应用新城疫诊断试剂盒快速诊断非典型鸡新城疫的研究

应用新城疫单抗酶联诊断试剂盒对３群发生疑似新城疫的鸡群进行了快速诊断。采用肛门泄殖腔棉拭取样方法取样，分别取６９．３５和３８份样品，应用双单抗夹心ＥＬＩＳＡ试验检测出新城疫强毒抗原阳性分别为５、３和２份样品，诊断该３群发生非典型鸡新城疫。用病毒分离、鉴定和毒力试验的经典诊断方面验证表明，新城疫单抗酶联诊断非典型新城疫简便、快速、准确。     

应用新城疫单抗酶联试剂盒快速诊断绿孔雀新城疫

应用新城疫单抗酶联试剂对一群发生疑似新城疫的绿孔雀进行快速诊断，采用肛门泄殖腔棉拭取样方法对病孔雀取样，应用双单抗夹心ＥＬＩＳＡ试验检出多数病死孔雀新城疫强毒抗原阳性，诊断该群绿孔雀发生了新城疫，用流行病学调查，临床症状观察，病理剖检，病毒分离，鉴定和毒力试验的经典诊断方法及新城疫疫苗紧急防疫效果观察验证表明，新城疫单抗酶联试剂盒诊断孔雀新城疫简便，快速，准确。     

应用新城疫单抗酶联试剂盒快速诊断绿孔雀新城疫

应用新城疫单抗酶联试剂对一群发生疑似新城疫的绿孔雀群进行快速诊断,采用肛门泄殖腔棉拭取样方法对病孔雀取样,应用双单抗夹心ＥＬＩＳＡ试验检出多数病死孔雀新城疫强毒抗原阳性,诊断该群绿孔雀发生了新城疫。用流行病学调查、临床症状观察、病理剖检、病毒分离、鉴定和毒力试验的经典诊断方法及新城疫疫苗紧急防疫效果观察验证表明,新城疫单抗酶联试剂盒诊断孔雀新城疫简便、快速、准确。     

新城疫单抗酶联试剂盒对鸡群中强毒感染的监测试验

用新城疫（ＮＤ）单抗酶联试剂盒检测从疑有新城疫病毒强毒感染的鸡群中采集泄殖腔棉试样品６８份，检出阳性２０份。随机对其中１５份样品进行病毒分离，结果阳性符合率为１００％（１５／１５）。结果表明，该试剂盒特异性强，灵敏度高，诊断快速，易于基层推广应用。为ＮＤ的确诊和免疫鸡群中ＮＤＶ强毒感染的监测提供了新方法。     

新城疫单抗酶联试剂盒对鸡群中强毒感染的监测试验

用新城疫(ND)单抗酶联试剂盒检测从疑有新城疫病毒强毒感染的鸡群中采集泄殖腔棉拭样品68份,检出阳性20份。随机对其中15份样品进行病毒分离,结果阳性符合率为100％(15/15)。结果表明,该试剂盒特异性强,灵敏度高,诊断快速,易于基层推广应用。为ND的确诊和免疫鸡群中NDV强毒感染的监测提供了新方法。     

水稻白叶枯病菌单克隆抗体酶联试剂盒的研制及其应用

利用全菌包被酶联免疫吸附试验间接法,建立了能准确快速灵敏测定不同类型的水稻白叶枯病菌的单抗酶联试剂盒。应用该试剂盒检测水稻白叶枯病病叶样品101份、病种样品10份及水稻白叶枯病病菌65个菌株,结果均为阳性,且重复性好,该试剂盒使用简便、灵敏度高、特异性强,有实用价值。     

应用聚乙二醇介导的单抗夹心ELISA监测湖南新城疫病毒强毒感染

采用新城疫病毒强毒快速检测法聚乙二醇介导的单抗夹心酶联免疫吸附测定（ELISA）对湖南省新城疫病毒（NDV）强毒感染进行了监测，共检测来自30个新城疫发病群和28个无明显新城疫病症群共58个禽群的泄殖腔棉试样品1719份，并对97份样口进行了病毒分离鉴定。结果表明，NDV强毒感染的禽种多，易与其他疫病混合感染，免疫鸡群在发生形式上呈非典型化趋势，养禽场普遍存在NDV强毒且临诊健康群有一定比例的强毒感染率，这些是目前ND难以控制和净化的主要原因。结果还表明，所采用的ELISA是监测NDV强毒感染并指导免疫的可靠的快速检测方法。     

