０）关键词柑桔；三倍体；体细胞杂种；胚抢救；有性杂交ＳｔｕｄｉｅｓｏｎＣｕｌｔｕｒｅｏｆＩｍｍａｔｕｒｅＴｒｉ...     

德国核桃‘No.120'幼胚胚轴与子叶体细胞胚胎发生及其植株再生

核桃 (Juglansregia)‘No . 12 0’品系授粉 7～ 8周的幼胚胚轴与子叶在含不同植物生长调节剂组合的诱导培养基上培养 4周后转移至无植物生长调节剂的继代培养基上培养 ,不同发育时期的体细胞胚直接形成于胚轴与子叶表面。子叶与胚轴分别在KT 2mg/L BA1mg/L IBA 0 .0 1mg/L与 2 ,4 D 2mg/L KT 1mg/L的组合的诱导下体细胞胚胎发生频率最高。体细胞胚经 3～ 5℃低温处理 2个月 ,31.6%的体细胞胚能发育成正常生长的植株     

含ipt基因生长素调控基因根癌农杆菌转化牵牛萌动种胚同工酶分析

以牵牛萌动种胚为受体,用含有３５Ｓ启动子－Ｇｕｓ基因－ｉｐｔ基因－Ｎｏｓ基因的根癌农杆菌ＬＢＡ４４０４３及含有３５Ｓ启动子－Ｇｕｓ基因－生长素调控基因－Ｎｏｓ基因的根癌农杆菌ＬＢＡ４４０４进行转化。通过对转化及对照植株苗期叶的同工酶分析,发现转化植株叶的过氧化物酶同工酶及酯酶同工酶谱带来对照植株有明显差异。转化频率较高。间接验证了外源ＤＮＡ的导入,说明同工酶分析方法可做为转基因植株早期筛选的方法之     

唐菖蒲体细胞胚发生和植株再生

唐菖蒲体细胞胚发生和植株再生师素恩（译）一、概述在ＭＳ培养基上获得了４个品种的唐菖蒲的松脆胚性愈伤组织和体细胞胚。培养基附加不同浓度的生长素，外植体如下：球茎切片、幼叶基部和整叶，完整的小植株。体细胞胚转移到无激素的ＭＳ培养基上后再形成小植株。所有体...     

百合分子育种研究进展

从百合基因克隆（包括减数分裂基因、花发育基因、花色基因、花粉发育基因以及抗性相关基因）,再生体系建立（包括不定芽再生系统、原生质体再生系统、体细胞胚再生系统、愈伤组织再生系统）,外源基因转化方法（包括农杆菌介导的遗传转化、DNA直接导入系统的基因转化、花粉管通道法）及转基因应用等方面,介绍近年来国内外百合分子育种的研究进展,并讨论了百合分子育种研究中存在的问题和应用前景。     

番木瓜体胚间接发生方式的研究

 为了建立小果型番木瓜(Carica papaya L.)高效外源基因遗传转化体系，以小果型番木瓜'美中红'的幼胚(授粉受精后90~120 d)为材料,通过组织切片和电镜观察了体胚发生方式。结果表明，培养8~12 d，愈伤组织首先发生于幼胚的胚根端；培养26 d，整个幼胚的胚轴愈伤化，愈伤组织分为粘性透明和干性两大类，组织切片分为明显的两层，外层疏松易脱落，内层结构紧密；培养38 d，淡黄色的体胚前体发生于幼胚的胚芽端。番木瓜体胚的形态各异，大多数是形态正常的体胚，少数体胚的形态发生变异。     

AtWUS过表达诱导分蘖洋葱体细胞胚高频发生

以分蘖洋葱茎尖外植体诱导的愈伤组织为试材,采用农杆菌介导法,将外源基因AtWUS导入分蘖洋葱愈伤组织中,研究AtWUS对分蘖洋葱愈伤组织诱导体细胞胚发生的影响,以期建立分蘖洋葱体细胞胚高频发生体系。结果表明：过表达AtWUS可以显著促进分蘖洋葱愈伤组织的体细胞胚发生率(大约6倍),91%的双极性体细胞胚具有发育形成完整植株能力。RT-PCR分析结果表明,AtWUS在体细胞胚和转基因植株中高丰度表达。     

