猪囊尾蚴头节蛋白双抗体夹心ELISA检测方法的建立及初步应用

采用抗猪囊尾蚴头节蛋白单克隆抗体包被ELISA板,以兔抗猪囊尾蚴头节蛋白多抗作为捕获抗体,建立了猪囊尾蚴头节双抗体夹心ELISA检测方法,用该方法分别检测猪囊尾蚴、棘球蚴和猪蛔虫具有良好的特异性。用ELISA和RT-PCR同时检测120份样品,ELISA的特异性和敏感性分别为98.1%和80.0%,2种方法的符合率为95.8%。     

三种猪O型口蹄疫免疫抗体检测方法的比较

为了评价猪O型口蹄疫抗体不同检测方法的相关性和特点。随机选择3个规模化猪场,每个猪场采30份猪血清,分别采用正向间接血凝、阻断夹心ELISA、间接ELISA三种方法进行O型口蹄疫免疫抗体检测。结果显示采用正向间接血凝法检测的免疫抗体合格率显著高于两种ELISA方法(P<0.05);两种ELISA方法检测结果差异不显著(P>0.05),且具有良好的相关性。     

ELISA法在植物检测中的应用研究及改进措施

酶联免疫吸附法(ELISA)目前是酶联免疫技术中应用最广的方法。详细分析了ELISA的基本原理,并对其基本类型及在植物病毒检测中的应用现状进行了研究。最后在理论分析的基础上结合工作经验,从提高ELISA的灵敏度、保持ELISA检测的稳定性、特异性、检测的标准曲线方法等方面提出改进策略,并对其发展前景进行展望。     

猪囊尾蚴头节蛋白双抗体夹心ELISA检测方法的建立及初步应用

采用抗猪囊尾蚴头节蛋白单克隆抗体包被ELISA板,以兔抗猪囊尾蚴头节蛋白多抗作为捕获抗体,建立了猪囊尾蚴头节双抗体夹心ELISA检测方法,用该方法分别检测猪囊尾蚴、棘球蚴和猪蛔虫具有良好的特异性。用ELISA和RT-PCR同时检测120份样品,ELISA的特异性和敏感性分别为98.1％和80.0％,2种方法的符合率为95.8％。        

间接ELISA检测减蛋综合征病毒抗体方法的建立

应用SephdexG-200亲和层析获得纯化的减蛋综合征病毒EDSV作ELISA抗原,应用抗鸡Ig轻链单抗1B7辣根过氧化物酶结合物建立了定量检测EDSV抗体水平的ELISA方法。确立了将鸡血清100倍稀释监测ELISA效价(ET)的回归方程y=0.59287x+0.75757(r=0.96763)可用于定量测定。血凝抑制(HI)抗体与ELISA方法的比较试验表明,ELISA法比血凝抑制试验敏感2倍以上.     

克仑特罗CLEIA试剂盒与ELISA试剂盒的比较分析

用研发的克仑特罗化学发光酶联免疫（CLEIA）试剂盒与克仑特罗酶联免疫（ELISA）试剂盒进行检测效果比对,结果显示,CLEIA试剂盒检测时间为33 min,而ELISA试剂盒则需要50 min,CLEIA试剂盒方法要比ELISA试剂盒方法更节省时间;CLEIA试剂盒IC50为400 ng·L-1,对猪尿和猪肉的最低检测限分别为201 ng·L-1和907 ng·kg-1,而ELISA试剂盒IC50则为1252 ng·L-1,对猪尿和猪肉的最低检测限分别为235 ng·L-1和993 ng·kg-1,CLEIA试剂盒方法的灵敏度要高于ELISA试剂盒方法的灵敏度。综合分析得知：CLEIA法比ELISA法灵敏度更高、反应时间更短。     

绵羊群体中不同布鲁氏菌病血清学诊断方法比较研究

布鲁氏菌病(Brucellosis)是由布鲁氏菌属细菌(Brucella)引起的人畜共患传染病,在世界范围内广泛分布,造成重大经济损失和严重公共健康问题。利用菌体细胞或光滑型脂多糖(S-LPS)作抗原,检测待检动物血清中抗体血清学诊断方法,是布鲁氏菌病检疫主要手段。但目前尚无完美的单一检测方法用于动物布鲁氏菌检测。本研究针对RBT,SAT,i ELISA和c ELISA四种常用检测方法,在绵羊群体中(n=204),利用敏感性、特异性、Youden指数、AUC值等参数评估其准确性。应用单一方法检测时,i ELISA敏感性最高(93.15%);SAT特异性最高(98.47%);i ELISA的Youden指数和AUC值最大,分别达到88.75%和0.94。四种不同检测方法中,i ELISA和c ELISA之间符合率最高(87.25%),SAT和i ELISA之间Kappa值最高(0.72)。两种方法组合作平行试验时,所有组合以SAT+i ELISA的Youden指数值和AUC值最大,分别达到92.27%和0.96;系列试验时,RBT+i ELISA的Youden指数值和AUC值最大,分别达到83.70%和0.92。研究结果将为布鲁氏菌病净化过程中检测组合的筛选提供参考,从而提高诊断准确性。     

