白刺的原生质体制备与培养

以西伯利亚白刺幼苗子叶为材料,采用L(934)正交试验,比较酶组合、渗稳剂甘露醇浓度、酶解温度和酶解时间对其原生质体制备的影响。试验结果表明,适宜酶解条件为1%纤维素酶OnozukaR-10+0.2%果胶酶Y-23+0.8mol·L-1甘露醇,28℃下酶解3.5h。而且,经过预处理的子叶,其原生质体得率优于未处理的。在MS+2,4-D1mg·L-1+6-BA0.5mg·L-1+0.7mol·L-1甘露醇的固液双层培养基中,原生质体能形成细胞团。     

产纤维素酶原生质体形成和再生条件选择

研究了4种营养缺陷型产纤维素酶的原生质体形成和再生条件。结果表明,它们原生质体形成条件均以0．2mol.L^-1（pH5.8)磷酸缓冲液为好。绿色木霉（Trichoderma viride)UV2-11和另一未定木霉（T．sp.)UV2-2以0．2mol.L^-1KCl的渗透稳定剂为好,菌丝菌龄分别为20,18－20h;康宁木霉（T.Toningii)UV2-15以0．6mol.L^-1NaCl的渗透稳定剂为好,菌丝菌龄均为16－20h,酶解时间均为2－3h。原生质体再生培养基以加入0．5％酵母膏和0．5％泛酸钙钙的改良Czapek培养基效果好,用0．7mol.L^-1KCl和NaCl作为渗透稳定剂。菌株原生质体的生率较高。     

黑木耳原生质体制备及再生的研究

文章用浓度为0.6mol·L-1的MgSO4·7H2O渗透压稳定剂配制浓度为1.5%的溶壁酶,在pH6.0,30℃条件下酶解3h,黑木耳原生质体产量达到最高值为9.2×106个·mL-1。最适合原生质体再生的培养基配方为:马铃薯20%,葡萄糖2%,MgSO4·7H2O0.15%,蛋白胨0.1%,KH2PO40.1%,琼脂2%,甘露醇0.6mol·L-1,在此培养基中的再生率为33.09%。     

甘露醇和生长抑制剂对文心兰离体保存的影响

以文心兰无菌苗为离体保存材料,研究培养基中添加不同浓度甘露醇、矮壮素及脱落酸对文心兰试管苗离体保存的影响.结果表明:在培养温度(24±3)℃,保存前6个月光照强度2 000～2 500 lx,后6个月光照强度500～1 000 lx,光照时间12 h·d-1的培养条件下,MS+6-BA 0.5 mg·L-1+NAA 0...     

花椒原生质体分离与培养研究

以花椒试管苗叶片、愈伤组织和悬浮细胞为试验材料,通过单因素试验研究酶液浓度、渗透压调节剂浓度对花椒原生质体分离的影响,并以花椒试管苗叶片分离出的原生质体为试验材料,研究培养基种类、培养密度、不同激素配比对花椒原生质体培养的影响。结果表明,酶液浓度、渗透压调节剂浓度对花椒原生质体分离有显著影响。在适宜条件下,用甘露醇作花椒原生质体分离的渗透压调节剂,浓度在0.6~0.7 mol·L^-1时分离效果最佳。以花椒叶片为原生质体分离材料的最佳酶液组成为CPW-0.7 mol·L^-1甘露醇+1.0%(w/v)纤维素酶R-10+1.5%(w/v)果胶酶,酶解时间为10 h,纯化后的原生质体产量和活力分别可达82.36×10⁵ 个·g^-1和72.74%。以愈伤组织和悬浮细胞为分离材料的最佳酶液组成均为CPW-0.6 mol·L^-1甘露醇+2.0%(w/v)纤维素酶R-10+0.5%(w/v)果胶酶,酶解12~14 h,纯化后的原生质体产量及活力分别为31.26×10⁵ 个·g^-1、59.15%和53.87×10⁵ 个·g^-1、63.92%。以花椒试管苗叶片为原生质体分离材料,分离纯化后的花椒原生质体在无激素的WPM培养基中,培养密度为1×10⁵个·mL^-1,培养第3天原生质体第1次分裂,2周分裂3~5次,原生质体28 d后形成微细胞团,培养60 d后可形成2 mm左右的愈伤组织。     

