蜡样芽孢杆菌对养殖池水质净化研究

向对虾池塘中泼洒蜡样芽孢杆菌LY-3菌液,观察对虾养殖水质净化情况,池塘水质pH值、溶解氧、NH4+-N、NO2--N含量和对虾成活率进行了测定,结果表明:该菌能够很地的调节改善养殖水体环境,与对照组相比,该菌能使水体pH值稳定在8.0～8.3之间,可显著提高养殖水体溶解氧,对水体NH4+-N有显著的降解作用,使其浓度由1.7 mg/L降至0.35 mg/L。同时对NO2--N也有显著的去除作用,使其浓度由0.64 mg/L降低至0.05 mg/L,降解率达92%,且在整个试验周期内无反弹现象,可见该菌能显著改善养殖池塘水质。     

三株芽孢杆菌对大肠杆菌的体外拮抗作用研究

以3株芽孢杆菌为材料,采用与致病性大肠杆菌同时接种及先后接种的方法,对其与大肠杆菌的生物拮抗作用进行了研究。结果表明:X1、X2、X33株芽孢杆菌与大肠杆菌同时接种培养后对大肠杆菌均有一定的抑菌效果,共培养8h后开始呈现一定的抑制作用,24～48h时作用最明显;先接种X1、X2、X33株芽孢杆菌培养24h后再接种大肠杆菌,对大肠杆菌均呈现明显的抑制作用,12h后开始呈现一定的抑制作用,24h时作用最明显,至48h时也还有一定的抑制作用;X3对沙门氏杆菌没有抑制作用。先接种大肠杆菌培养12h后再接种X1、X2、X33株芽孢杆菌对大肠杆菌也呈现明显的抑制作用,8h后开始呈现一定的抑制作用,12h时作用最明显,至24h时抑制作用基本消失。     

牛奶中蜡样芽孢杆菌的分离和鉴定

蜡样芽孢杆菌是乳制品中容易污染的一种致病菌。为了鉴定市售牛奶中是否含有蜡样芽孢杆菌,该研究通过生化和分子生物学鉴定方法对牛奶中蜡样芽孢杆菌进行了分离和鉴定。结果表明,市售牛乳中分离、鉴定了一株蜡样芽胞杆菌,这表明蜡样芽胞杆菌对牛奶产品具有较大的食品安全风险。     

1株益生蜡样芽孢杆菌发酵培养基优化研究

[目的]通过优化蜡样芽孢杆菌的发酵培养基,提高蜡样芽孢杆菌的生物量。[方法]在初始发酵培养基的基础上,通过单因素试验和正交试验确定蜡样芽孢杆菌发酵培养基的最适碳氮源和碳氮比。[结果]优化后的发酵培养基为:葡萄糖15.00 g/L,可溶性淀粉40.00 g/L,蛋白胨10.00 g/L,玉米浆干粉30.00 g/L,硫酸铵3.00 g/L,磷酸氢二钾5.00 g/L,磷酸二氢钠5.00 g/L,硫酸镁1.25 g/L,硫酸锰0.60 g/L,氯化钙2.00 g/L。优化后蜡样芽孢杆菌在50 L不锈钢发酵罐中的发酵液活菌数达1.6×1010cfu/m L,较优化前提高了1个数量级。[结论]优化后的蜡样芽孢杆菌发酵培养基大大提高了该菌的生物量,为工业化放大生产提供了参考。     

蜡样芽孢杆菌特征性蛋白的分离与纯化

蜡样芽孢杆菌是一种致病性病原菌,能引起胃肠感染和非胃肠感染。本研究从实验室分离的蜡样芽孢杆菌、蜡样芽孢杆菌1.026 0、巨大芽孢杆菌1.015 1、蕈状芽孢杆菌1.085 6和苏云金芽孢杆菌1.101 4这五株菌中提取蛋白,利用SDS-PAGE方法纯化,并测定出蜡样芽孢杆菌有3种分子量约为28.5、26.5和20.0 KDa的特征性蛋白,而苏云金芽孢杆菌、巨大芽孢杆菌和蕈状芽孢杆菌则没有此特征性蛋白。     

