利用RAPD技术快速鉴定辣椒杂交种纯度的研究

以新椒系列辣椒杂交种父母本和一代杂种为材料,采用液氮-SDS法提取辣椒基因组DNA,研究PCR反应的主要影响因子,建立适合辣椒杂交种纯度RAPD分析的PCR反应体系,从120个随机引物中筛选出1个能鉴定新椒10号杂种纯度的引物S1220,从7个随机引物中筛选出1个能鉴定新椒3号杂种纯度的引物S1213。     

'吉椒15号'和'吉椒16号'辣椒种子纯度SSR分子标记鉴定体系的初步建立

以‘吉椒15号’和‘吉椒16号’辣椒及其亲本为研究材料,筛选快速鉴定其种子纯度的SSR分子标记。结果发现,72对候选SSR引物中,有6对在杂交种及亲本之间具有多态性且重复性好的共显性标记,其中SSR11、SSR16、SSR34、SSR48及SSR52分别在‘吉椒15号’及其亲本间具有多态性,SSR11、SSR14、SSR16及SSR52分别在‘吉椒16号’及其亲本间具有多态性,上述6对SSR引物可以作为鉴定种子纯度的分子标记。研究结果表明,采用单个SSR标记或2～3个组合标记可以快速鉴定出‘吉椒15号’和‘吉椒16号’辣椒种子中混杂的母本或异形株,SSR分子标记鉴定体系的初步建立可以为辣椒种子纯度的鉴定工作提供便利。     

黑皮冬瓜黑老粗F1种子纯度的RAPD鉴定

用CTAB法从冬瓜种子发芽幼根提取DNA,经电泳检测其条带清晰明亮,可满足RAPD分析要求。对黑皮冬瓜黑老粗F1及其亲本DNA用140个RAPD引物分别进行RAPD扩增,筛选获得1个在父母本间可产生稳定且为双亲互补型片段的引物SPS-C15。利用该引物对一批商品种进行纯度鉴定,纯度为90.7 %,实际田间形态鉴定的纯度为89.8 %,RAPD检测结果与田间鉴定结果基本吻合,表明RAPD技术可用于黑老粗F1的种子纯度快速检测。     

辣椒RAPD反应体系建立及杂交种纯度鉴定研究

以豫椒系列品种父母本和杂交种为材料，采用液氮-SDS法提取辣椒基因组DNA，使用Bio-RAD-Mycy-cler型PCR仪和Bio-RAD1000凝胶扫描仪，研究PCR反应的主要影响因子，建立适合辣椒RAPD分析的PCR反应体系，从40个10bp的随机引物中筛选出1个能鉴定豫椒968杂种纯度的引物S149。     

利用SSR标记鉴定3个辣椒杂交种品种的纯度

辣椒(Capsicum annuum L.)杂交种子纯度快速检测技术对于保证辣椒杂交品种种子生产具有重要的意义。红龙13号、红龙18号、红龙25号辣椒杂交种是新疆隆平红安生物科技有限责任公司选育并大面积栽培的主栽品种。为鉴定上述3个品种的纯度,本实验在特异性引物筛选的基础上,利用SSR标记技术对3个辣椒品种进行了种子纯度鉴定。结果表明,每个品种都有1对以上SSR引物可将其父本和母本分开,3个辣椒杂交种品种的纯度分别为95.35%、89.36%和95.25%。SSR分子标记方法可以准确鉴定辣椒杂交种纯度,且大大缩短纯度鉴定周期。     

14个辣椒杂交种纯度鉴定的SSR引物筛选

利用73对多态性较好的辣椒SSR引物,对湘研种业的14个辣椒品种进行差异性筛选,结果表明,每个品种都有1对以上SSR引物可将其父本、母本及F1代区分开;同时对每个品种的多个批次进行验证,检测结果与田间检测结果基本相符。因此,可利用SSR分子标记技术进行辣椒种子室内纯度鉴定,且具有简单、快速、准确、重复性好等优点,SSR分子标记在辣椒种子室内纯度快速检测方面具有很大的应用前景。     

鲜干兼用型辣椒航椒4号

航椒4号是甘肃省航天育种工程技术研究中心利用太空诱变的种质材料选育的自交系配制而成的鲜干兼用型辣椒一代杂种.2002年在神州3号飞船上搭载天水羊角椒、甘农线椒干种子进行太空诱变处理.2003年进行田间观察试验和RAPD分子生物学检测,结果一致表明,太空诱变处理使这两个品种产生了变异.     

