山羊抑制素-α第1外显子的PCR-SSCP分析

采用PCR-SSCP技术检测了抑制素α(inhibin-α,INHA)基因第1外显子在高繁殖力山羊品种(黄淮山羊和长江三角洲白山羊)以及低繁殖力品种(波尔山羊)中的单核苷酸多态性,并研究了该基因对黄淮山羊产羔数的影响.设计4对引物扩增山羊INHA基因外显子1序列,只有引物1在3个山羊品种中检测到多态性,出现了3种基因型(AA、AB、BB),测序结果表明,BB型和AA型相比在INHA基因第1外显子1 006 bp处都发生了碱基突变(C→A),导致脯氨酸改变为苏氨酸.黄淮山羊突变纯合型(BB)平均产羔数比野生型(AA)少0.65只(P＜0.05).研究结果初步表明:INHA基因可能是影响黄淮山羊繁殖力的一个主效基因或是与之存在紧密遗传连锁的一个分子标记.     

山羊肌肉生长抑制素(MSTN)基因HphI酶切多态性分析

采用限制性内切核酸酶Hph对山羊肌肉生长抑制素(MSTN)基因的379bp扩增产物进行了PCR-RFLP多态性分析,检测到3种基因型,其酶切位点分别由2种共显性基因控制;对该片段的纯合型分别克隆、测序发现,BB型在第1661位由T→C。上述结果为首次试验证实山羊MSTN内含子2(379bp)区域存在多态性。     

山羊肌肉生长抑制素（MSTN）基因HphⅠ酶切多态性分析

采用限制性内切核酸酶HphⅠ对山羊肌肉生长抑制素（MSTN）基因的379bp扩增产物进行了PCR—RFLP多态性分析，检测到3种基因型，其酶切位点分别由2种共显性基因控制；对该片段的纯舍型分别克隆、测序发现，BB型在第1661位由T→C。上述结果为首次试验证实山羊MSTN内含子2（379bp）区域存在多态性。     

TGF-β1基因多态性及其与2个山羊品种产羔数的相关分析

为了研究波尔山羊和陕南白山羊转化生长因子β1 (TGF-β1)基因遗传多态性及其与产羔数的相关性,根据绵羊TGF-β1基因序列设计3对引物,采用PCR-SSCP技术和DNA测序技术检测山羊TGF-β1基因外显子1和内含子2的多态性,同时用最小二乘法探讨了其多态性与产羔数的关系.结果显示,在波尔山羊和陕南白山羊中,仅第2内含子(P2)存在多态位点,分别定义为MM、LM和LL基因型.MM型与LL型相比在内含子2的790 bp处碱基发生G→C的突变,多态位点均以L为优势等位基因,基因频率分别为0.540和0.659.在波尔山羊的3～4胎和平均产羔数中,MM型个体的产羔数显著高于LM和LL型个体(P＜0.05);LM型个体的第2胎产羔数显著高于LL型个体(P＜0.05).在陕南白山羊的2～4胎和平均产羔数中,MM型个体显著高于LM和LL型个体(P＜0.05).表明TGF-β1基因多态位点与产羔数显著相关,可用于山羊分子遗传育种的候选基因.     

TGF-β1基因多态性及其与两个山羊品种产羔数的相关分析

为研究波尔山羊和陕南白山羊转化生长因子β1(TGF-β1)基因遗传多态性及其与产羔数的相关性,根据绵羊TGF-β1基因序列设计3对引物,采用PCR-SSCP技术和DNA测序技术检测山羊TGF-β1基因外显子1和内含子2的多态性,同时用最小二乘法研究了其多态性与产羔数的关系.结果表明,在波尔山羊和陕南白山羊中,仅第2内含子(P2)存在多态位点,分别定义为MM、LM和LL基因型.MM型与LL型相比在内含子2的790bp处碱基发生G→C的突变.多态位点均以L为优势等位基因,基因频率分别为0.540和0.659,在波尔山羊的3～4胎和平均产羔数中,MM型个体的产羔数显著高于LM和LL型个体(P＜0.05);LM型个体的第2胎产羔数显著高于LL型个体(P＜0.05);在陕南白山羊的2～4胎和平均产羔数中,MM型个体显著高于LM和LL型个体(P＜0.05),TGF-β1基因多态位点与产羔数显著相关,可以用于山羊分子遗传育种的候选基因.     

