长白山区土壤中高毒力苏云金杆菌的分离及生物测定

[目的]分离筛选出对鳞翅目害虫高毒力的新苏云金杆菌.[方法]通过温度筛选法从长白山区土壤中分离出苏云金杆菌,再通过生物测定和毒力测定筛选出高毒力苏云金杆菌.[结果]从150份土壤样品中分离出18株苏云金杆菌,其分离率为12.0％,其中山地分离率为8.5％,农田分离率为16.2％.活性测定结果,18株菌株中对小菜蛾、斜纹夜蛾及甜菜夜蛾致死率超过90％的菌株分别有17株、5株和4株,其中YN1-1菌株对3种害虫都表现出高活性.毒力测定结果,YN1-1菌株对甜菜夜蛾和斜纹夜蛾的速效性最好;对甜菜夜蛾高毒力菌株依次为YN6-2＞YN1-1 ＞YN4-2＞YN2-6;对斜纹夜蛾高毒力菌株依次为YN4-4＞YN1-1 ＞YN6-1 ＞YN4-1＞YN2-1.[结论]经活性测定和毒力测定,最终筛选出广谱性、速效性及高毒力的YN1-1为目标菌株.     

甜菜夜蛾颗粒体病毒毒力的生物测定

以甜菜夜蛾２—３龄幼虫为供试虫，对国内外首次发现的甜菜夜蛾颗粒体病毒（Ｌａｐｈｙｇｍａｅｘｉｇｕｅｇｒａｎｙｌｏｓｉｓｖｉｒｕｓ，ＬｅＧＶ）进行了生物测定．在２３—２５℃相对湿度７０％—８０％下其样品死亡机率值与浓度对数值的回归方程是ｙ＝０．４５ｘ＋３．７６（ｒ＝０．９９），ＬＣ５０＝５７２．４颗粒体·ｍＬ－１，ＬＣ５０的９５％置信区为１５８—２０８４颗粒体·ｍＬ－１．甜菜夜蛾不同龄期幼虫对ＬｅＧＶ的敏感性不同，初孵幼虫敏感性最强，２、３龄次之，４龄幼虫极不敏感．此外，贮藏期温度对ＬｅＧＶ感染力的影响也进行了初步研究．     

AcNPV对甜菜夜蛾二龄幼虫的生物测定

以甜菜夜蛾二龄幼虫对苜蓿银纹夜蛾核型多角体病毒（ＡｃＮＰＶ）两种毒株采用生物测定方法进行比较。对ＡｃＮＰＶ两毒株杀虫毒力及杀虫速率的分析表明：以甜菜夜蛾活体增值的ＡｃＮＰＶ Ａ株（ＬＤ５０＝１３１．８ＰＩＢ／头）比用草地贫夜蛾细胞株（Ｓｆ９）增殖的ＡｃＮＰＶ Ｂ株（ＬＤ５０＝１６９６．８ＰＩＢ／头）毒力要高１０倍,而毒杀速率,也以ＡｃＮＰＶ Ａ株（ＬＴ５０＝４．４６ｄ）比ＡｃＮＰＶ Ｂ株（ＬＴ５０     

苏云金芽孢杆菌毒性研究

以菜青虫为试验材料,用苏云金芽孢杆菌浸泡过的小白菜饲喂菜青虫,提取菜青虫体内的伴孢晶体,通过生物测定法对苏云金芽孢杆菌的毒性进行研究,并对出发菌株进行紫外诱变筛选高毒性菌株。结果表明,苏云金芽孢杆菌毒性与伴孢晶体含量有关,伴孢晶体含量越多,毒力越高;紫外诱变16min时得到菌株B16,伴孢晶体含量比出发菌株提高8.2%,杀虫效率比出发菌株提高77%。该研究为苏云金芽孢杆菌生产高效率生物农药提供菌种。     

甲氨基阿维菌素苯甲酸盐和苏云金杆菌对甘蓝甜菜夜蛾的防治效果研究

为了筛选出高效安全的甘蓝甜菜夜蛾防治药剂,本文选用不同剂型的甲氨基阿维菌素苯甲酸盐药剂和苏云金杆菌水分散粒剂开展试验。结果表明,5%甲氨基阿维菌素苯甲酸盐微乳剂67.5 g/hm2对甘蓝甜菜夜蛾速效性最好,0.5%甲氨基阿维菌素苯甲酸盐乳油675 mL/hm2次之;5%甲氨基阿维菌素苯甲酸盐微乳剂67.5 g/hm2、3%甲氨基阿维菌素苯甲酸盐水分散粒剂120 g/hm2、15 000 IU/mg苏云金杆菌水分散粒剂375 g/hm2对甘蓝甜菜夜蛾的防治效果均达到95.75%以上,可在生产上推广应用。     