雏鸵鸟新城疫的快速诊治报告

根据临床症状、病理变化,采用新城疫单抗酶联免疫试剂盒对病死鸵鸟的泄殖腔及喉气管黏膜刮取样品进行快速检验,初步确诊为新城疫（ND）病毒感染。因此,对患病鸵鸟及未发病的鸵鸟分别按治疗量和预防量注射提纯的山羊抗鸡新城疫血清,配合抗生素治疗,使病鸵鸟康复,控制了疫情。通过进一步的病毒分离培养,新城疫标准阳性血清、鸡法氏袭及禽流感标准阳性血清的中和试验确诊为鸵鸟新城疫。     

单抗夹心ELISA检测免疫鸡群新城疫病毒

用SPF鸡胚将送检的免疫鸡群泄殖腔棉拭样品盲传一代，再用新城疫单抗夹心ELISA对F1代尿囊液进行新城疫病毒(NDV)快速检测，同时用世界动物卫生组织(OIE)推荐的NDV分离及鉴定的方法加以验证。通过对3423份样品的检测，检出阳性样品453份，阴性样品2959份，可疑样品11份，两种方法的阳性符合率为99．3％，阴性符合率为99．7％。对全部阳性样品进行病毒分离，经血凝(HA)和血凝抑制(HI)试验证明均含有新城疫病毒(NDV)，再将全部阳性样品分离物进一步作毒力鉴定，结果有强毒力株、中等毒力株及弱毒力株，因此用新城疫单抗夹心ELISA检测免疫鸡群泄殖腔棉拭样品F1代尿囊液新城疫病毒快速、准确率高，呈阳性者不全是NDV强毒力株感染，还有NDV中等毒力株或弱毒力株感染。     

沙门氏菌快速检测试剂盒的研制及其应用

在建立直接ＥＬＩＳＡ方法基础上，首次研制出检测沙门氏菌的单抗快速检测试剂盒。对现场分离菌株进行的双盲考核试验共做２８０个菌株，两种方法的总符合率为９４．６％。以２０％的脱脂乳为冻干保护剂，经冻干后，其效价和物理性状最佳，试剂盒批内和批间重复试验的变异系数小于１０％，试剂盒的稳定性较好。采用本试剂盒检测了３０５９份人的粪样，检测出１６６份阳性样品，比市站多检出７２份阳性样品。在对６１９份肉样、６８８份鱼粉、６００份奶样、６２０份蛋样检测中，比常规国标方法多检出１００株沙门氏菌。因此，以直接ＥＬＩＳＡ为基础构建的快速检测试剂盒在沙门氏菌检验中，具有重要实用价值。     

免疫鸡群新城疫病毒强毒株感染的实验研究

ＳＰＦ试验鸡在８、２５日龄时接受了２次新城疫（ＮＤ）基础免疫，６０日龄时分别以标准新城疫病毒（ＮＤＶ）强毒株、中等毒力和弱毒疫苗株人工感染攻毒。应用单抗ＥＬＩＳＡ试剂盒，对所有试验鸡泄殖腔棉拭样品进行了３０ｄ的连续检测。结果表明：从攻毒后第３ｄ起强毒株试验组检测出多例阳性，检出高峰分别在攻毒后第４～６ｄ和１１～１５ｄ，与鸡群症状表现的时间相一致；中等毒力和弱毒疫苗株对照组均呈检测阴性。本研究证明单抗ＥＬＩＳＡ试剂盒可以检测免疫鸡群中ＮＤＶ强毒感染，为ＮＤ的监测提供了新手段。     

免疫鸡群感染新城疫强毒后群体带毒情况和对生产指标的影响

应用新城疫病毒单抗ＰＥＧ夹心ＥＬＩＳＡ试剂盒对一新城疫强毒感染鸡群连续监测,检测泄殖腔拭子带毒情况和ＨＩ抗体效价,结果在鸡群发病后３０７ｄ仍可以测出强毒。且随着时间的推移和鸡群ＨＩ抗体水平的下降,强毒感染率呈上升趋势,表明免疫鸡群感染新城疫强毒后,强毒可在群内循环传播和长期维持。采用疫苗免疫把强毒感染率控制在一定水平而不致暴发新城疫,则鸡群可以保持较好的生产性能。而当强毒感染率上升较大时,则生产性能下降明显,死淘率也上升。     

口蹄疫病毒3AB试剂盒的检测及比较

以重组口蹄疫病毒非结构蛋白3AB为检测抗原,研制了口蹄疫病毒非结构蛋白ELISA检测试剂盒,该试剂盒可用于判定被检动物是否感染口蹄疫病毒。重组口蹄疫病毒非结构蛋白3AB作为检测抗原包被酶标板反应孔,以辣根过氧化物酶标记的重组蛋白A/G作为第二抗体,建立了抗非结构蛋白抗体检测的方法。结果表明,在1 746份免疫猪血清中,3AB-ELISA对免疫猪血清的特异性为98.68%;在1 077份健康非免疫猪血清中,3AB-ELISA对健康非免疫猪血清的特异性为98.68%;在36份人工感染猪血清中,3AB-ELISA对阳性检出率为100%。而牛的特异性的各项指标和阳性检出率分别为94.04%,97.96%和100%。猪/牛口蹄疫病毒非结构蛋白酶联免疫吸附试验检测试剂盒与国外同类试剂盒比较,阳性检出率高出12.5个百分点。     