桦褐孔菌原生质体制备与再生

采用正交设计方法对桦褐孔菌原生质体最佳制备与再生条件从酶条件、酶解时间、温度等5个方面进行了研究。试验结果表明:其原生质体制备最佳条件是以液体静置培养6d的菌丝体,0.6mol·L-1KCl作为渗透压稳定剂,在30g·L-1溶壁酶作用下,32℃酶解4h,制备率达2.675×107个·mL-1;再生最佳条件是液体静置培养10d的菌丝体,0.6mol·L-1NaCl为渗透压稳定剂,在30g·L-1溶壁酶作用下,32℃酶解2h,再生率为6.83%。     

苹果原生质体培养再生愈伤组织

以苹果试管苗叶片为原生质体分离材料,对影响原生质体分离和培养的因素进行了研究.结果表明适合叶片酶解的酶液组成是Cellulase-Onzuka R-10 0.8%+Pectinase 0.5%+PVP 1%+甘露醇0.65 mol/L+MES0.1%;以改良MT+BA 1.0 mg/L+2,4-D 0.2 mg/L+甘露醇0.65 mol/L+Vc 5.0 mg/L+Glu 500 mg/L+CH 100 mg/L+ME 500 mg/L+Arg 50 mg/L为培养基对原生质体进行培养,固液双层培养效果较好,最适培养密度为1×105个/ml,培养1～2天原生质体变形,3～4天第一次分裂,2周分裂3～5次.平邑甜茶原生质体一个月后形成微细胞团,两个半月形成肉眼可见的微愈伤组织.鲁加5号和M7均只形成7～10个细胞的细胞团,嘎拉未见细胞分裂.     

观果树种轮生冬青离体快繁技术

以轮生冬青幼嫩茎段为外植体,通过筛选启动培养基、比较不同增殖培养基及继代次数对增殖的影响,生根诱导培养基的筛选,建立了轮生冬青的离体快速繁殖技术体系。结果表明:最适腋芽诱导培养基为B5+6-BA1.0 mg·L~(-1)+IBA0.05 mg·L~(-1);适宜增殖培养基为B5+6-BA1.5 mg·L~(-1)+IBA0.3 mg·L~(-1),第4次继代时增殖系数最大为6.3,丛生芽长势好;适宜的继代周期为35 d;最佳生根培养基为1/2B5+IBA0.2 mg·L~(-1)+NAA0.3 mg·L~(-1),生根率可达100%。移栽于V(珍珠岩)∶V(蛭石)∶V(腐殖土)=2∶1∶1的混合基质中,成活率达90%以上。     

花叶艳山姜茎尖离体快繁技术

以花叶艳山姜（Alpinia zerumbet cv．vaniegata）的茎尖作为外植体,研究了花叶艳山姜的离体快繁技术。结果表明：花叶艳山姜茎尖接种在MS＋BA3．0mg·L-1＋NAA0．2mg·L-1＋白糖30g·L-1的培养基上,30d后长出幼芽;丛生芽在MS＋6-BA2．0—2．5mg·L-1＋NAA0．2mg·L-1＋白糖30g·L-1的培养基上,增殖效果最佳,增殖倍数达4．0,芽生长正常,且色泽浓绿;芽苗在1／2MS＋NAA1．0～1．5mg·L-1＋白糖30g·L-1的培养基上,生根效果较好,根系粗壮,生根率为93．0％;组培苗移栽在V河沙：V珍珠岩：V表土：1：1：1的混合基质中,成活率可达70．1％。     

