裙带菜配子体原生质体培养

从裙带菜配子体分离出原生质体,产量在１．５￣２．５×１０＾７个／ｇ鲜重范围内。原生质体形成细胞壁并分裂,４￣５周后再生成为与普通配子体大小和形状相同的新的配子体。     

花椒原生质体分离与培养研究

以花椒试管苗叶片、愈伤组织和悬浮细胞为试验材料,通过单因素试验研究酶液浓度、渗透压调节剂浓度对花椒原生质体分离的影响,并以花椒试管苗叶片分离出的原生质体为试验材料,研究培养基种类、培养密度、不同激素配比对花椒原生质体培养的影响。结果表明,酶液浓度、渗透压调节剂浓度对花椒原生质体分离有显著影响。在适宜条件下,用甘露醇作花椒原生质体分离的渗透压调节剂,浓度在0.6~0.7 mol·L^-1时分离效果最佳。以花椒叶片为原生质体分离材料的最佳酶液组成为CPW-0.7 mol·L^-1甘露醇+1.0%(w/v)纤维素酶R-10+1.5%(w/v)果胶酶,酶解时间为10 h,纯化后的原生质体产量和活力分别可达82.36×10⁵ 个·g^-1和72.74%。以愈伤组织和悬浮细胞为分离材料的最佳酶液组成均为CPW-0.6 mol·L^-1甘露醇+2.0%(w/v)纤维素酶R-10+0.5%(w/v)果胶酶,酶解12~14 h,纯化后的原生质体产量及活力分别为31.26×10⁵ 个·g^-1、59.15%和53.87×10⁵ 个·g^-1、63.92%。以花椒试管苗叶片为原生质体分离材料,分离纯化后的花椒原生质体在无激素的WPM培养基中,培养密度为1×10⁵个·mL^-1,培养第3天原生质体第1次分裂,2周分裂3~5次,原生质体28 d后形成微细胞团,培养60 d后可形成2 mm左右的愈伤组织。     

香菇原生质体的分离与再生行为

通过电镜观察与酶解分析确定香菇（Ｌｅｎｔｉｎｕｓｅｄｏｄｅｓ）菌丝细胞壁组成后，进行了双核菌丝原生质体的分离和培养．结果为：①在酶解中，菌丝原生质体一般只从菌丝顶端等新生部位释放出来，合适的渗透剂、菌龄和酶解温度是提高原生质体得率的重要保证；②原生质体再生菌丝是一个间歇性的依赖于原生质体团涌动流向的过程．再生菌丝的形成经历了原生质体形成突起－哑铃状－分枝状等不同形态类型的再生阶段；③培养再生的菌丝体在形态上没有观察到锁状联合，栽培后未能结实，初步判断为单核菌株     

几种担子菌菌丝原生质体的分离与再生

本实验从几种食用担子菌的菌丝中运用纤维素酶和β-葡糖醛苷酸酶的混合酶解液分离出原生质体并进行了培养。这些原生质体在培养中再生了管状的初生菌丝,并在继代培养中形成克隆。本论文报道了原生质体从菌丝释放的形态学观察结果,并对原生质体分离与再生的条件进行了讨论。     

小红毛菜原生质体的分离及培养

用蛋白酶和细菌酶分离出来的小红毛菜原生质体，在适宜的温度，光照下，具有很强的再生能力，培养２－３天，原生质体产生细胞壁，然后分裂成二个独立的细胞，经培养，这些细胞有的还能重复同样的分裂，使单细胞数目剧增，这些细胞经诱导培养能萌发成小红毛菜。     

苹果原生质体研究

综述了近20年来苹果原生质体研究进展,对苹果原生质体的分离培养、植株再生技术进行了阐述,通过对有关文献的分析,提出了原生质体研究存在的问题和今后研究的方向.     

原生质体技术与观赏植物育种

原生质体培养和植株再生技术在观赏植物育种中起重要作用。原生质体的来源、原生质体的分离、培养基的成分、培养方法等,都对原生质体的培养有重要影响。近年来,观赏植物原生质体在细胞融合、遗传转化上有了一定发展,为创造观赏植物新种质提供了新途径和方法。     

玉米原生质体培养再生植株

将玉米自交系“330”成熟胚诱导的愈伤组织,在附加2mg/L2,4—D的MSB培养基上继代、筛选,产生了三种类型的愈伤组织。用结构疏松,生长迅速的Ⅱ型胚性愈伤组织分离原生质体,在KPR或N_6ap培养基中以1×10~5/ml密度进行液体浅层培养,植板率为5.6%—7.4%。采用分步分化法得到了正常的绿苗,并经过壮根,炼苗后移栽成活。     

水稻原生质体培养及植株再生的研究

由水稻花粉株系9211215及品种早雪的细胞悬浮物游离原生质体,采用改良的RY—2培养基以琼脂糖珠包埋法进行原生质体培养,发生了持续分裂,早雪植板率达5％以上。ABA对恢复和提高原生质体再生愈伤组织的分化能力作用显著。两个材料均成功地再生出植株,再生频率9211215为8.9％,而早雪高达33.3％。60余株再生植株移栽田间后能正常开花结实。这是我省第一次水稻原生质体再生植株的报道。     