民猪FSHβ-亚基基因的多态性分析

采用PCR-SSCP方法,对108头民猪的FSHβ-亚基基因的2个基因座位进行了研究。结果表明:FSHβ-亚基基因的这2个基因座位在民猪内都存在AA、AB、BB3种基因型,A、B基因频率之间差异显著。本实验进一步证明了FSHβ-亚基基因在民猪内存在着丰富的多态性。     

TGF-β1外显子2的单核苷酸多态性及其与两个山羊品种产羔数的相关分析

为了研究波尔山羊(Boar goat,BG)和陕南白山羊(Shaannan goat,SG)转化生长因子β1 (TGF-β1)基因遗传多态性及其与产羔数的相关性,根据绵羊TGF-β1基因序列设计3对引物,采用PCR-SSCP技术和DNA测序技术检测山羊TGF-β1基因外显子2和内含子3的多态性,同时用最小二乘法研究了其多态性与产羔数的关系.结果表明,在波尔山羊和陕南白山羊中,仅第2外显子148 bp位点碱基发生A→G突变,导致苏氨酸(Thr)变为丙氨酸(Ala);多态位点均以A为优势等位基因,基因频率分别为0.530和0.648.在波尔山羊的1～3胎的平均产羔数中,AB型个体的产羔数显著高于BB和AA型个体(P＜0.05);在第4胎的平均产羔数中,AB型个体的产羔数显著高于BB(P＜0.05),而极显著高于AA型个体(P＜0.01),BB型个体的产羔数显著高于AA(P＜0.05).在陕南白山羊的2～4胎的平均产羔数中,AB型个体显著高于BB和AA型个体(P＜0.05);在第1胎中,AB型个体显著高于AA型个体(P＜0.05).TGF-β1基因多态位点与产羔数显著相关,可以用于山羊分子遗传育种的候选基因.     

西农萨能奶山羊INHA基因启动子区多态性与产羔数和产奶量的相关分析

采用PCR-SSCP技术分析了INHA基因的启动子区2个基因座位在西农萨能奶山羊群体中的遗传多态性,结果在P1引物所扩增的目的片段发现遗传多态,有2种等位基因A和B,有3种基因型AA型、AB型、BB型;在P2引物所扩增的目的片段未发现遗传多态.对多态片段的测序分析表明:AA型与BB型相比在DNA序列的第506 bp处插入了一个碱基G,在第446 bp处碱基C→T.AB、BB基因型个体的平均产羔数显著高于AA型个体(P<0.05);AB、BB基因型的个体各胎次产奶量均比AA型高,其中在第2、3胎产奶量和前4胎平均产奶量都达到显著水平(P<0.05),AB基因型的前4胎平均产奶量和AA型差异极显著(P<0.01).结果表明INHA基因对奶山羊产羔数和产奶量都有显著影响,因此认为INHA基因的P1位点可作为奶山羊的有效分子标记.     