福州市鸡群网状内皮增生症病毒血清学调查与初步分析

应用ELISA抗体检测试剂盒,对福州市9个养殖场鸡群进行网状内皮增生症病毒(Reticuloendotheliosis Virus,REV)抗体检测。共采集了鸡血清样品427份。结果表明,被检样品总的阳性率为29.51%(126/427),阳性的鸡场数占鸡场总数的77.78%(7/9),养殖场个体阳性率在0~98.36%之间。经比较不同品种REV抗体阳性率,发现肉鸡的感染率最高(61.18%),蛋鸡次之(15.48%),种鸡最低(6.60%)。不同日龄段不同品种的鸡群REV抗体阳性率呈散在分布。     

布氏杆菌病检测技术的研究进展

综述了检测布氏杆菌病的新老方法。布氏杆菌病(Brucellosis)在全球引起巨大的经济损失,对人危害严重,基因苗即将为其防制提供保障。认为,细菌学检验和凝集试验测将淘汰;沉淀试验和补体结合试验不理想;放射免疫试验不能广泛运用;变态反应主要用于绵羊,也用于山羊的筛检,不作山羊个体的诊断依据。竞争酶联免疫吸附试验尚无诊断标准。间接酶联免疫吸附试验是一种先进、快速、可靠的新方法,但不能区别疫苗抗体与致病株抗体。PCR可检1pg的布氏杆菌DNA,应用细菌DNA检测是最可靠的方法。最近建立的荧光探针分析可在野外快速准确地诊断,可用于家畜和野生动物的检测。     

奶牛流产病因探究及新孢子虫病PCR检测方法的建立

[目的]探究新疆某奶牛场奶牛流产病因.[方法]采集的19份血清样品和4份牛流产胎儿脑组织进行布氏杆菌病凝集实验、弓形虫PCR检测和新孢子虫病ELISA方法检测,参考GenBank登录的犬新孢子虫种Nc-5序列[1],设计引物,建立新孢子虫病的PCR检测方法.[结果]调查结果显示该牛场布氏杆菌病与弓形虫病感染均呈阴性,新孢子虫病感染率为14.3;(2/19).新孢子虫PCR诊断方法的最佳退火温度为57℃,灵敏度为35 pg/μL.用建立后的PCR方法检测流产胎儿,感染率为50.0;(2/4).[结论]新孢子虫病是导致该厂奶牛流产的重要原因之一,为今后新疆地区有效预防和治疗新孢子虫病提供了一定的科学依据.     

牛呼吸道合胞体病毒重组N蛋白间接ELISA方法的建立及应用

 【目的】以纯化的牛呼吸道合胞体病毒(BRSV)HJ株重组N蛋白作为包被抗原,对各项条件进行优化,确定判定标准,建立检测BRSV抗体的间接ELISA方法。【方法】将已构建的重组菌BL21(DE3)进行诱导表达,获得重组N蛋白。利用电洗脱法对表达产物进行纯化,并用Western blot对表达产物进行鉴定。以纯化后的重组N蛋白作为诊断抗原,对ELISA反应条件进行优化,初步建立检测BRSV抗体的间接ELISA诊断方法。【结果】成功表达并纯化了BRSV HJ株重组N蛋白,Western blot检测结果证明表达产物具有良好的反应原性。以重组N蛋白作为诊断抗原,建立了间接ELISA诊断方法。交叉试验结果表明重组N蛋白与牛无浆体病(Anaplasmosis)、牛传染性鼻气管炎(IBRV)和牛副流感(BPIV)阳性血清均不发生交叉反应。与中和试验(SNT)相比较,该方法的特异性、敏感性和符合率分别为85.0%、90.9%和87.7%。采用本试验建立的间接ELISA方法对黑龙江省的牡丹江、佳木斯、鹤岗和大庆4个地区牛场的600份牛血清进行了检测,结果表明,黑龙江省部分地区BRSV的抗体阳性率为27.33%。【结论】本研究建立的间接ELISA方法具有较好的特异性、敏感性和重复性,利用该方法初步证实黑龙江省部分地区存在牛呼吸道合胞体病。这一研究为牛呼吸道合胞体病诊断试剂盒的研制奠定了基础,并为该病的诊断与流行病学调查提供有效的技术手段。