茶树内生真菌的分离

从茶树的根、茎、叶中分离得到36株内生真菌,经显微形态特征观察鉴定为14个属,其中根部36株涉及11个属,茎部32株涉及9个属,叶部26株涉及6个属.结果表明,荼树的不同部位内生真菌的数量、分布和种群存在差异.     

茶树内生真菌的分离及广谱抑菌菌株的筛选鉴定

为应用茶树内生真菌资源防治植物病害提供参考,对桂香18号茶树的根、茎、叶进行内生真菌分离纯化,对分离的内生真菌进行7种植物病原菌的抑菌活性测定,根据测定结果筛选出广谱抗性菌株应用于生产。结果表明:从茶树的根、茎、叶中共分离出24株内生真菌,其中,从茎中分离的编号为J-7的内生真菌抑菌效果较好且广谱性较强,其对芒果蒂腐病、香蕉枯萎病、芒果炭疽病、苹果轮纹病、火龙果黑斑病、番茄早疫病的抑制率分别为70.14%、75.76%、75.86%、80.16%、85.59%、93.18%,结合形态学鉴定和分子生物学鉴定,该菌株属于镰刀菌属(Fusarium.sp)。     

茶树内生真菌的分离条件

从茶树里分离出内生真菌,对分离条件进行初步的研究,确定了3%的次氯酸钠作为其主要的表面消毒剂,成熟叶片表面消毒的最佳时间为5 min;采用PDA为一般培养的最适培养基.对所获得的菌株进行纯化,根据描述的菌种特征,索引分析相关文献,鉴别出优势内生真菌分别属于球座菌属(Guignnatdia sp.)、拟盘多毛孢属(Pes...     

茶树内生真菌的种类及分布

对豫南地区茶树内生真菌的种类及分布进行了初步研究。结果表明,该区茶树内生真菌种类丰富,有7科15属18种,这些真菌由子囊菌与半知菌构成,未发现担子菌与接合菌种类。在这些真菌中,Colletotrichum,Pestalotiopsis sp.1,Phomopsis sp.,Macrophoma sp.1等4种真菌分布普遍,且分离率高,为茶树优势内生真菌。研究还表明,不同茶园茶树内生真菌的群落结构不同,这与茶园的生态环境密切相关;不同的茶树器官,其内生真菌的种类也不同,叶片内生真菌种类最多,未发现种子有内生真菌存在;茶树同一器官不同组织的内生真菌种类不同。     

单丛茶树内生拮抗真菌的筛选与鉴定

采用双层平板法和平板对峙法分别筛选对试验细菌指示菌和植物病原菌具有抑菌效果的内生拮抗真菌,并通过形态特征观察和18SrDNA序列测定对拮抗真菌进行鉴定。结果表明:从单丛茶树中筛选出F15GEN、F15YE和LB35JING这3株内生拮抗真菌,其中F15GEN对金黄色葡萄球菌抑菌圈直径为13.36mm,F15YE对枯草芽孢杆菌的抑菌圈直径为14.92mm,LB35JING和F15GEN对立枯丝核病原菌和梨腐烂病原菌的生长有抑制作用,F15YE对核桃叶枯病原菌的生长有抑制作用,LB35JING对茄腐镰刀病原菌的生长有抑制作用。经形态学和18SrDNA序列鉴定:F15GEN为斜卧青霉Penicillium decumbens,F15YE和LB35JING均属于青霉属Penicilliumsp.。     

铝对茶树根系生理的影响

以茶为研究材料,用水培法设置4个铝浓度处理,研究不同浓度的铝处理对茶树根系生理的影响。对根系活力,质膜透性,丙二醛(MDA)含量和过氧化物酶活性的研究表明,10mg·L-1和50mg·L-1的铝浓度处理对茶树根系生理具有较好的促进作用,品种之间根系活性也存在差异。     

柑橘内生真菌的分离与鉴定

自2002—2004年,对广东梅州、重庆北碚、湖南石门的不同种类的柑橘（柑、橙、柚）进行了12次定点取样分离,共分离到柑橘内生真菌5642株,其中有5136株已鉴定,分别属于24个属,在这24个属中,出现频率在1％以上的只有Colletotrichum spp.,Fusarium spp.,Alternaria spp.,Penicillium spp..柑橘内生真菌的静息部位依种类而异,Colletrichum spp．主要分布在柑橘的叶片、枝条、果皮内;Fusarium spp．则主要分布在根中。     

对茶树炭疽病菌具拮抗作用的茶树内生细菌的筛选

从黄观音、茗科1号、福鼎大毫茶、福鼎大白茶、福安大白茶5个供试品种中分离到茶树内生细菌共79株,并利用平板对峙法筛选出对茶炭疽病菌具有较强拮抗作用的茶树内生细菌5株,测定结果表明其对茶炭疽病平均抑制率达到60.09%.利用普通光学显微镜和扫描电镜观察,发现目标菌株均可有效抑制茶炭疽病菌菌丝的生长.     