蜡样芽孢杆菌启动子片段克隆及转录活性分析

为研究蜡样芽孢杆菌基因的转录调控特征,通过鸟枪法和蓝白斑筛选,获得57个蜡样芽孢杆菌启动子片段,并以β-半乳糖苷酶为报告基因,比较了这些启动子片段在大肠埃希菌中的转录活性。对转录活性较高的4个启动子克隆片断进行测序、序列比对、特征分析,发现这4个克隆序列具有启动子元件、核糖体结合序列特征,其中2个克隆序列在枯草芽孢杆菌也表现出活性,表明兼有蜡样芽孢杆菌、大肠埃希菌、枯草芽孢杆菌RNA聚合酶σ因子序列识别特征。     

溶菌酶快速诱导蜡样芽孢杆菌L型的研究

[目的]研究溶菌酶诱导蜡样芽孢杆菌L型的技术条件。[方法]利用溶菌酶诱导蜡样芽孢杆菌L型,观察其形成、形态、生长及其对渗透压的敏感性等特性。[结果]在培养基中加入2 mg/ml的溶菌酶能够较好地诱导蜡样芽孢杆菌L型的产生,通过连续的培养获得了稳定的L型蜡样芽孢杆菌。L型蜡样芽孢杆菌呈球状,革兰氏染色阴性,对渗透压敏感。[结论]确定了蜡样芽孢杆菌溶菌酶法诱导L型的最佳浓度。     

微囊化蜡样芽孢杆菌的喷雾干燥工艺优化

[目的]提高蜡样芽孢杆菌在压力喷雾干燥过程中的存活率,优化喷雾干燥工艺。[方法]以微囊化的蜡样芽孢杆菌为材料,考察进风温度、进料流量、料液比、喷枪孔径等对喷雾细胞存活数的影响。[结果]当进风温度为140℃,进料流量为1.5 t/h,料液比为1∶5,喷枪孔径为2.5 mm时,蜡样芽孢杆菌的存活率最高,达81%。[结论]该研究确定了蜡样芽孢杆菌的最佳喷雾干燥工艺条件。     

淀粉质食品中蜡样芽孢杆菌的分离鉴定

[目的]分离鉴定淀粉质食品中的蜡样芽孢杆菌(Bacillus cereus).[方法]以淀粉质食品(低温保藏的米饭)为原料,采用传统方法对米饭中蜡样芽孢杆菌进行分离鉴定,使用PCR技术做最终确定.[结果]对低温保藏米饭进行系列稀释后在牛肉膏蛋白胨琼脂培养基平板上进行菌种分离,初步分离出菌株MF-2,表面光滑稍有光泽,呈现低凸起形,边缘呈现锯齿状,菌落形状可形成近似圆形、质地松软、无色素,菌落颜色为乳白色不透明;经革兰氏染色为阳性,镜检为杆状;经芽孢染色为有芽孢杆菌;MF-2号菌能利用葡萄糖、蔗糖和麦芽糖,并产酸,但不能分解D-甘露糖和α-乳糖,初步鉴定菌株MF-2为蜡样芽孢杆菌.由16S rRNA基因序列同源性分析,结合形态观察和生理生化鉴定,最终鉴定该菌株为蜡样芽孢杆菌(Bacillus cereus).[结论]研究可为食品质量安全提供理论和实践依据.     

一株饲用益生蜡样芽孢杆菌的液体发酵研究

[目的]为探明蜡样芽孢杆菌的液体发酵规律。[方法]以玉米粉+豆粕粉+硫酸锰+硫酸镁+磷酸二氢钠+磷酸氢二钠+植物油为发酵培养基,在(30±1)℃、初始pH值7.2、通气量1.5 m3/h、罐压0.04 Mpa、发酵周期54 h条件下,对蜡样芽孢杆菌MYSLY-02进行发酵培养。测定发酵过程中菌体数量及芽孢形成率等的变化。[结果]培养0~6 h时,芽孢杆菌菌体小、数量少,糖度基本不变;培养6~36 h时,菌体数量急剧增多,菌体增大增长,并开始形成芽孢,糖大量消耗;培养36~54 h时,菌体数量基本稳定,菌体基本形成芽孢,糖消耗减慢;培养54 h后,菌体数量减少,部分芽孢开始脱落。反应结束时,细菌浓度达到9.5×109CFU/ml,芽孢形成率达到92%。[结论]确定了蜡样芽孢杆菌液体发酵的最佳条件。     

两株蜡样芽孢杆菌的鉴定及液体培养基筛选

通过对两株待试芽孢杆菌的卵磷脂酶等13个生理生化特征,4种氮源,12种碳源利用及动物毒理试验(小白鼠),鉴定出两株待试芽孢杆菌为蜡样芽孢杆菌 (Bacillus cereus,B.C).通过pH梯度,温度梯度,NaCl浓度梯度等试验,初步断定此三株菌最适生长条件为pH 7～8,温度37 ℃,NaCl 10 g/L;通过对Ⅰ,Ⅱ,Ⅲ,Ⅳ,Ⅴ 5种培养基的液体培养筛选和验证实验,初步断定培养基Ⅲ在保证菌数的前提下,最为廉价,芽孢率也最高,为最适生产用液体发酵培养基;通过动物毒性实验,02、03与09号菌株作为添加剂或药剂(菌数≤109·g-1)均安全无毒.     

