嗜水气单胞菌胞外蛋白酶对鲫鱼的致病性

以提纯的嗜水气单胞菌胞外蛋白酶注射异育银鲫,鲫鱼出现典型的嗜水气单胞菌引起的败血症症状;病鱼体表充血、出血,鳃苍白,腹部膨大,肛门红肿突出,腹腔内有红色的腹水,肠壁充血发炎;背部肌肉注射部位发生液化、糜烂,鳞片竖起。病鱼各组织器官都有病变,其中尤以肝、肾最为严重：肝脏肿大,质地脆弱,肝细胞水肿,胞浆结构疏松;肾小体坏死以至解体,肾小管上皮细胞也发生病变。体外试验表明,正常鲫鱼血精中有某种成分能够抑     

嗜水气单胞菌胞外蛋白酶ECPase54的纯化及特性分析

嗜水气单胞菌（Ａｈ）Ｊ－１株的液体培养物上清在５６℃或与乙二胺四乙酸（ＥＤＴＡ）或丝氨酸蛋白酶抑制剂苯甲基磺酰氟（ＰＭＳＦ）作用，其胞外蛋白酶（ＥＣＰａｓｅ）的活力有不同程度的下降，将酪蛋白掺入丙烯酰胺聚合后，加Ａｈ－Ｊ－１上清作ＳＤＳ－ＰＡＧＥ３７℃原位消化，染色，显示上清中存在至少５种分子量不同的蛋白酶，ＡｈＪ－１株的培养上清经硫酸铵沉淀，ＤＥＡＥ－纤维素离子交换层析和ＳｅｐｈａｄｅｘＧ－２０     

培养条件对嗜水气单胞菌胞外蛋白酶合成与分泌的影响

对体外培养嗜水气单胞菌的胞外蛋白酶 (ECPase)产生条件进行了优化。结果发现 ,其产量与碳源、氮源、培养温度、培养基初始pH值等有关。蔗糖能促进蛋白酶的产生 ,NH4 + 抑制蛋白酶的产生。其最佳产酶条件为 :pH 7 5的0 0 2mol·L-1KC1,0 0 6mol·L-1K2 HPO4 ,5g·L-1的蔗糖和 5g·L-1的胰蛋白胨水 ,2 8℃ ,15 0r·min-1摇床培养 6 5h。在此条件下酶活性可达 2 0 8U·mL-1。     

嗜水气单胞菌Aer毒素和胞外蛋白酶卵黄抗体的制备

为克服嗜水气单胞菌不同血清型对卵黄抗体免疫保护效果的影响,从嗜水气单胞菌中提取其主要致病因子Aer毒素和胞外蛋白酶(ECPase),验证其生物学活性,分别免疫蛋鸡。用辛酸-硫酸铵法粗提卵黄抗体,用间接ELISA法测其效价、鉴定抗体与不同来源嗜水气单胞菌主要致病因子的交叉反应。结果表明,抗Aer毒素和抗ECPase卵黄抗体效价最高分别可达1∶213和1∶212,与其他来源嗜水气单胞菌交叉反应性强。     

脱脂奶溶蛋白琼脂扩散抑制试验检测兔血清中嗜水气单胞菌胞外蛋白酶的抗体

利用蛋白酶的蛋白特性，结合琼脂免疫扩散试验，建立了脱脂奶溶蛋白琼脂扩散抑制试验的新方法，用以检测免血清中的嗜水气单胞菌（Aeromonas hydrophilla)胞外蛋白酶抗体，同时与琼脂扩散免疫沉淀试验及ELISA试验进行了比较，结果显示，该方法的敏感性优于琼脂扩散免疫沉淀试验，而与ELISA试验相当。     

中华鳖嗜水气单胞菌病研究概况

综述了嗜水气单胞菌所引起的中华鳖疾病种类、症状、致病机理及防治方法，并就免疫学防治的必要性和可行性提出了一些见解。     

影响细菌胞外蛋白酶(ECPase)产生与获得因素的研究

以底物法检测嗜水气单胞菌胞外蛋白酶的活性，通过培养基的改良、细菌的最适培养时间及最适硫酸铵饱和度的确定，从而找到了经济实惠的蔗糖胰蛋白胨培养基，细菌的最适培养时间为45～48h；最适硫酸铵饱和度为70％．     