老瓜头耐盐内生真菌抗真菌活性筛选研究

[目的]对荒漠植物老瓜头(Cynanchum komarovii Al.Iljinski)中以稻瘟霉模型初筛得到的耐盐内生真菌进行抗真菌活性复筛。[方法]采用微量液基稀释法,以白假丝酵母菌、近平滑假丝酵母菌、光滑假丝酵母菌、新生隐球菌、石膏状小孢子菌、红色毛癣菌、烟曲霉菌等8株常见病原真菌为活性筛选菌株,进行抗真菌活性复筛,检测供试品的最低抑菌浓度(MIC)。[结果]菌株5%-11对新生隐球菌有一定的抑制活性(MIC=32μg/ml),其他菌株对8株常见病原菌的活性较弱(MIC64μg/ml)。[结论]复筛得到一株对新生隐球菌有抑制活性的耐盐内生真菌。     

茶树内生球座菌的鉴定及遗传多样性分析

以分离自茶树和山茶等植物的25个内生球座菌分离物为材料,采用形态学、18S rDNA序列分析和ITS1-5.8S-ITS2序列分析相结合的方法,对这些球座菌分离物进行鉴定;并应用简单序列重复区间扩增多态性(inter-simple sequence repeat polymorphism, ISSR)对这些菌株的遗传多样性进行分析.结果表明:所获得的25个球座菌分离物虽然在PDA培养基上的菌落形态和生长速度存在较明显的差异,但形态学特征、18S rDNA序列和ITS1-5.8S-ITS2序列分析表明这些菌株均属于芒果球座菌(Guignardia mangiferae).通过ISSR分析,从35个随机引物中筛选出10个表现多态性的引物,扩增后共获得88个ISSR标记,其中多态性标记76个,占86.3%.以相异距离0.29为标准,可以将此25个菌株划分为3个遗传聚类群,在PDA上形态相似、生长速度相近的菌株聚为一群;ISSR分析结果还显示芒果球座菌在山茶中具有更为丰富的遗传多样性.     

米槁根部内生促生真菌筛选及其促生特性研究

【目的】筛选米槁(Cinnamomum migao)根部内生促生真菌菌株,探究其对米槁幼苗生长生理的影响。【方法】从贵州省黔南布依族苗族自治州的祥乐村、坝碰村和平艾村采集米槁鲜根,分离纯化得到内生真菌,利用透明圈法对所得菌株进行促生作用研究,将所得菌株接种至蒙金娜无机磷固体培养基、解钾固体培养基及King液体培养基进行促生能力测定,筛选促生能力强的菌株;再将筛选所得菌株分别回接至米槁幼苗,以接种等量空白培养基为对照,培养180 d后测定幼苗的生长生理指标。【结果】从米槁根部分离纯化得到41属177株内生真菌,利用透明圈法筛选得到16株具透明圈的真菌;促生能力测定结果表明,球毛壳菌（Chaetomium globosum）、哈茨木霉（Trichoderma harzianum）、深绿木霉（Trichoderma atroviride）及深色有隔内生真菌（Acrocalymma vagum）4株菌株具有较高促生潜力。接种试验结果表明,球毛壳菌能显著促进米槁幼苗对钾的吸收,哈茨木霉能显著促进过氧化氢酶(CAT)活性及幼苗对磷的吸收,深绿木霉能显著促进米槁幼苗苗高及地下部分的生长,深色有隔内生真菌能显著促进幼苗SOD活性。4种促生菌对米槁幼苗的促生作用不同,其中促生菌的产IAA能力与米槁幼苗的生长显著相关,溶磷、解钾能力与PPO活性呈显著负相关（P<0.05）。【结论】球毛壳菌、哈茨木霉、深绿木霉及深色有隔内生真菌对米槁幼苗生长均有促进作用,但不同菌种对米槁幼苗生长发育的作用机理不同。     

玉米内生真菌的分离与鉴定

对不同品种的玉米种子及不同地区、不同部位的玉米内生真菌进行分离和鉴定。结果显示,8个不同品种的玉米种子,内生真菌检出率为25%,不同玉米品种的种子内所含的内生真菌种类和数目都不同,最高的检出率为40%,最低的检出率为10%。从玉米种子中分离得到的92个菌株,经形态学鉴定,分别属于14个属,出现频率最高的是木霉属,为34.78%。从不同地区的玉米组织中一共分离得到内生真菌168株,其中10株未产孢的没有鉴定,其他菌株经形态学鉴定分别属于26个属,以青霉属、曲霉属、头孢霉属为主,占内生真菌分离物总数的41.07%。对形态学鉴定为白僵菌属的10个菌株进行分子鉴定,均确定为球孢白僵菌(Beauveria bassiana)。此外,球孢白僵菌作为玉米的内生真菌,在国内还是首次分离得到。     