蜡样芽孢杆菌NJSZ-13对松材线虫生理生化指标的影响

使用蜡样芽孢杆菌NJSZ-13的菌悬液、发酵液、发酵滤液分别处理松材线虫AMA3虫株6、12、24、36 h,以无菌水和营养肉汤(NB)液体培养基处理作为对照,对处理后松材线虫体内的蛋白质质量浓度、超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化物酶(POD)、过氧化氢酶(CAT)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)、乙酰胆碱酯酶(AchE)活性和丙二醛(MDA)质量摩尔浓度进行检测。结果表明：经蜡样芽孢杆菌NJSZ-13处理后,松材线虫体内可溶性蛋白质质量浓度和POD、CAT、AchE活性在整个处理时间内均低于对照组,且均呈下降趋势;SOD和GSH-Px活性先升高后降低;MDA质量摩尔浓度逐渐上升。其中,菌悬液、发酵液和发酵滤液对松材线虫各种生理生化指标均有影响,其中发酵液的影响更大。通过蜡样芽孢杆菌NJSZ-13处理后线虫的各个生理效应可以推测,蜡样芽孢杆菌NJSZ-13对松材线虫的致死作用是综合性的,其中包括蛋白代谢、保护酶系统和神经系统等方面共同的作用。     

过氧乙酸戊二醛复方消毒剂对蜡样杆菌芽孢杀菌效果评估

使用过氧乙酸戊二醛复方消毒剂及其含量相同的各单一成分(过氧乙酸、戊二醛和过氧化氢)对蜡样杆菌芽孢悬液进行定性灭菌试验和定量杀灭试验,以评价该消毒剂的杀菌效果。结果表明,复方消毒剂、过氧乙酸、过氧化氢最低有效杀灭浓度分别为3.125%、0.125%和0.600%,杀菌最快有效时间分别为5、5、15 min;在分别作用到5、5、15 min时,杀灭对数值均≥5,但0.06%的戊二醛作用60 min时杀灭对数值为4.08,无法有效杀灭蜡样杆菌芽孢。表明蜡样杆菌芽孢在复方消毒剂作用下可被完全杀灭。     

蜡样芽孢杆菌中锰超氧化物歧化酶基因的表达差异性

对蜡样芽孢杆菌(Bacilluscereus)905中2个不同的锰超氧化物歧化酶(MnSOD)基因(sodA1和sodA2)转录水平的差异性进行分析.结果发现:sodA1和 sodA2在细菌的不同生长阶段为组成性表达,sodA1基因启动子的活性比sodA2高3~4倍;超氧化物歧化酶(SOD)的缺失能同时诱导sodA1和sodA2的转录.该研究结果解释了这2个不同的MnSOD在细胞内的酶活性差异,并推测在sodA1和sodA2基因启动子上可能存在与氧自由基代谢相关的调控元件;同时,本研究也成功实现了LacZ在芽孢杆菌上的标记.     

虾源蜡样芽孢杆菌D7的生态安全性评价

为了评价蜡样芽孢杆菌菌株D7的生态安全性,分别测定了蜡样芽孢杆菌D7对氨氮、亚硝酸盐、磷酸盐浓度的影响,以及对小球藻、大型蚤、斑马鱼、凡纳滨对虾和草鱼等水生动植物的安全性。研究结果表明,蜡样芽孢杆菌菌株D7浓度≥1×10⁷ cfu·mL^-1时,水中氨氮及亚硝酸盐含量显著降低(P<0.05)。蜡样芽孢杆菌菌株D7浓度≤1×10⁶ cfu·mL^-1时,对氨氮及亚硝酸盐含量无显著影响。蜡样芽孢杆菌菌株D7浓度在10⁴~10⁸ cfu·mL^-1时,水中磷酸盐含量无显著变化。小球藻含量与菌体浓度呈正相关。处理96 h,对大型蚤、斑马鱼和凡纳滨对虾死亡率均无显著影响。以不同细菌剂量(10⁸~10¹² cfu·mL^-1)灌胃草鱼,处理96 h后,未出现草鱼死亡现象。表明虾源蜡样芽孢杆菌D7生态安全性较好,对水体及养殖动物无明显危害。     