培养三倍体柑桔植株的研究

以柑桔异源四倍体体细胞杂种（哈姆林甜橙（ＣｉｔｒｕｓｓｉｎｅｎｓｉｓＯｓｂｅｃｋｃｖ．Ｈａｍｌｉｎｓｗｅｅｔｏｒａｎｇｅ）＋粗柠檬（Ｃ．ｊａｍｂｈｉｒｉＬｕｓｈｃｖ．Ｒｏｕｇｈｌｅｍｏｎ）为父本与单胚的二倍体柑桔类型（宜昌橙（Ｃ．ｉｃｈａｎｇｅｎｓｉｓＳｗｉｎｇｌｅ）与华农本地早（Ｃ．ｒｅｔｉｃｕｌａｔａＢｌａｎｃｏｃｖ．Ｈｕａｎｏｎｇｂｅｎｄｉａｚｏ）的杂交后代）杂交。通过幼胚早期离体培养,获得     

防“核桃黑”要抓关键期

核桃黑是核桃举肢蛾幼虫蛀入核桃果内以后，随着幼虫的生长，纵横串食危害造成的。被害的果皮变黑，凹陷，核桃仁发育不良，表面干缩变黑，俗称“核桃黑”。一般情况下，山地核桃阴坡的较阳坡的被害重，荒坡的较耕地的被害重，四面环山的山间洼地发生较重。其防治措施如下：     

柑橘体细胞胚发生基因CsHB1特异肽段多克隆抗体的制备及其蛋白动态检测

【目的】构建柑橘HD-ZIP II转录因子CsHB1基因的原核表达系统,制备多克隆抗体,并检测抗体在‘伏令夏橙’胚性愈伤体胚诱导阶段中的特异性,为研究CsHB1基因在柑橘体细胞胚发生过程中的功能奠定基础。【方法】构建柑橘HD-ZIP II转录因子CsHB1基因的原核表达载体p GEX4T-CsHB1-N,转化大肠杆菌诱导目的融合蛋白的表达,并制备获得多克隆抗体anti-CsHB1-N。通过Western blot检测抗体在原核表达系统和柑橘体细胞胚诱导阶段的特异性,并分析体细胞胚诱导阶段CsHB1蛋白水平表达的动态变化。【结果】重组原核表达载体p GEX4T-CsHB1-N在Escherichia coli中高效表达出了分子质量约为49 ku的GST-CsHB1-N融合蛋白,并纯化获得多克隆抗体anti-CsHB1-N;经过Western blot分析表明,多克隆抗体可与‘伏令夏橙’愈伤体胚诱导阶段表达的目的蛋白特异结合;蛋白表达结果分析表明,在胚性愈伤组织中CsHB1蛋白呈现高的表达量,随着诱导培养的进行,呈现了先下降后上升的波动变化。【结论】多克隆抗体特异性好,可与‘伏令夏橙’胚性愈伤组织中目的蛋白特异性结合,可用于CsHB1基因功能分析。     

柑橘体细胞胚发生基因CsHB1特异肽段多克隆抗体的制备及其蛋白动态检测北大核心CSCD

【目的】构建柑橘HD-ZIP II转录因子CsHB1基因的原核表达系统,制备多克隆抗体,并检测抗体在‘伏令夏橙’胚性愈伤体胚诱导阶段中的特异性,为研究CsHB1基因在柑橘体细胞胚发生过程中的功能奠定基础。【方法】构建柑橘HD-ZIP II转录因子CsHB1基因的原核表达载体p GEX4T-CsHB1-N,转化大肠杆菌诱导目的融合蛋白的表达,并制备获得多克隆抗体anti-CsHB1-N。通过Western blot检测抗体在原核表达系统和柑橘体细胞胚诱导阶段的特异性,并分析体细胞胚诱导阶段CsHB1蛋白水平表达的动态变化。【结果】重组原核表达载体p GEX4T-CsHB1-N在Escherichia coli中高效表达出了分子质量约为49 ku的GST-CsHB1-N融合蛋白,并纯化获得多克隆抗体anti-CsHB1-N;经过Western blot分析表明,多克隆抗体可与‘伏令夏橙’愈伤体胚诱导阶段表达的目的蛋白特异结合;蛋白表达结果分析表明,在胚性愈伤组织中CsHB1蛋白呈现高的表达量,随着诱导培养的进行,呈现了先下降后上升的波动变化。【结论】多克隆抗体特异性好,可与‘伏令夏橙’胚性愈伤组织中目的蛋白特异性结合,可用于CsHB1基因功能分析。     

核桃举肢蛾的发生与防治

核桃举肢蛾以幼虫蛀食核桃果实的种仁。幼虫在核桃青皮里纵横蛀食．使青皮变黑或皱缩，果仁发育不良，被害果实变黑．故称核桃黑。被害果常提早脱落，有的幼虫早期钻进果壳内蛀食种仁。使核桃仁枯干。有的蛀食果柄，破坏维管束组织．造成早期落果，严重影响核桃的产量和品质。     