绣线菊内生真菌的分离及对植物病原菌的抑制作用

采用组织分离法,以PDA培养基为分离培养基,从绣线菊的根、茎和叶中分离获得39株内生真菌。平板对峙结果表明, 21株活性菌株对6种植物病原菌（辣椒疫霉病原菌、番茄枯萎病原菌、苹果腐烂病原菌、苹果炭疽病原菌、葡萄灰霉病原菌、小麦赤霉病原菌）有不同程度的抑制作用,其中菌株XXT10对苹果腐烂病原菌、苹果炭疽病原菌、番茄枯萎病原菌、小麦赤霉病原菌的抑制率分别达到73.2%、72.5%、39.5%和42.7%。通过测得的ITS rDNA 序列与GenBank数据库中已知序列比对后该菌为链格孢属菌。生物学特性试验表明,该菌株在28～32℃时,选择PDA培养基,分别以乳糖和蛋白胨作为碳、氮源,酸碱度中性的条件下,菌落的生长状况最佳。     

茶树RNA的提纯与鉴定

研究了一种可有效排除茶树叶片细胞所富含的茶多酚、茶多糖等杂质污染的茶树总RNA提取方法.即在Trizol法的基础上,于提取的初始阶段,重点防止褐化效应,用水不溶性聚乙烯吡咯烷酮(PVP)和β-巯基乙醇(β-Me)排除茶多酚干扰,同时用低含量乙醇去除茶多糖;在最后阶段,55-60℃热水浴10min,低温离心进一步去除茶多糖的干扰.利用这一方法提取的茶树总RNA,经琼脂糖电泳鉴定,可见清晰的18s和28sRNA的2条带型,证明RNA完整,无弥散或降解.     

一株毛竹根部内生细菌SHEN20121的鉴定 及其对植物病原真菌的抑制作用

在分离鉴定毛竹(Phyllostachys edulis)根部相关内生菌的过程中,筛选得到具有生物活性的菌株SHEN20121。通过对其16S rDNA 序列的分析,结果显示其与类芽孢杆菌属中97个细菌的序列相似性为97%～99%;系统学分析显示该菌株与多粘类芽孢杆菌聚在一个分支上,bp支持率为 100,因此菌株SHEN20121被鉴定为多粘类芽孢杆菌（Paenibacillus polymyxa）。通过平板对峙实验证明了菌株SHEN20121对多种植物病原真菌：尖孢镰孢(Fusaricum oxysporum),互隔链格孢(Alternaria alternata),立枯丝核菌(Rhizoctonia solani),灰葡萄孢(Botrvtis cinerea),小孢拟盘多毛孢(Pestalotiopsis microspora),柑橘青霉病菌(Penicillium italicum)均具有抑制作用,其中对灰葡萄孢,小孢拟盘多毛孢和柑橘青霉病菌的抑菌效果明显,尤其是首次发现对拟盘多毛孢属病原菌的抑制作用。作者认为该菌在生物农药方面具有潜在的应用价值,并可能将在植物病害的生物防治方面发挥重要作用。     

Germplasm and breeding research of tea plant based on DNA marker approaches

Tea is the most popular non-alcoholic and healthy beverage worldwide. Tea production contributes greatly to the economy and the job opportunities for many countries in Asia and Africa. Meanwhile, the germplasm of tea, with a huge potential for the future of the whole tea industry, is presently one of the most valuable and fundamental materials for tea breeding and tea biotechnology. DNA molecular markers have been proven to be robust and valuable approaches in the studies of genetic diversity and variation, molecular identification, molecular phylogenetics, genetic stability and integrity of tea germplasm, and the genetic linkage map for breeding of tea. In this paper, a brief prospect on the molecular marker studies of tea has been summarized. The purpose is to provide an effective way for undertaking amassive tea germplasmappraisal and evaluation, to develop new applicable and cheap DNA markers, to establish a high density genetic linkage map and analyze the agronomically important QTLs, and finally, to facilitate the marker assisted early selection and shorten breeding procedures in tea. These authors contributed equally to this work.     