蜡样芽孢杆菌活菌制剂对雏鸡白痢的防治效果

使用芽孢杆菌活菌制剂对雏鸡白痢病进行预防性和治疗性试验。预防后的0－35日龄雏鸡发病率仅为0.20%，成活率达99％，对3－15日龄发病雏鸡治愈率可达84.1%。结果表明，该制剂优于同类药物预防和治疗水平。     

3株蜡样芽孢杆菌生理特性及SOD发酵条件的研究

对3株蜡样芽孢杆菌的培养特征、生理生化实验、喂养实验、动物毒性实验、生长特性及其性质进行了研究,并对其SOD液体发酵条件进行了分析。结果表明,3株蜡样芽孢杆菌均为有益菌;pH为7.5时,3株菌在25～30℃发酵60h后酶活均达到最高;在35～45℃发酵24～36h后酶活最高。通过比较发现,02号菌株的SOD活性在整个培养过程中均比较高,且酶活值比较稳定,是生产微生态制剂的理想菌株。     

鲜姜汁对大肠杆菌及巨大芽孢杆菌的抑制作用研究

将新鲜生姜研磨过滤获得100％鲜姜汁,稀释成75％、50％、25％3个梯度浓度,以无菌水作为对照,以大肠杆菌(Escherichia coli、巨大芽孢杆菌(Bacillus magaterium)为试验茵,采用滤纸贴片法测定抑茵作用,比较不同浓度姜汁的抑茵活性.结果表明,随着姜汁浓度的增大,抑茵作用增强.     

基于实时荧光PCR技术快速检测饲料中的蜡样芽孢杆菌

蜡样芽孢杆菌(Bacillus cereus)在自然界中广泛存在,而且大部分菌株能产生肠毒素和呕吐毒素,是引起养殖动物中毒的常见致病菌。在饲料生产过程中,为对该病原菌进行有效监控,以蜡样芽孢杆菌肠毒素FM基因(entFM)和肠毒素T基因(bceT)保守区域片段为靶序列,利用DNAMAN设计两对特异性引物,建立一种基于实时荧光PCR (real-time PCR)技术的蜡样芽孢杆菌快速检测方法,并对所建立方法的重复性、特异性及灵敏度进行分析。结果表明:所设计的引物可以实现对蜡样芽孢杆菌的快速检测而且具有较高的重复性;对8株蜡样芽孢杆菌和8株非蜡样芽孢杆菌共16株菌株进行特异性检测,8株蜡样芽孢杆菌检测全部为阳性,8株非蜡样芽孢杆菌检测全部为阴性,无漏检和误检现象;对纯培养条件下蜡样芽孢杆菌提取的DNA模板进行10倍梯度稀释并进行灵敏度检测,两种肠毒素基因的检测限均为1.0×10⁴CFU·mL^-1;对人工染菌的饲料样品进行检测,在增菌18～20h后进行实时荧光PCR检测,检测限均可达到10CFU·mL^-1,证明该方法具有良好...     

鲫鱼肠道蜡样芽孢杆菌的分离鉴定及生物学特征

从健康鲫鱼(Carassius auratus)肠道中分离纯化出1株细菌,命名为CS4,通过形态学观察、生理生化特性、16S rDNA测序以及系统发育分析等方法鉴定为蜡样芽孢杆菌(Bacillus cereus),并对其致病性及药物敏感性等生物学特征进行研究。结果表明,菌株CS4具有β溶血性(完全溶血),对健康鲫鱼感染9 d的半数致死量为4.6×10~6 CFU/g。该菌株对复方新诺明、利福平、呋喃唑酮、头孢孟多、阿莫西林等16种抗生素耐药;对红霉素、诺氟沙星、庆大霉素、丁胺卡那、林可霉素等17种抗生素敏感。笔者从健康鲫鱼肠道中分离到致病性较强的蜡样芽孢杆菌,表明该菌是一种重要的条件性致病菌,研究结果对防治由蜡样芽孢杆菌引起的鱼类疾病具有实际意义。