苏云金杆菌Cry1C毒素对甜菜夜蛾幼虫生长发育存活及取食行？…

研究了苏云金杆菌Ｃｒｙ１Ｃ毒素对甜菜夜蛾幼虫生长发育、存活及了食行为的影响,结果表明,当饲料中所含毒素浓度增高时,幼虫历期延长、存活率降低,对饲料的拒食作用和选择作用增强,取食量和生长量减少,在毒素浓度相同的情况下,敏感品系相比,抗性品系对含有毒素的饲料明显具有较强的适应能力。     

苏云金杆菌制剂毒力的快速检测

用改进后的“小菜蛾－白菜菜叶法”对４个苏云金杆菌制剂样品的３批次生物测定结果表明,毒力效价的变异系数都低于５％,相关系数都高于０．９４,检测值的稳定性高于菜叶法及其它方法,检测时间能从４８ｈ缩短到２４ｈ。     

甘蓝夜蛾高毒力Bt菌株的筛选

东北农业大学昆虫教研室从黑龙江地区病死鳞翅目昆虫体内分离出苏云金杆菌（Bacillusthuringiensis,Bt）菌株74株,随后以甘蓝夜蛾为供试昆虫对这些菌株的毒力进行了测定,结果表明,很多菌株对甘蓝夜蛾的初孵幼虫均具有一定的毒力,经过初筛、复筛,试验选出了毒力相对较高的5个菌株,当菌液浓度在8×10~7个芽孢·mL(－1)时,甘蓝夜饿死亡率分别达到80％～95％,Lc50分别为43,63,68,710,1778倍液。     

高毒力苏云金杆菌CAB109菌株的蛋白质特性及其田间防效

对甜菜夜蛾等害虫具有高毒力的苏云金杆菌CAB109菌株进行生物学特性调查结果表明,CAB109菌株的伴孢晶体具有典型的菱形结构;其原毒素蛋白的分子量为133kDa,经胰蛋白酶处理后水解为66kDa的活性毒素蛋白．DNA凝胶电泳显示：CAB19菌株的质粒DNA与同样H,血清型的已知HD-133菌株不同．CAB109菌株对葱田甜菜夜蛾的平均防效达75．3％,高于常用化学农药和微生物农药的防效;平均挽回损失率也达26．0%表现出优良的开发潜力．     

A Fragment of Cadherin-Like Protein Enhances Bacillus thuringiensis Cry1B and Cry1C Toxicity to Spodoptera exigua（Lepidoptera：Noctuidae）

Cry toxins produced by Bacillus thuringiensis (Bt) are effective biological insecticides against certain insect species.In this study,bioassay results indicated that CrylB and Cry1C were toxic to Spodo...     

枯草芽孢杆菌和苏云金芽孢杆菌的共培养及其对生物活性物质产生的影响

研究了枯草芽孢杆菌Bs5 5和Bs90菌株分别与苏云金芽孢杆菌Bt1和Bt2菌株在共培养条件下的菌体生长、抗菌活性物质脂肽类化合物和杀虫活性物质伴孢晶体蛋白的产生状况。结果表明 ,Bs5 5与Bt共培养的菌体生长和脂肽类化合物的产生与单独培养的Bs5 5相似 ,未检测到伴孢晶体蛋白 ,但有Bt特异性蛋白存在 ;Bs90与Bt共培养的菌体生长和脂肽类化合物的产生与单独培养的Bs90有相对较大的差别 ,检测到伴孢晶体蛋白。说明Bs与Bt可以共生 ,组合适当时可以产生各自的生物活性物质     

由苏云金芽胞杆菌胞晶混合物直接提取原毒素的方法

采用室内实验技术,研究了直接从苏云金芽胞杆菌胞晶混合物提取原毒素的方法。胞晶混合物依次用0.5mol·L-1NaCl和无菌去离子水洗涤3次,洗涤后的沉淀物用0.05mol·L-1NaOH 0.1mmol·L-1PMSF溶液溶解10min,10000r·min-1离心15min去除不溶物。上清液以25%乙酸调至pH4.4,得原毒素蛋白沉淀,冷冻干燥。SDS-PAGE电泳扫描结果表明,原毒素分子量为130kDa,在提取过程中没有发生降解。该提取方法具有操作简便、成本低、效率高等优点。     

苏云金杆菌Bt-8的培养特性及杀虫活性分析

[目的]明确苏云金杆菌(Bacillus thuringiensis,Bt)Bt-8的菌株生物特征及其杀虫活性,为其工业化生产提供参考.[方法]通过LB培养基培养观察3株苏云金杆菌Bt-8、Bt2671和Bt7-9菌株生长特征,并比较分析其内生质粒和晶体蛋白的种类.发酵培养基培养分离3株菌株的晶体蛋白,通过生物活性测定和国家标准中描述的方法分析毒素蛋白浓度和生物效价及杀虫谱.[结果]Bt-8具有典型的苏云金杆菌培养特征,营养生长后期形成菱形至椭圆形晶体蛋白,但孢子稳定时间较短,容易二次萌发.Bt-8携带24、16、8和7kb4种质粒,大分子晶体蛋白基因主要为cry1Ac和cry1Ab.杀虫活性分析结果表明,Bt-8培养活菌数低于原分离菌株Bt2671,但晶体蛋白代谢量极显著提高(P<0.01),生物效价较Bt2671提高30.4%,对小菜蛾、稻纵卷叶螟和茶尺蠖等多种鳞翅目害虫具有广谱杀虫活性.[结论]Bt-8菌株较原生产菌株Bt2671的生物效价高,产毒素蛋白能力较强,杀虫谱较广,具有开发高含量Bt制剂的潜力.     