马兰茎尖培养及快速繁殖的研究

以马兰的茎尖为试验材料,进行了茎尖的萌发与分化、试管苗的生根、移栽与移植的快繁技术研究。结果表明:MS+BA 0.2 mg.L-1+IAA 0.5 mg.L-1+GA30.5 mg.L-1是生长点萌发生长的理想培养基;MS+NAA 0.1 mg.L-1+BA 1.0 mg.L-1是萌发生长芽分化培养的理想培养基;1/2MS+IAA 0.6 mg.L-1是不定芽生根培养和生根继代培养的理想培养基;在温室中河沙是试管苗移栽的理想基质;移植到山坡上的试管苗长势旺盛。     

紫山药愈伤组织的诱导及其分化

以紫山药无菌苗为试材,研究了植物生长调节剂种类、材料类型、光暗条件等对其愈伤组织诱导及其分化的影响。结果表明:(1)细胞分裂素6-BA和KT对紫山药愈伤组织的诱导效果差异不显著,适合紫山药茎段愈伤组织诱导的最佳植物生长调节剂组合为KT 2.0 mg·L-1+NAA 2.0mg·L-1或6-BA 2.0 mg·L-1+NAA 2.0mg·L-1;(2)同一培养基上不同外植体愈伤诱导效果存在差异,在植物生长调节剂配比6-BA 2.0mg·L-1+NAA 2.0mg·L-1下,微型块茎、茎段的愈伤组织诱导率比叶片高,分别为91.167%、86.300%、45.167%;(3)添加0.25g·L-1的活性炭能明显减轻紫山药茎段愈伤组织的褐化,愈伤生长良好,且愈伤组织的诱导率较高;(4)光暗条件对紫山药茎段愈伤组织诱导率的影响差异不显著,但暗处有利于愈伤组织的增殖生长;(5)不同植物生长调节剂配比对愈伤组织不定芽分化的影响显著,适合紫山药愈伤组织再分化的最佳植物生长调节剂配比为MS+6-BA2.0mg·L-1+NAA0.02mg·L-1,诱导率达50%以上,芽苗生长粗壮。     

广州一号桉树高效组培再生体系的建立

以广州一号桉树优良无性系无菌苗茎段为外植体,通过对噻唑基脲类新型分裂素(N-phenyl-N’-[6-(2-chlorobenzothiazol)-yl]urea,PBU)等多种不同质量浓度植物生长调节剂组合的优化,进行愈伤组织诱导及再生研究。结果表明,在添加了2 mg.L-1PBU和0.06 mg.L-1IAA的改良MS培养基上,茎段外植体5 d后愈伤组织诱导率达100%;将愈伤组织接种在添加1 mg.L-16-BA和0.1 mg.L-1NAA的MS培养基上,诱芽率高达90%;随后,在添加了0.2 mg.L-1PBU与0.05 mg.L-1NAA的1/2MS培养基上诱导芽伸长,用1/2MS培养基附加0.2 mg.L-1IBA诱导生根,炼苗15 d后,以质量m(黄心土)∶m(腐殖质土)=1∶1为基质进行移栽,得到完整再生植株,成活率高达95%。     

文冠果腋芽诱导关键影响因素与培养体系优化

以文冠果幼嫩茎段作为外植体,通过对灭菌剂种类及灭菌时间、外植体采集时间、基本培养基类型、BA浓度、糖源种类和浓度等文冠果腋芽诱导的可能影响因素进行了试验研究,建立了文冠果茎段外植体高效腋芽诱导技术体系。结果表明:(1)用于外植体表面灭菌的最佳灭菌剂为0.1%HgCl2,最佳灭菌时间为4min;(2)外植体的最佳采集时间为4~5月,此阶段采集的外植体易于灭菌,成活率高;(3)腋芽诱导的最佳基本培养基为MS培养基;(4)当MS培养基中添加1.0mg·L-1 BA和0.2mg·L-1 NAA时,腋芽诱导率最高,达92.25%;(5)腋芽诱导的最佳糖源为蔗糖,最佳浓度为30g·L-1;(6)光照培养比暗培养更有利于文冠果的腋芽诱导及生长。     

