西瓜SSR标记中不同类型样品的DNA提取分析

为实现西瓜品种纯度的室内快速检测,笔者对西瓜的真叶、子叶、种芽和种子进行了DNA提取,比较了不同类型样品提取DNA的质量与浓度差异,并研究了从不同类型样品中提取的DNA对于SSR-PCR的影响。结果表明,不同类型样品中提取的DNA浓度与质量的大小排序均为:真叶子叶种芽种仁,其DNA浓度之间具有显著性差异。将上述材料中提取的DNA作为模板进行了SSR-PCR扩增分析,发现以上4组DNA模板均能扩增出清晰可见的目标条带,表明从种仁中可直接提取DNA进行SSR分子标记纯度检测。因此在室内用SSR分子标记检测品种纯度时可省略催芽育苗阶段,从而提升检测效率,节省时间。     

一种西瓜叶片DNA快速提取方法

为了解决田间西瓜叶片提取DNA杂质较多及逐个样品提取效率低的问题,建立了基于96孔PCR扩增板,每次提取96个样,并调整提取液改善西瓜叶片DNA质量优化的方法,经超微量分光光度计检测,提取的DNA浓度为287～573 ng·μL~(-1),OD_(260)/OD_(280)在1.96左右,OD_(260)/OD230为1.6～1.9,表明蛋白质、酚类及小分子杂质很少,DNA质量较高;普通引物聚丙烯凝胶电泳检测表明DNA质量稳定、扩增条带清晰。此方法与目前常用的植物基因组DNA提取方法相比具有通量高、速度快、成本低的优点,是适宜于种子企业西瓜分子标记检测相关工作的较好方法。     

节瓜基因组DNA提取方法比较研究

以节瓜的成熟干种子、子叶和不同发育阶段的真叶为材料,选用尿素提取法、高盐低pH值法、SDS法和CTAB法等4种DNA提取方法进行比较。结果表明:不同节瓜材料均可以提取到基因组DNA,其中子叶和第1片真叶的提取效果最好;尿素提取法提取种子DNA最为简便快捷,CTAB法提取叶片能得到纯度较高的基因组DNA。经PCR检验,干种子和子叶提取的基因组DNA都可用于PCR扩增。     

大葱ISSR反应体系的建立及优化

以大葱嫩叶为试材,采用单因素试验和正交实验探讨了Mg~(2+)浓度、dNTPs浓度、引物浓度、TaqDNA聚合酶用量、模板DNA以及Buffer用量对大葱ISSR-PCR扩增的影响,建立了大葱ISSR反应体系。结果表明:优化后的最佳反应体系为10μL反应体系中,10×Buffer缓冲液1.0μL,Mg~(2+)浓度为2.0mmol·L~(-1),dNTPs浓度为0.3mmol·L~(-1),引物浓度为0.65μmol·L~(-1),Taq酶1.0U,模板DNA为60ng,用灭菌的超纯水补齐体积至10μL。对大葱71份样品材料进行ISSR-PCR扩增体系的检测结果显示,该优化体系扩增的产物条带清晰,稳定性高,为大葱种质ISSR分子标记遗传结构分析提供参考依据。     

印度南瓜愈伤组织诱导及其离体再生培养

以印度南瓜"北观"幼苗的下胚轴、子叶、真叶、茎段为外植体,采用离体再生方法,研究了不同种类激素对愈伤组织发育及离体再生的影响,以期为建立高效的南瓜再生体系奠定基础。结果表明:以印度南瓜幼苗的下胚轴、子叶、真叶、茎段为外植体均可诱导出愈伤组织,其中子叶和茎段较易诱导出愈伤组织;愈伤组织在MS+1.0mg·L~(-1) 6-BA(或2.0mg·L~(-1) KT)+0.2mg·L~(-1) NAA培养基上进行继代培养效果较好,可获得质量较好的愈伤组织;在诱导愈伤组织再生培养中,通过不同激素配比处理外植体均未分化出不定芽,仅部分分化出不定根。     