辣椒RAPD系统的建立及在杂种纯度鉴定中的应用

 对辣椒RAPD反应的各个环节, 包括DNA 提取、PCR反应和电泳检测进行了筛选和优化, 确定了一个简单、高效、相对稳定的RAPD 系统, 并筛选出12个较稳定的RAPD标记。可以用于‘中椒’系列辣椒的9个杂交种的纯度鉴定。     

金棚1号番茄种子纯度检测的SCAR标记

以金棚1号番茄及其父、母本为试材，提取叶片DNA，优化构建了稳定的RAPD反应体系。从在番茄上多态性丰富的100条随机引物中筛选获得1条可用于鉴别母本和F₁的引物S130，2条可用于鉴别父本和F₁的引物S296和S114。将扩增所得到的差异条带进行克隆、测序，设计出1对SCAR引物RF2/FF2，能特异鉴别F₁和母本。进一步建立了以干种子为试材检测金棚1号番茄种子纯度的SCAR标记检测体系。     

用α—淀粉酶同工酶分析测定中椒6号种子的品种纯度

本文研究了微辣型辣椒中椒６号及其双亲幼苗的α－淀粉酶同工酶，发现母本具有一条快带，父本具有一条慢带，其杂种同时具有双亲的两条酶带，此中用来鉴别别真假杂种。对田间纯度鉴定和同工酶纯度鉴定结果进行相关分析，其相关系数在显著水平，表明两种不同的纯度分析方法所获结果基本一致。幼苗α－淀粉酶同工酶分析，方法简捷，可靠，完全可以用于中椒６号种子纯度的快速鉴定。     

用α─淀粉酶同工酶分析测定中椒6号种子的品种纯度

本文研究了微辣型辣椒中椒６号及其双亲幼苗的α─淀粉酶同工酶，发现母本具有一条快带，父本具有一条慢带，其杂种同时具有双亲的两条酶带，此模式可用来鉴别真假杂种。对田间纯度鉴定和同工酶纯度鉴定结果进行相关分析，其相关系数达极显著水平，表明两种不同的纯度分析方法所获结果基本一致。幼苗α─淀粉酶同工酶分析，方法简捷、可靠，完全可以用于中椒６号种子纯度的快速鉴定。     

辣椒SRAP分子标记的优化及在航椒4号种子纯度检测中的应用

为了对SRAP分子标记在辣椒中的应用进行优化,试验采用正交设计L16（45）,在4个水平上对影响辣椒SRAP反应体系的Taq酶浓度、Mg2＋含量、模板DNA用量、dNTP浓度及引物用量等5个因素进行了优化,并用单因素完全随机试验筛选各反应因素的最佳水平,建立了辣椒SRAP分子标记的最佳体系。结果表明,在10μL反应体系中,Taq酶最适浓度为1.5U、Mg2＋最适浓度为1.5 mmol/L、模板DNA最适用量为100ng、dNTP最适用量为0.3 mmol/L、引物最适浓度为0.1μmol/L。利用20个辣椒材料来验证此反应体系,6%变性聚丙烯酰胺凝胶电泳检测结果显示,扩增产物在350～750 bp之间多态性高,且反应体系的稳定性和重复性好。通过优化的SRAP分子标记对F1代辣椒种子航椒4号进行纯度检测,检测结果为98%,与其田间检测结果100%十分接近。表明了SRAP分子标记技术是鉴定辣椒一代杂种纯度的有效方法,具有准确、可靠、快速的特点,在辣椒杂交种子纯度室内快速检测中有很大的应用前景。     

SRAP标记在夏华2号甘蓝种子纯度检测中的应用

应用SRAP技术对夏华2号甘蓝种子纯度进行了分子检测研究。结果表明,从100对SRAP引物中筛选出1对引物(Me-5/Em-8)能清晰地扩增出父、母本的特异性条带,并且F1代带型呈双亲互补。利用这对SRAP引物对夏华2号种子进行纯度检测,检测纯度为97%,与田间生物学性状表现相符合,表明SRAP技术可用于夏华2号甘蓝种子纯度鉴定。     

辣椒品种镇研22种子纯度的SSR分子标记鉴定

分子标记技术因其具有高效、稳定、可靠等优点越来越多地被应用到种子纯度鉴定中;而基于分子标记的辣椒(Capsicum annuum L.)杂交种子纯度快速检测技术体系的建立对辣椒杂交品种的选育和生产则具有重要的意义。以辣椒杂交品系镇研22及其两亲本为试验材料,利用SSR分子标记技术对辣椒杂交品种间的多态性进行了引物筛选和种子纯度鉴定研究。结果表明,从20对SSR引物中筛选出CAMS-327引物,在亲本和杂交种中表现出稳定的共显性,并对镇研22杂交种进行纯度鉴定,结果为98%,与田间鉴定结果基本一致;SSR标记分析可实现对辣椒杂交品种种子纯度的快速和准确鉴定。     