嗜水气单胞菌产弹性蛋白酶条件的优化

对嗜水气单胞菌产弹性蛋白酶条件进行如下优化:用单因素法优化了氮源、碳源等培养基成分及温度和初始pH值等培养条件;用三因素三水平的正交试验对氮源浓度、碳源浓度、盐离子浓度进行优化.结果发现:较低浓度的氮源、碳源有利于酶的产生,表面活性剂能明显提高酶的产量.嗜水气单胞菌产弹性蛋白酶的最佳条件:胰蛋白胨5 g·L-1,蔗糖5 g·L-1,NaCl 2.5 g·L-1,K2HPO4 2.0 g·L-1,Tween-80 1 g·L-1,初始pH为7.5,28 ℃培养48 h.     

嗜水气单胞菌产弹性蛋白酶条件的优化

对嗜水气单胞菌产弹性蛋白酶条件进行如下优化:用单因素法优化了氮源、碳源等培养基成分及温度和初始pH值等培养条件;用三因素三水平的正交试验对氮源浓度、碳源浓度、盐离子浓度进行优化.结果发现:较低浓度的氮源、碳源有利于酶的产生,表面活性剂能明显提高酶的产量.嗜水气单胞菌产弹性蛋白酶的最佳条件:胰蛋白胨5 g·L-1,蔗糖5 g·L-1,NaCl 2.5 g·L-1,K2HPO4 2.0 g·L-1,Tween-80 1 g·L-1,初始pH为7.5,28 ℃培养48 h.     

嗜水气单胞菌毒素研究

嗜水气单胞菌近年引起我国养殖鱼类暴发性鱼病的大面积流行，给我国渔业生产造成了极大损失。溶血毒素是该菌致病的主要因子，该毒素是一条链的多肽，分子量５２０００道尔顿左右，与红细胞膜上的血型糖蛋白结合形成寡聚体，进而在膜上成洞，溶血。ＤＮＡ序列分析结果显示该毒素基因与典型的原核基因相符。由于该菌的抗药性等问题，应用基因工程的方法改造病原菌是防治暴发性鱼病的有前途的手段之一。     

铁对嗜水气单胞菌毒力因子的影响

用含不同浓度铁离子的培养基培养嗜水气单胞菌Ｊ－１株,３６ｈ时检测细菌含量以及毒素、蛋白酶、载铁体的表达量。发现菌液的浓度随着Ｆｅ２＋浓度的升高而升高,而毒力因子的表达量则相反,当Ｆｅ２＋的加入浓度为０时,毒素、蛋白酶、载铁体的表达量达最大值。用ＳＤＳ－ＰＡＧＥ电泳及免疫转印分析细菌的外膜蛋白（ＯＭＰ）,嗜水气单胞菌Ｊ－１株在表达载铁体的同时多表达一条ＯＭＰ,其相对分子质量为７１．７×１０３,应为载铁体的受体。此时,经ＥＬＩＳＡ检测细菌菌体及抽取物Ｓ蛋白为阴性;经超薄切片电镜观察,菌体无Ｓ层结构。随着铁离子浓度的降低,Ｊ－１株毒素、蛋白酶及载铁体的表达增多,菌体Ｓ蛋白消失,并产生相应的ＯＭＰ条带,显示铁对嗜水气单胞菌毒力因子的产生具有重要影响。     

一株无致病力的嗜水气单胞菌的分离与特性分析

从南京某无病鱼塘水体中分离到一株革兰氏阴性、有运动力的短杆菌，定名为Ｗ－１株。其生化特性为氧化酶阳性，发酵葡萄糖产酸产气，发酵甘露醇、水杨素和阿拉伯糖，不发酵肌醇。从该菌株培养物的上清中提取的外毒素，具有细胞毒性与溶血性；用嗜水气单胞菌ＨＥＣ毒素的单抗进行检测，乳胶凝集试验及Ｄｏｔ－ＥＬＩＳＡ均呈阳性结果。电镜观察未发现该菌株有晶格样排列的Ｓ层和菌毛，与Ｊ－１株Ｓ蛋白抗血清及Ｒ菌毛抗血清作免疫转印     