苏云金杆菌制剂生物测定饲料防腐剂的选择

采用不同防腐剂处理苏云金杆菌制剂及进行毒力生物测定,结果表明,７＾＃（１００ｍＬ中含０．０５ｍＬ福尔马林和０．１５ｇ尼泊金）防腐剂处理苏云金杆菌制剂０－９６ｈ,抑制邪包萌发和菌体活性的效果最佳,其次为２＾＃（１００ｍＬ中含０．１５ｇ尼泊金）,８＾＃（１００ｍＬ中含０．１５ｇ尼泊金和０．０５ｇ土霉素）;毒力生物测定了７＾＃防腐剂最稳定,ＬＣ５０最小,灵敏度最高。     

苏云金杆菌营养期杀虫蛋白基因vip3A的检测与杀虫活性测定

为获取高活性的野生Bt菌株,对从土壤中分离的99株Bt菌株进行了营养期杀虫蛋白的分子鉴定和生物活性测定。根据已知的vip3 A基因序列设计1对特异性引物,进行PCR鉴定,55株扩增得到1.2 kb的目的片段。对31株阳性菌株的营养期杀虫蛋白活性进行了初步测定,结果显示,Bt LS1和LS8菌株毒力最高,2菌株对2龄甜菜夜蛾的体重抑制率分别为91.14%和93.59%。选取Bt LS1和LS8菌株进行胞内外营养期蛋白杀虫活性测定,发现Bt LS1和LS8菌株对初孵甜菜夜蛾体重抑制率分别为45.1%和43.2%,对初孵棉铃虫的校正死亡率分别为(22.1±1.4)%和(55.3±3.7)%,对2龄棉铃虫的体重抑制率分别为(78.7±6.6)%和(50.4±2.4)%。     

苏云金芽孢杆菌LY30菌株对棉铃虫毒性的研究

[目的]研究苏云金芽孢杆菌LY30菌株对棉铃虫的毒性作用。[方法]初步比较LY30和HD-1菌株的形态特征、生理生化特性,并采用生物测定的方法,比较它们对棉铃虫初孵、二龄、三龄幼虫的毒效差异。[结果]LY30属于H3a3b3c血清型、kurstaki亚种,主要由135、65kD2种蛋白成分组成,在菌株生长形态、发酵培养特征、生理生化特性方面与生产菌株HD-1差别不大。LY30菌株发酵液对棉铃虫初孵、二龄、三龄幼虫的LC50分别为0.32、0.62、2.58μl/ml。[结论]LY30菌株对棉铃虫三龄以下的幼虫具有高毒力。     

烟草甲虫高毒力苏云金杆菌的分离与筛选

对云南7个优质主产烟区收集的450份烤后烟样,运用4%NaCl培养基选择分离法,分离出苏云金芽孢杆菌475株。其中对含毒蛋白基因cryⅠ及cryⅤ的18个Bt菌株用2龄烟草甲虫进行生物毒力测定,试验9 d后,9个Bt菌株生物毒力测定校正死亡率均超过80%;试验12 d后,5个Bt菌株生物毒力测定校正死亡率均超过95%。同时对分离出的Bt菌进行PCR毒素蛋白基因鉴定,含cryⅠ毒素蛋白基因的Bt菌有7株,出菌率为1.47%;含cryⅤ毒素蛋白基因的Bt菌11株,出菌率为2.32%;没有含cryⅢ毒素蛋白基因的Bt菌。因此,为进一步用苏云金芽孢杆菌防治烟叶仓贮害虫提供了科学依据。     

对粘虫高毒力Bt菌株的筛选

以粘虫的初孵幼虫为供试昆虫,对东北农业大学植物保护系昆虫教研室从哈尔滨地区病死的昆虫体内分离、保存的苏云金芽孢杆茵(Bacillus thuringiensis,以下简称Bt)74个菌株进行了筛选。经初筛、复筛,从中筛选出对粘虫初孵幼虫高素力Bt菌株5株,它们的菌株号分别为31,42,72,78,87号,当菌液浓度为1.60×10 8芽孢/mL时,粘虫初孵幼虫校正死亡率分别为80％～95％,它们的致死中浓度Lc50分别为3.56×10 6芽孢/mL、4.60×10 5芽孢/mL、4.47×10 6芽孢/mL、5.49×10 6芽孢/mL、2.43×10 6芽孢/mL。