红酵母原生质体制备和再生条件研究

［目的］初步探讨红酵母原生质体制备和再生的条件。［方法］以红酵母为试材,研究渗透压稳定剂pH值、酶浓度、酶解时间、预处理时间4个因素对红酵母原生质体制备率和再生率的影响。［结果］pH值在6.5～7.0,原生质体的制备率和再生率随着渗透压稳定剂pH值的升高而上升。当酶浓度从0.2%上升到1.0%时,原生质体制备率上升较快,而原生质体再生率下降较慢。随着酶解时间的增加,原生质体的制备率逐渐增加,而原生质体的再生率逐渐下降。在5～15 min,原生质体制备率和再生率均随着预处理的时间的增加而降低。［结论］当渗透压稳定剂pH值为7.0,蜗牛酶酶浓度为1.0%,酶解时间为60 min,预处理时间为5 min时,原生质体的制备率和再生率能分别达到较高的值。     

榆黄蘑(Pleurotus citrinopileutus)原生质体分离和再生的研究

试验从影响原生质体制备的诸多方面进行了研究,探索榆黄蘑原生质体制备的优化系统。试验时取鲜嫩的菌丝,用ＰＨ值为６．０的ＣＫｌ,蔗糖,甘露醇做酶解稳定液,３０℃下水浴酶解,酶解时间为４－５ｈ,此时榆黄蘑原生质体释放量最大,达到１０＾７个／ｍＬ。     

层出镰孢菌原生质体制备条件的研究

[目的]研究层出镰孢菌(Fusarium proliferatum)原生质体的最佳条件,建立高效制备层出镰孢菌原生质体制备的方法.[方法]通过对菌丝体菌龄、酶解液组合、酶解反应温度及酶解时间等影响因素进行优化,对层出镰孢菌原生质体的制备条件进行研究.[结果]菌块在CMC液体培养基中25℃培养分生孢子3 d后,过滤离心后转移至YEPD液体培养基中培养12 h,该菌丝最适于层出镰孢菌原生质体的制备;用1.2 mol/L KCl溶液配制含有5 mg/m L裂解酶、25 mg/m L崩溃酶、0.05 mg/m L溶壁酶的酶解液在30℃下对菌丝酶解1.5 h,此时原生质体的数量最大,为2.47×10~9个/m L.原生质体再生培养时,使用40%PTC溶液恢复细胞壁,在TB3液体培养基中30℃过夜培养,离心后与TB3固体培养基混合后倒入平板培养,原生质体再生率可达39.75%.[结论]通过对菌丝体菌龄、酶解液浓度、温度、酶解时间等条件的优化,可提高层出镰孢菌原生质体的产量及再生率,为进一步研究层出镰孢菌致病分子机制提供理论依据.     

石斛兰叶片原生质体分离条件研究

[目的]探讨了石斛兰原生质体分离过程中的影响因素,建立最佳的原生质体制备体系。[方法]以石斛兰叶片为材料,采用正交设计研究纤维素酶浓度、酶解时间、温度、pH值以及甘露醇浓度对石斛兰原生质体分离的影响。[结果]以3%纤维素酶R-10＋0.6%果胶酶Y-23为混合酶液,0.5mol/L甘露醇为渗透压稳定剂,在26℃的黑暗条件下,pH值为5.4的酶液组合中,黑暗条件下振荡,酶解15h,获得的原生质体产量最高。[结论]该制备体系为后续原生质体培养和体细胞杂交奠定良好的基础。     

蛹虫草原生质体分离条件研究

[目的]为蛹虫草各种药理机制及有效成分的研究提供试验依据。[方法]在其他条件不变的情况下,分别研究不同酶解液(单一酶和不同的组合酶)、不同菌龄(3、5、7、9、11 d)、不同酶解时间(1、2、3、4、5 h)、不同酶解温度(23、28、33、38、43℃)、不同酶解pH值(pH值4.92、5.29、5.91、6.47、6.98)以及不同渗透压稳定剂(浓度0.6 mol/L的MgSO4、KCl、甘露醇和葡萄糖)对蛹虫草原生质体制备结果的影响,确定制备蛹虫草原生质体的适宜条件。[结果]用浓度0.6 mol/L KCl配制成含1.0%纤维素酶和0.5%蜗牛酶的复合酶,在28℃、pH值5.91时,对培养9 d的菌丝体酶解3 h,得到的原生质体数量最多。[结论]为以后进行蛹虫草原生质体技术的深入研究和应用奠定了基础。     

芦荟原生质体的分离

[目的]为进一步的离体培养快速繁殖奠定基础,同时也为原生质体的融合(体细胞杂交)提供条件。[方法]采用酶解的方法以芦荟的叶片为材料进行原生质体分离。[结果]用芦荟的叶肉细胞可成功分离出原生质体,而且活力较高,可达90%以上。[结论]芦荟原生质体的成功分离主要取决于材料的来源、酶液的组成。另外还受酶解液的渗透压、温度和pH值影响。     

红麻下胚轴原生质体的分离与培养

采用暗培养3日龄的红麻无菌苗下胚轴,在0.45 mol·L-1甘露醇的渗透压条件下,以5.0mg·L-1纤维素酶(Cellulose R-10)和5.0mg·L-1果胶酶(Pectinase)酶解12 h,原生质体的产率最高,活力较强.以5.0×104个·mL-1的密度,在改良的KM8P培养基中,附加0.5 mg·L-1 2,4-D和0.5 mg·L-1 6-BA,用微滴法培养,对原生质体的分裂和愈伤组织的形成极为有利.