新疆肉用绵羊颗粒细胞抑制素βA基因RNAi载体的构建及其干扰效率验证

抑制素βA基因(inhibin-βA,INHβA)的表达与绵羊(Ovis aries)的产羔数有一定关系。为了观察INHβA对绵羊发情性状的影响以及在目的基因沉默后,引起的发情性状相关激素变化的情况,本研究利用RNAi技术构建载体干扰INHβA的表达。根据GenBank上绵羊INHβA(GenBank:NW_004080167.1)mRNA的序列设计干扰片段,通过酶切和测序验证,成功构建了4个INHβA基因RNAi质粒载体PLLU2G-shINHβA-1(I-1)、PLLU2G-shINHβA-2(I-2)、PLLU2G-shINHβA-3(I-3)、PLLU2G-shINHβA-4(I-4)和1个空载体(赛亚公司的PLLU2G)阴性对照;在成功分离卵巢颗粒细胞并建立培养体系后,利用Lip2000介导干扰载体转染细胞,通过荧光定量RT-PCR检测干扰前后INHβA的表达量。结果显示,4个干扰载体的干扰效率依次为34%,58%,39%,19%,其中I-2对INHβA表达的沉默效果最好。通过卵巢注射干扰载体I-2,检测干扰后绵羊血清INHβA、卵泡刺激素(FSH)、黄体生成素(LH)和雌二酮(E2)的含量。结果显示,注射干扰载体后INHβA和FSH分别呈现明显的下降和上升波峰,而血清中LH和E2水平没有发生明显变化。     

卵泡刺激素β亚基基因多态性与动物繁殖性能的关系

卵泡刺激素（FSH）是调控动物繁殖活动的重要垂体激素之一,大量研究结果表明,FSHβ亚基基因多态性与动物繁殖性能显著相关,主要集中在与猪繁殖性状的分子相关的分子标记研究方面,研究结果发现,FSHβ亚基基因对猪产仔数具有显著影响。因此,研究FSHβ亚基基因功能区的突变对其蛋白功能及对哺乳动物繁殖性能的影响,从而提高动物的生产水平,具有重要的理论意义和实践意义。     

牛肌肉生长抑制素基因单核苷酸多态性分析

应用PCR-SSCP分析方法,对94头肉牛(公牛45头:西门塔尔34头,夏洛来11头;母牛49头:西门塔尔24头,夏洛来25头)的肌肉生长抑制素(MSTN)3个外显子进行了多态性分析.结果显示,第1外显子存在2种基因型,分别为AA型和AB型.经测序发现,第1外显子4 bp处存在C→G的碱基突变,导致编码的氨基酸由谷氨酰胺(Gln)→谷氨酸(Glu).统计结果表明,等位基因B的含量低,而且只在西门塔尔品种内含0.026 6.利用SPSS软件作最小二乘分析,结果表明,B等位基因与西门塔尔牛的成年体质量和犊牛出生体质量呈显著正相关.     

促黄体素β基因多态性及其与济宁青山羊产羔数的关系

为了解促黄体素β基因多态性与济宁青山羊产羔数的关系,采用PCR-SSCP技术检测促黄体素v亚基(Luteinizing hormone beta-subunit,LHβ)基因5'调控区和3个外显子在高繁殖力(济宁青山羊)、中等繁殖力(波尔山羊)和低繁殖力山羊品种(辽宁绒山羊和安哥拉山羊)中的单核苷酸多态性,同时研究该基因对济宁青山羊高繁殖力的影响.结果表明:山羊与绵羊的LHB基因核苷酸序列相似性为98%.6对引物中,仅引物P1和P5扩增片段存在多态性.对于P1扩增片段,在4个山羊品种中均检测到AA、AB和BB 3种基因型;测序分析发现BB与AA基因型相比在5'调控区存在2处突变202C→A和210C→T;济宁青山羊3种基因型之间产羔数差异均不显著(P>0.05).对于P5扩增片段,在济宁青山羊中检测到CC、CD和DD 3种基因型,辽宁绒山羊中检测到CC和CD2种基因型,波尔山羊和安哥拉山羊中都只检测到CC基因型;测序分析发现DD与CC基因型相比在外显子2存在单碱基突变1124C→T;济宁青山羊CC、CD和DD基因型频率分别为0.38、0.44和0.18;DD和CD基因型济宁青山羊平均产羔数分别比CC基因型的多0.99(P<0.01)和0.87只(P<0.01).济宁青山羊在P1、P5两个座位上都处于哈迪-温伯格平衡状态(P1座位:X2=1.66,P=0.437;P5座位:X2=1.22,P=0.544).     