嗜水气单胞菌的致病性及其防治方法

现有研究结果表明,嗜水气单胞菌是一种致病力很强的水生常居细菌,能引起水产动物、水禽、家禽和人类等共患病。文章综合报道了嗜水气单胞菌的细菌学特征及其由该菌引起鱼、鳖、蛙、珍珠蚌、鸭及人类感染致病的情况和一般的防治方法,指出今后应对嗜水气单胞菌的发生、传播等做进一步研究,防范该菌对人类的生产、生活造成的危害。     

鳖嗜水气单胞菌疫苗的试制

嗜水气单胞菌能引起人和动物的疾病。我国的许多淡水鱼类的暴发病病原是嗜水气单胞菌［孙其焕等1991，陈怀青和陆承平1991］。暴发病的流行造成巨大的经济损失，严重影响了我国渔业的发展。近年来各种名特水产品的养殖也正在受这种细菌的危害［孙佩芳等1996，陆宏达和金丽华1996］。一味地应用抗生素及化学药物将会带来很多不良后果，且效果不很明显。因此开发一种有效的疫苗势在必行。国外商品性鱼用疫苗在七十年代中已开始生产，国内也在研究试制［杨先乐等1989，许淑英等1994，孙建和和陆承平1995］。本实验室人员从患穿孔病的鳖上分离到…     

嗜水气单胞菌超微结构的研究

嗜水气单胞菌的代表株Ｊ－Ｉ负染显示它具有一端生单鞭毛及周身菌毛,菌毛有两种形态：一种是短而硬,数量多,另一种是细而长,易弯曲,数量少。不同的培养条件影响菌毛、Ｓ蛋白的表达。     

中华鳖嗜水气单胞菌灭活方法的研究

不同的温度、福尔马林浓度、灭活的时间以及灭活菌液的浓度均可影响中华鳖嗜水气单胞菌的灭活。本研究得到了菌液浓度为６０×１０８ｃｆｕ／ｍｌ时的９种灭活方法。通过琼脂双扩散试验对灭活菌液抗原性比较,认为２８℃、０．２％的福尔马林灭活２ｄ为鳖嗜水气单胞菌较理想的灭活方法。     

鳖嗜水气单胞菌疫苗的试制

嗜水气单胞菌能引起人和动物的疾病。我国的许多淡水鱼类的暴发病病原是嗜水气单胞菌［孙其焕等1991,陈怀青和陆承平1991］。暴发病的流行造成巨大的经济损失,严重影响了我国渔业的发展。近年来各种名特水产品的养殖也正在受这种细菌的危害［孙佩芳等1996,陆宏达和金丽华1996］。一味地应用抗生素及化学药物将会带来很多不良后果,且效果不很明显。因此开发一种有效的疫苗势在必行。国外商品性鱼用疫苗在七十年代中已开始生产,国内也在研究试制［杨先乐等1989,许淑英等1994,孙建和和陆承平1995］。本实验室人员从患穿孔病的鳖上分离到…     

嗜水气单胞菌研究进展

介绍了嗜水气单胞菌的分类地位、生物学性状等,并概述了嗜水气单胞茵检测技术方面的研究进展。     

嗜水气单胞菌载铁体的检测

嗜水气单胞菌载铁体的检测收稿日期：１９９６０１０４马向东，陆承平，陈怀青（南京农业大学动物医学院，南京２１００９５）ＤＥＴＥＣＴＩＯＮＯＦＳＩＤＥＲＯＰＨＯＲＥＯＦ＼％ＡＥＲＯＭＯＮＡＳＨＹＤＲＯＰＨＩＬＡＭａＸｉａｎｇｄｏｎｇ，ＬｕＣｈｅｎｇｐ...     

嗜水气单胞菌耐药性研究进展

嗜水气单胞菌(Aeromonas hydrophila)具有广泛的致病性,是水生动物尤其是鱼类最常见的致病菌.对嗜水气单胞菌耐药性的产生及机制包括固有耐药性、获得性耐药性以及耐药性基因的种类等进行了论述,并对发展前景进行了展望.