利用SSR技术鉴定西葫芦杂交种子纯度

为了建立一套快速、简单、准确、高效的西葫芦种子纯度检测方法,以西葫芦'福美1号'及其亲本为试验材料,利用SSR分子标记技术鉴定杂交种子纯度。从114对SSR引物中筛选出了1对引物(SGSSR25),在杂交种和父、母本之间存在显著差异的条带,且杂交种含有父、母本的特异互补带型。利用该引物对23株'福美1号'杂交种进行纯度鉴定,结果为91.30%,与大田种植鉴定结果一致,表明该引物可用于'福美1号'杂交一代种子纯度的快速检测和准确鉴定,SSR分子标记技术应用于西葫芦杂交种子纯度检测具有可行性。     

甜瓜分子标记纯度鉴定研究

以2个甜瓜品种西域雪1号、西域雪2号及其亲本为试材,建立并优化了单粒种子DNA快速提取法和适合甜瓜的RAPD、SSR分子标记杂交种纯度鉴定体系。从100条随机引物中筛选出G17用于西域雪2号纯度鉴定,可有效区分母本和杂交种。从19对SSR引物中筛选出9对稳定扩增、多态性丰富的引物构建西域雪1号、西域雪2号的SSR指纹图谱。SSR分子标记用较少引物即可扩增出品种特异性条带,且多数F1代带型呈双亲互补,非常适合种子纯度鉴定。同时,使用高浓度、非变性的聚丙烯酰胺凝胶电泳、银染,条带更清晰,可区分只相差1个碱基的扩增片段,同RAPD相比,SSR分子标记更适合甜瓜杂交种纯度快速鉴定。     

利用SSR分子标记建立辣椒纯度鉴定体系

从150对辣椒SSR引物中筛选出116对多态性较好的引物,对兴蔬种业的12个推广辣椒品种的父本、母本及其F1代共36份材料进行PCR差异性筛选,其中6对引物能够区分每个品种的父本、母本及其F1代;同时对辣椒大群体DNA的快速提取、PCR扩增以及制胶电泳等进行了优化,初步建立了基于SSR分子标记技术的辣椒种子纯度鉴定体系,为辣椒种子纯度鉴定工作者提供了参考,也为辣椒种子指纹图谱的建立奠定了基础。     

基于荧光光谱的辣椒种子品种识别

为了提高辣椒种子品种鉴别效率,实现辣椒种子品种快速无损鉴别,研究了一种基于荧光光谱的辣椒种子品种快速无损识别方法。选择同一系列相似辣椒种子的杂交品种卓椒3号、卓椒4号和卓椒5号为研究对象,分别采集辣椒种子的荧光光谱56份,对原始光谱进行Savitzky-Golay(SG)卷积平滑和一阶导数(first derivative,FD)预处理;采用主成分分析(Principal Component Analysis,PCA)方法提取主成分,实现数据降维;采用Fisher判别分析方法建立辣椒种子品种识别模型。结果显示:采用荧光光谱建立判别模型时,卓椒3号辣椒种子的品种识别正确率达到92.9%,卓椒4号、卓椒5号辣椒种子的品种识别正确率均达到100.0%,整体识别正确率达到97.6%;采用荧光光谱的一阶导数光谱建立判别模型时,卓椒3号、卓椒4号、卓椒5号辣椒种子的品种识别正确率均达到100.0%,整体识别正确率达到100.0%。研究结果表明,种子叶绿素荧光光谱结合化学计量学方法能够有效识别辣椒种子品种。     

'镇研958六号'辣椒杂交种纯度的SRAP鉴定

以辣椒品种‘镇研958六号’及其父母本为材料,采用相关序列扩增多态性(SRAP)分子标记方法,建立基于DNA分子标记的‘镇研958六号’辣椒品种纯度鉴定方法,以期为提高大田制种纯度提供分子辅助工具。结果发现,从30 对SRAP标准引物中筛选出引物E3M1能区分‘镇研958六号’及其亲本;应用此引物对‘镇研958六号’杂交种进行纯度鉴定,其纯度结果为98%,与田间鉴定结果基本一致。结果表明,引物E3M1可以作为鉴定‘镇研958六号’纯度的分子标记,SRAP分子标记用于辣椒杂交种子纯度鉴定是可行的。     

结球甘蓝西园4号种子纯度的SSR鉴定

利用SSR分子标记技术对结球甘蓝西园4号及其亲本的DNA进行扩增,从90对SSR引物中筛选出1对具有双亲条带差异明显的引物O112-G04,构建了清晰的DNA扩增指纹图谱,并对西园4号种子进行了纯度鉴定,与田间形态学的鉴定结果高度一致,种子纯度均为96.7 %。结果表明,利用这对引物对结球甘蓝西园4号种子的纯度鉴定是可行的。