BMPR-IB基因和FSHβ基因多态性及其与小尾寒羊产羔数关联性分析

以骨形态发生蛋白受体IB(BMPR-IB)基因和促卵泡素β(FSHβ)亚基基因为小尾寒羊、陶滩寒二代、滩羊和无角陶赛特多胎性能候选基因,采用PCR-SSCP技术检测该基因在4个绵羊群体中的单核苷酸多态性,同时研究该基因对小尾寒羊高繁殖力的影响。结果表明:小尾寒羊及其杂种陶滩寒二代在BMPR-IB基因编码序列第746位碱基处发生了Q249R突变,而滩羊和无角陶赛特则没有发生这种突变;FSHβ基因CDS区外显子2在4个绵羊群体中都存在遗传多态性,CC基因型和DD基因型相比在外显子2第147处有1个T→C的单碱基突变,但未引起氨基酸改变。BMPR-IB的基因型和FSHβ的基因型分别在小尾寒羊及其杂种后代与滩羊和无角陶赛特之间分布差异极显著(P0.01)或显著(P0.05)。因此,BMPR-IB基因是影响小尾寒羊及其杂种陶滩寒二代高繁性能的一个主效基因,而FSHβ基因可能是控制小尾寒羊及其杂种陶滩寒二代高繁性能的一个主效基因或与之存在紧密连锁的一个遗传标记,均可用于对绵羊产羔数的辅助选择。     

抑制素主动免疫对山羊繁殖率的影响

抑制素主要是由雌性动物的卵泡颗粒细胞和雄性动物睾丸的支持细胞分泌的一种糖蛋白激素,其主要生理作用是特异性地抑制垂体ＦＳＨ的分泌。近年来,国外学者已在猪、牛、绵羊等家畜上证实了抑制素免疫对家畜生殖功能的重要调节作用以及提高动物繁殖力的可能性。但尚未见到抑制素免疫对山羊生殖活动影响的研究报道。本研究旨在应用纯化的猪抑制素对山羊进行主动免疫,探讨免疫对排卵率和血浆ＦＳＨ水平的影响及作用。１　材料与方法１－１　试验动物及分组选购８只母山羊,年龄２～４岁,平均体重为３５－６ｋｇ。每天由专人观察其发情表现,…     

“新培育高繁母猪”ESR基因、FSHβ基因多态性检测分析

为检测分析“新培育高繁母猪”ESR基因和FSHβ基因的多态性,采用PCR和PCR—SSCP方法,对贵州省畜牧兽医研究所培育的26头“新培育高繁母猪”的ESR、FSHB基因进行检测。结果表明：“新培育高繁母猪”种群中ESR基因没有显示多态性,只存在AB一种基因型。FSHl3基因有AA型和AB型两种,A等位基因占绝对优势,基因频率为0．7885,这与很多中国地方猪种的研究报道相一致。     