茶皂素对12种植物病原菌的抑菌活性

采用菌丝体生长速率抑制法测定了茶皂素对稻瘟病菌Pyricularia grisea、水稻纹枯病菌Rhizoctonia solani、番茄小核病菌Sclerotinia sclerotiorum、柑橘青霉病菌Penicillium italicum、黄瓜炭疽病菌Glomerella lagenaria、西瓜枯萎病菌Fusa rium oxysporum、芒果炭疽病菌Glomerella ciugulata、香蕉炭疽病菌Colletotrichum musae、黄瓜疫霉病菌Phytophthora parasitica、香蕉枯萎病菌Fusarium oxysporum、玉米小斑病菌Bipolaris maydis、荔枝霜疫霉病菌Peronoph ythora litchi等12种植物病原菌的抑菌活性.结果表明:以茶皂素质量浓度1 000 μg/mL处理后,对稻瘟病菌和柑橘青霉病菌的抑菌率均为100.00％,对黄瓜炭疽病菌、番茄小核病菌、玉米小斑病菌的抑菌率分别为89.12％、87.27％和83.13％;茶皂素质量浓度降至100 μg/mL处理后,对稻瘟病菌的抑制率仍为100.00％,表现出良好的生物活性;茶皂素对稻瘟病菌和柑橘青霉病菌的EC50值分别为20.15 μg/mL和11.39 μg/mL,对香蕉枯萎病菌的EC50超过2 000 μg/mL;茶皂素对稻瘟病菌的活性明显优于硫·三环唑,对番茄小核病菌的抑菌活性与速克灵差异不显著.     

人参主要病原菌生防真菌的筛选及鉴定

【目的】筛选对人参主要病原菌具高效、广谱抑菌作用的生防真菌,丰富人参生防菌菌种资源。【方法】采用稀释平板法,从吉林省2处采样地的人参健株根际土壤中分离真菌;采用平板对峙培养法,通过初筛和复筛,筛选对人参链格孢菌(Alternaria panax)、立枯丝核菌(Rhizoctonia solani)、腐皮镰孢菌(Fusarium solani)、毁灭柱孢菌(Cylindrocarpon destructans)、恶疫霉菌(Phytophthora cactorum)、人参核盘菌(Sclerotinia schinseng)和灰葡萄孢菌(Botrytis cinerea)具有高效广谱抑菌活性的生防真菌;利用传统形态学和rDNA-ITS分子分析技术对分离到的生防真菌进行鉴定。【结果】从人参健株根际土壤中共分离得到400株真菌,其中有15株生防真菌对人参7种主要病原菌具有广谱抑菌作用,特别是对立枯丝核菌有强烈的抑制作用(抑菌率均大于50%),且FSR-106的抑菌作用最强(抑菌率87.41%,下同);FSR-121对人参链格孢菌的抑菌作用最强(60.00%);FSR-74对腐皮镰孢菌的抑菌率高达67.48%;FSR-46对毁灭柱孢菌和灰葡萄孢菌的抑菌率最大(66.67%和68.97%);FSR-97对恶疫霉菌及人参核盘菌的抑制作用最强(73.33%和66.67%)。通过形态学和rDNA-ITS序列分析鉴定发现,15株生防真菌中有8株木霉属(Trichoderma)、3株青霉属(Penicillium)、1株曲霉属(Aspergillus)、1株附球菌属(Epicoccum)、1株毛壳菌属(Chaetomium)和1株轮层炭壳属(Daldinia),其中FSR-38为黑附球菌(Epicoccum nigrum),FSR-10、FSR-43和FSR-106为深绿木霉(T.atroviride),FSR-46为长枝木霉(T.longibrachiatum),FSR-55为钩状木霉(T.hamatum),FSR-72为桔绿木霉(T.citrinoviride),FSR-74为球毛壳菌(Chaetomium globosum),FSR-97为多孢木霉(Trichoderma polysporum),FSR-91为蔡氏轮层炭壳菌(Daldinia childiae),FSR-25、FSR-67和FSR-121为青霉属(Penicilliumsp.)。【结论】从人参健株根际土壤中可快速有效地筛选获得大量广谱性生防真菌;本研究所得的15株生防真菌对7种人参主要病害防治具有较高的潜在应用价值。     

危害陕西茶区茶树的小绿叶蝉种类订正及对我国茶树小绿叶蝉的再认识

【目的】通过对危害陕西茶区茶树的小绿叶蝉进行鉴定,明确陕西茶区该类害虫的学名和特征,并对危害我国茶树的小绿叶蝉种类进行了探讨。【方法】运用网捕法采集小绿叶蝉成虫,用显微照相机(CCD)拍摄成虫照片,在解剖镜下观察其一般形态和雄性外生殖器特征,并对小绿叶蝉种类进行鉴定。【结果】采自陕西茶区茶园的小绿叶蝉的外部形态和雄性外生殖器特征与小贯小绿叶蝉Empoasca(Matsumurasca)onukii相同,而与该地已有报道的小绿叶蝉的特征不同。【结论】危害陕西茶区茶树的小绿叶蝉应为小贯小绿叶蝉(Empoasca(Matsumurasca)onukii),我国茶树小绿叶蝉的种名有待进一步明确。