从甜瓜子叶中提取总DNA

用分子标记方法检测甜瓜杂交种子纯度,如果从真叶中提取DNA,检测周期至少需要15d。为了缩短检测周期,我们分别以甜瓜的成熟干种子、吸胀水后“露白”种子、3d龄刚转绿子叶、6d龄子叶、9d龄子叶和12d龄子叶为材料,进行了提取总DNA的研究。结果表明:除了干种子和吸胀水后“露白”种子外,其他的材料都可以提取到DNA,但是DNA的质量因子叶日龄不同而存在很大的差异。不同日龄的子叶中,以3d龄子叶提取的DNA质量好。子叶6d龄时,提取的DNA质量次于3d龄,少量DNA开始出现降解,以后随着子叶日龄的增加,DNA降解加重。另外,与以真叶为材料提取的DNA样品相比较,子叶DNA样品中的蛋白质等杂质含量高,应增加氯仿抽提纯化次数。     

不同浓度多效唑处理对西瓜幼苗生长和生理的影响

培育健壮的种苗是育苗工厂的重要目标,西瓜种苗在环境条件控制不当时容易徒长。笔者研究了在西瓜幼苗生长的2个时期(种子萌芽期和子叶微展期)下,采用不同质量浓度的多效唑(0、5、10、15、25 mg·L~(-1))喷施,调查各处理对西瓜幼苗生长和生理指标的影响。结果表明,西瓜种子萌芽期喷施多效唑培育壮苗的最适质量浓度为5 mg·L~(-1),而子叶微展期喷施的最适质量浓度为10 mg·L~(-1),这2个浓度均能使西瓜幼苗的植株高度显著降低,茎粗度增加,叶片相对叶绿素含量(SPAD)、根系活力、根冠比和壮苗指数显著提高。     

两种基因型黄瓜愈伤组织的诱导

以2个黄瓜品种"金谷六号"和"吉列168"的种子为试材,以子叶和下胚轴作为外植体进行离体培养,研究了不同培养基和激素浓度及配比对黄瓜愈伤组织诱导、不定芽分化的影响。结果表明:2种不同基因型的黄瓜均表现出较强的愈伤组织分化能力,下胚轴要优于子叶,不同激素配比组合对愈伤组织的形态影响较大,AgNO_3能有效抑制愈伤组织的玻璃化。2种黄瓜以子叶为外植体的最佳激素配比均为MS+0.5mg·L~(-1) 6-BA+0.10mg·L~(-1) IAA+1.0mg·L~(-1)AgNO_3;2种黄瓜以下胚轴为外植体的最佳激素配比均为MS+2.0mg·L~(-1) 6-BA+0.10mg·L~(-1)IAA+1.0mg·L~(-1) AgNO_3。该试验条件下不定芽的分化没有形成。     

桔梗的组培离体再生

以桔梗的子叶和下胚轴为外植体,采用离体培养的方法,研究了诱导芽的频率,找出较为理想的外植体类型和相应的培养条件,以期建立高效的桔梗组培再生体系,为桔梗优良株系的繁育和利用提供有效途径。结果表明:桔梗的子叶、下胚轴均可成功诱导出再生芽,其中以子叶诱导率最高,最适合的培养基为MS+1.0 mg·L~(-1) BA+0.5 mg·L~(-1)IAA,在MS+0.5mg·L~(-1)?BA+1.0mg·L~(-1)?IAA的培养基上桔梗再生芽的生长长度最高。因此,桔梗的子叶是最理想的外植体类型,相应的分化培养基组合为MS+1.0mg·L~(-1)BA+0.5mg·L~(-1)?IAA,伸长培养基组合为MS+0.50mg·L~(-1)?BA+1.0mg·L~(-1)?IAA。     

不同激素对“五彩珍珠”番茄再生体系的影响

以"五彩珍珠"番茄为试材,选取6d苗龄无菌苗的子叶和下胚轴为外植体,研究了不同激素浓度及配比对番茄愈伤组织的诱导、不定芽分化及生根的影响,以建立番茄再生体系。结果表明:诱导"五彩珍珠"番茄愈伤组织的最佳培养基为MS+0.4mg·L~(-1)IAA+2.0mg·L~(-1)6-BA,其子叶的诱导率为100%,下胚轴的诱导率为95%;不定芽分化的最佳培养基为MS+0.2mg·L~(-1) IAA+(1.0~3.0)mg·L~(-1) 6-BA;诱导生根的最佳培养基为1/2MS+0.10mg·L~(-1)NAA。子叶为最佳外植体,其不定芽的分化率及生长情况均优于下胚轴。