Kisspeptin-10对无血清培养鸡F1级卵泡颗粒细胞孕酮分泌的影响及机制研究

【目的】研究kisspeptin-10对无血清培养的鸡卵泡颗粒细胞孕酮分泌的作用及可能机制。【方法】选取200日龄处于产蛋高峰期的伊莎蛋鸡,于排卵前剖腹收集F1卵泡,分离纯化颗粒细胞,于含胎牛血清培养基中培养24 h,换成无血清培养基稳定培养24 h后,用不同浓度的Kp-10、U73122、EGTA等单独或共同处理细胞,收集细胞上清,放射免疫学方法检测培养基中孕酮含量。【结果】（1）通过免疫细胞化学方法,显示颗粒细胞上有Kp-10免疫活性样物质的阳性表达;（2）Kp-10处理可显著增加无血清培养的颗粒细胞的活力,100 nmol•L-1时可显著促进孕酮的分泌（P＜0.05）;（3）与对照组相比,2 μmol•L-1 U73122（磷脂酶C抑制剂）对孕酮的分泌无显著影响（P＞0.05）,而0.5、2 μmol•L-1 U73122能显著降低Kp-10对孕酮分泌的促进作用（P＜0.05）;（4）钙离子阻断剂Verapamil（1-100 μmol•L-1 ）呈剂量依赖性降低孕酮的分泌,于100 μmol•L-1时达显著降低水平（P＜0.05）;与1 μmol•L-1 Verapamil单独处理组相比,100 nmol•L-1 Kp-10与1 μmol•L-1 Verapamil同时处理可显著增加孕酮的分泌,而与10、100 μmol•L-1 Verapamil共同处理不能逆转其对孕酮分泌的抑制作用（P＞0.05）,且胞内钙离子含量与上清液中孕酮分泌水平相一致;（5）与100 nmol•L-1 Kp-10处理组相比,1和5 mmol•L-1 EGTA共同处理时孕酮分泌显著降低,当再加入1.5 mmol•L-1 Ca2+时孕酮分泌量显著增加。【结论】Kp-10促进体外培养的鸡卵泡颗粒细胞孕酮的分泌,其机制可能与胞内Ca2+信号通路有关。     

短葶山麦冬茎尖培养快速繁殖技术研究

以短葶山麦冬茎尖为外植体,通过对其采取不同消毒时间、茎尖诱导分化、壮苗与生根及移栽条件等快速繁殖条件进行研究.结果表明:0.1％ HgCl2消毒时间为12 min;短葶山麦冬茎尖分化培养基MS+ BA 2.0mg·L-1+ NAA0.2 mg·L-1,茎尖分化率高,最高分化率达到90％.丛生芽增殖培养基选择MS+ BA...     

枣未成熟胚高效再生体系研究

以枣树雄性不育3号(JMS3)和金芒果枣为材料,建立了枣树未成熟胚高效再生植株体系。对枣未成熟胚高效再生体系研究结果表明:枣未成熟胚可以通过直接萌发和经子叶发生愈伤两条途径再生完整植株,冷藏处理是促进未成熟胚直接成苗的有效方法。枣未成熟胚经0～4℃冷藏60d,接种在MS+蔗糖30g.L-1+琼脂3.3g.L-1培养基上,胚直接成苗率高达93.3%。将去除核壳时受损伤胚的子叶接种到MS+麦芽糖20g.L-1+琼脂3.3g.L-1+TDZ 1.0mg.L-1+NAA 0.2mg.L-1培养基上,40d后出愈率为98.9%。所得愈伤经MS+麦芽糖20g.L-1+琼脂3.3g.L-1+TDZ 1.0mg.L-1诱导40d后出芽率可达74.1%,丛生芽率达70.4%。在生根培养基1/2MS+蔗糖20g.L-1+琼脂3.3g.L-1+IBA1.0mg.L-1+IAA0.01mg.L-1上40d后生根率为80.8%。     