抑制素主动免疫后波尔山羊的排卵反应

在不发情季节 ( 6月 ) ,用重组绵羊抑制素α亚单位 (r oIHN α)主动免疫 40只经产波尔山羊 ,每只试验羊的用量为 10 0 μgr oIHN α ,4周后用相同剂量进行强化免疫。每周采取血样 ,用放射免疫法测定血浆中抑制素抗体滴度。试验羊发情后每天配种 1～ 2次至发情结束。每天 1次从发情开始至发情结束后 48h ,用超声波检查卵泡发育和排卵情况。最后 1次配种后 6或 7d用非手术法回收胚胎。免疫 6个月后让试验羊配种、妊娠和产羔。抑制素免疫 1周后抗体滴度开始上升。强化免疫 2周后 ,抗体滴度达到最大值。抑制素抗体滴度与直径大于 4mm的卵泡数 (r=0 70 ,P <0 0 0 1)、排卵数 (r=0 5 5 ,P <0 0 0 1)和获取卵子或胚胎数 (r=0 5 0 ,P <0 0 0 1)存在显著的正相关。而抑制素抗体滴度与排卵率存在明显的负相关 (r =- 0 37,P <0 0 0 1)。抑制素免疫山羊的排卵率为46 %～ 70 %。从 8月至 11月排卵数超过 4枚。 40只母羊抑制素免疫 6个月后 ,第一情期配种 ,有 34( 85 % )只母羊怀孕 ,2 9只正常分娩 ,平均产羔羊 2 2 ( 1～ 4)只。试验结果表明 ,抑制素主动免疫能引起山羊超数排卵。抑制素免疫 6个月后卵巢机能恢复正常 ,母羊仍能正常繁殖。     

边鸡肌肉生长抑制素基因5′调控区的多态性与生长性状的关联分析

本研究采用PCR-SSCP技术检测边鸡肌肉生长抑制素(MSTN)基因5′调控区的单核苷酸多态性,并与边鸡的生长性状进行关联分析。结果表明:在MSTN基因5′调控区检测到4个突变(C1346T、G1375A、A1473G和G1491A)。在6~18周龄时(10周龄除外),ST基因型个体的体重显著或极显著高于SS型(P<0.05或P<0.01)。在14~18周龄时,TT基因型个体的体重显著或极显著的高于SS型(P<0.05或P<0.01)。研究结果提示,MSTN基因可能是影响边鸡生长性状的一个主要候选基因。     

草原红牛肌生成抑制素基因内含子1多态性及部分屠宰性状的相关性分析

以草原红牛为研究对象,采用PCR-SSCP方法检测肌生成抑制素(MSTN)基因内含子1基因的多态性.结果表明:在内含子1发现多态性位点,有AA、AB和BB 3种基因型;测序结果显示在1 452 bp处存在C→T的碱基突变;该位点的多态性对草原红牛的净内率有显著影响(P<0.05),BB型和AB型显著高于AA型(P<0.05),BB型和AB型之间差异不显著(P>0.05);其他屠宰性状在不同基因型间差异不显著(P>0.05).由此可以初步推断MSTN基因可能是影响草原红牛肉质性状的一个主效基因或是一个影响肉质性状的QTL连锁的基因.     

福建黄兔卵泡抑制素βA亚基cDNA的克隆与序列分析

从性成熟的福建黄兔母兔脑垂体中提取总RNA,经RT-PCR扩增目的片段,获得长为1 275 bp的黄兔卵泡抑制素βA亚基cDNA片段.将扩增的片段与pMD18-T载体连接,转化至DH5α感受态细胞中.随机挑选阳性重组子进行鉴定、测序,将测序结果与包括人、大猩猩、奶牛、绵羊、小鼠在内的多种哺乳动物基因序列进行同源性比对分析,相似度在85％以上,同时遗传进化分析结果表明兔形目的INHBA基因与灵长目动物的亲缘性相近.黄兔INHBA基因cDNA序列编码424个氨基酸,整个蛋白包括1段20个氨基酸的信号肽和404个氨基酸的成熟肽,该蛋白还同时存在2个结构域,分别为TGFβ和TGFβ前体肽结构域.     

山羊ESR基因外显子4的克隆和多态性分析

采用PCR-SSCP技术检测雌激素受体(ESR)基因外显子4在黄淮山羊和波尔山羊中的多态性,并对其单核苷酸序列进行克隆测序分析.结果表明:ESR基因外显子4在两品种山羊中均不存在多态性;克隆获得的山羊ESR基因外显子4的片段长度为232 bp,两品种山羊间的同源性98%,提示其在山羊中具保守性.