葡萄基因转导研究进展

简述了转基因技术与常规育种手段的关系,从基因转导途径和影响因素两方面综述了葡萄近年来基因转导的研究进展。葡萄基因转导途径主要有农杆菌介导法和基因枪法,并通过前者以砧木110R的体胚为材料获得了转基因植株;用后者轰击无核白试管叶片的体胚,提高了转化率。影响转导的因素主要从受体与再生系统、转化细胞的筛选与检测、培养方法与培养条件等方面进行论述,最后对葡萄基因工程进展及展望进行了讨论,探索出一条高效的再生途径仍然是目前主要的任务。     

核桃主要害虫综合防治技术

1核桃举肢蛾俗称核桃黑,幼虫蛀入果实青皮内纵横串食危害,使果仁枯干、果皮发黑、凹陷,故又称核桃黑。受其危害,常造成核桃落果,是降低核桃产量和品质的主要害虫。幼虫在果内危害时间为30~45d,危害期为6~7     

桃幼胚离体培养再生植株的研究

 以中晚熟桃品种‘京艳’、‘绿化9 号’、‘ 晚蜜’和‘大久保’为试材, 初步建立了桃体细胞胚发生和增殖的三阶段程序, 即胚性愈伤组织诱导、体细胞胚发生和发育、体胚萌发成株以及次级体细胞胚的增殖。各品种体细胞胚的萌发成株率分别为73. 5 %、38. 6 %、5. 4 %和58. 2 %。用苯脲类细胞分裂素TDZ有效诱导‘京艳’的幼胚子叶直接再生植株, 再生率70 % , 平均每外植体不定芽数13. 8 个, 再生不定芽生根后获得完整植株。     

番木瓜胚性细胞悬浮系高效遗传转化体系的建立

【目的】建立番木瓜高效遗传转化体系，为番木瓜基因功能研究和重要农艺性状改良提供新的技术支撑。【方法】以紫晖番木瓜胚性细胞悬浮系（embryogenic cell suspensions,ECS）为遗传转化受体，利用植物表达载体pCAMBIA1301和农杆菌介导法进行遗传转化，对抗生素浓度筛选、侵染时间、继代培养、抗性胚的诱导与萌发以及植株再生整个过程进行探索，最后获得抗性再生植株。【结果】通过设置不同浓度的头孢霉素和潮霉素处理，观察ECS细胞状态，筛选、确定头孢霉素和潮霉素最适处理质量浓度分别为200 mg·L-1和5 mg·L-1。工程菌和ECS共培养侵染2 d后转到含有头孢霉素和潮霉素的液体筛选培养基上进行继代培养，继代周期为14 d。经GUS染色验证，表明继代3次后的ECS几乎全部为转化细胞。将以上ECS转移到液体胚诱导培养基中进行培养，2个月后可获得大量球形体细胞胚，且GUS组织染色为蓝色。将球形体细胞胚转到半固体成熟培养基上培养，2个月后可获得成熟子叶期体细胞胚。子叶期体细胞胚在萌发培养基上光培养30 d后，可获得再生芽。任意选取再生芽进行GUS染色，均可染成蓝色。抗性再生芽...     

生长素结合蛋白基因克隆及在柑桔中的表达效应研究

目的：利用转基因技术将外源生长素结合蛋白基因转入柑桔幼胚，获得抗性植株，以提高柑桔对生长素的敏感性。方法：cDNA合成，PCR反应，基因重组，序列分析，遗传转化及抗性植株的诱导与筛选。结果；获得该基因的编码序列，构建出中间表达载体和植物表达载体，筛选出对生长素极敏感的抗性植株。     

利用沙冬青抗寒基因AmEBP1 转化杏的研究

 利用花粉管导入法,将沙冬青抗寒基因AmEBP1 转化到‘大果’杏幼胚中,在改良WPM 培 养基上经卡那霉素筛选,PCR、Southern 检测,结果得到5 个转基因阳性株系;组培苗抗寒试验结果表明, 相同低温（–4 和–8 ℃）条件下,转基因植株均比对照表现出较高的成活率;随着处理温度的降低,转 基因株系REC 与MDA 含量始终低于对照植株;转基因植株的低温半致死温度（LT50）比未转基因对照 低2.13 ℃。试验结果表明导入的AmEBP1 基因提高了‘大果’杏的抗寒性。