花生原生质体分离与培养

以花生(Arachis hypogaea L.)品种花育20为材料,探讨不同的酶液浓度、酶解时间及渗透压对花生原生质体分离的影响.结果表明:原生质体分离的适宜酶液配比是2%纤维素酶(Cellulase Onozuka Rs)、0.2%果胶酶(Pectolyase Y-23),甘露醇渗透压调节剂的浓度为0.7mol/L,暗处理10h,叶片原生质体产量为4.86x105个/ml,存活率75.6%,愈伤组织原生质体产量为4.97x105个/ml,存活率75.4%.将分离的原生质体培养在添加1mg/LNAA和4mg/LBAP的改良MS液体培养基中.培养约2～3天后,细胞开始分裂.然后部分细胞继续分裂,并形成细胞团.培养5～6周后,将培养物转移到添加2 mg/L2,4-D和3 mg/L BAP的MS液体培养基(pH5.8)中进行培养.7～8周后,将形成的直径为1～2 mm的小愈伤组织转移到添加1 mg/LNAA和5 mg/LBAP的MS固体培养基上培养,小愈伤组织迅速生长.转移3-4周后,愈伤组织长至7～9mm.     

玉竹愈伤组织诱导及其细胞悬浮培养体系的建立

以玉竹叶片和根状茎为外植体,研究植物生长调节剂、碳源和pH对玉竹愈伤组织诱导的影响以及植物生长调节剂对愈伤组织增殖的影响,通过正交试验初步建立并优化玉竹愈伤细胞的悬浮培养体系。结果表明,叶片和根状茎愈伤组织诱导的最佳培养基均为MS+1.0mg·L~(-1)?6-BA+0.5mg·L~(-1)?NAA+30%蔗糖,培养基最佳pH5.6,叶片和根状茎愈伤组织增殖的最佳植物生长调节剂组合均为2.0mg·L~(-1)?6-BA+0.8mg·L~(-1)NAA,且根状茎愈伤组织的诱导率和增殖倍数均明显高于叶片。根状茎愈伤细胞悬浮培养的最佳接种量80g·L-1,最佳植物生长调节剂组合1.5mg·L~(-1)6-BA+0.6mg·L~(-1)?NAA,细胞生长曲线与多糖含量变化曲线均呈"S"形,细胞最佳继代周期16d,多糖含量在培养14d时最高,培养基pH呈先下降后上升然后趋于稳定趋势。     

天人菊无性系建立的研究

以天人菊幼嫩叶柄为材料,进行了组织培养及无性系建立的研究,比较了不同诱导条件对天人菊愈伤组织诱导、分化以及不定芽生根的影响。结果表明:MS+BA 0.4 mg.L-1+NAA 0.2 mg.L-1+2,4-D1.0 mg.L-1是诱导叶柄形成具有分化能力愈伤组织的理想培养基;1/2 MS+BA 0.8 mg.L-1+NAA0.1 mg.L-1是愈伤组织分化的理想培养基;1/2 MS+IAA0.2 mg.L-1是天人菊分化不定芽壮苗和生根的理想培养基。     

黑木耳茵丝原生质体的制备再生及单核鉴定研究

探讨了黑木耳原生质体的制备、再生及单核化的问题.结果表明,培养了8d的黑木耳茵丝体用硫酸铗做稳渗剂,2.0%的溶壁酶酶解,31℃下水浴4h所产生的原生质体数量最多,可以达到11.5×107个·mL-1,0.5 mo1·mL-1硫酸镁渗透压稳定剂,RM5再生培养基条件下再生率最高,最高可达1.63%.原生质体再生的茵丝接...