大型溞ChE和NAGase间接竞争和非竞争ELISA方法的比较

[目的]探索间接非竞争ELISA和间接竞争ELISA法测定大型溞ChE和NAGase的试验条件及方法灵敏度。[方法]分别采用间接竞争和间接非竞争ELISA方法测定大型溞ChE和NAGase。[结果]对于ChE,间接非竞争ELISA的最适抗原浓度和抗体稀释倍数分别为1.466μg/m L和1∶10 000,灵敏度为7.426 7 ng/m L;间接竞争ELISA的最适抗原浓度和抗体稀释倍数分别为5.277μg/m L和1∶8 000,灵敏度为0.163 4 ng/m L。对于NAGase,间接非竞争ELISA的最适抗原浓度和抗体稀释倍数分别为8.961μg/m L和1∶6 000,灵敏度为4.199 9 ng/m L;间接竞争ELISA的最适抗原浓度和抗体稀释倍数分别为6.450μg/m L和1∶4 000,灵敏度为0.250 8 ng/m L。[结论]无论是ChE还是NAGase,间接竞争ELISA在最适抗体浓度下的检测灵敏度均高于间接非竞争ELISA,加之其操作简便,间接竞争ELISA在生物和环境样品ChE和NAGase含量检测中值得推广应用。     

ELISA方法检测动物源性食品中卡那霉素研究

为评价卡那霉素检测试剂盒的现场应用效果,结合仪器检测方法,对现场采集的样品同时进行HPLC-MS检测和ELISA检测,然后进行统计分析。结果表明,卡那霉素HPLC-MS检测和ELISA检测动物组织和肝脏样品816份,ELISA检测试剂盒检出率较高,与仪器的符合率达98.99%,卡那霉素ELISA检测试剂盒敏感性好、时间短,不存在假阴性。卡那霉素ELISA检测试剂盒可以用于动物源性食品的检测工作,适用于现场、大范围的快速筛选。     

三抗体间接法Dot—ELISA检测牛副结核病IgG_1抗体的研究

本试验建立了检测副结核病牛血清中特异性抗体的一种新的免疫学诊断方法——三抗体间接法斑点酶联免疫吸附试验(Dot一ELISA)。并与粪便培养法,常规 ELISA,补体结合反应(CFT)及二抗体间接法 Dot一ELISA 进行了比较,试验结果表明,三抗体间接法Dot——ELISA 比常规 ELISA、CFT 和二抗体间接法 Dot——ELISA 显著敏感,而且快速、简易、经济,适用于大规模的现场检疫。     

猪尿液中盐酸克伦特罗(瘦肉精)检测方法比较试验

利用快速检测试纸条法、竞争酶标免疫法(ELISA)和气相色谱-质谱分析方法(GC-MS)分别对84份猪尿液样品进行盐酸克伦特罗检测。结果显示ELISA方法与气相色谱-质谱分析方法(GC-MS)符合率为100.0%,快速检测试纸条法与固相萃取-气相色谱-质谱分析方法(GC-MS)符合率为90.5%。     

猪尿液中盐酸克伦特罗(瘦肉精)残留量检测方法比较

利用快速检测试纸条法和竞争酶标免疫法(ELISA)分别对70份生猪尿样进行检测,再利用固相萃取-气相色谱-质谱分析方法(GC-MS)进行确证。结果表明:ELISA方法与固相萃取-气相色谱-质谱分析方法(GC-MS)符合率为100.0%,快速检测试纸条法与固相萃取-气相色谱-质谱分析方法(GC-MS)符合率为98.6%。     

不同方法测定牛奶中环丙沙星的残留

采用微生物法、酶联免疫法、高效液相色谱法同时测定鲜奶中环丙沙星的残留,结果表明:微生物法适合牛奶收储时抗菌药物残留的初筛;酶联免疫法能够较精确地测定奶中环丙沙星的残留,但其费用昂贵,高效液相法适合质监部门和大型企业应用。     

脱脂奶溶蛋白琼脂扩散抑制试验检测兔血清中嗜水气单胞菌胞外蛋白酶的抗体

利用蛋白酶的蛋白特性，结合琼脂免疫扩散试验，建立了脱脂奶溶蛋白琼脂扩散抑制试验的新方法，用以检测免血清中的嗜水气单胞菌（Aeromonas hydrophilla)胞外蛋白酶抗体，同时与琼脂扩散免疫沉淀试验及ELISA试验进行了比较，结果显示，该方法的敏感性优于琼脂扩散免疫沉淀试验，而与ELISA试验相当。     

猪圆环病毒Ⅱ型血清抗体ELISA检测方法的建立

为了检测猪圆环病毒Ⅱ型(PCV2)抗体,本试验建立了快速、敏感的ELISA诊断方法.通过比较差速离心、蔗糖不连续梯度离心、氯化铯等密度梯度离心和氯仿抽提结合超速离心等4种方法纯化PCV2抗原的包被效果,来确定最佳的PCV2包被抗原纯化方法,在此基础上,通过全病毒抗原最适包被浓度和二抗HRP-SPA稀释倍数的确定、待测血清稀释倍数的确定、封闭液浓度的确定、封闭时间的确定、HRP-SPA反应时间的确定、临界值的确定、特异性测定、重复性测定、符合率比较等,进一步优化检测PCV2抗体的间接ELISA方法.结果表明:对猪的多种病毒阳性血清进行ELISA检测,只有PCV2阳性血清呈阳性;对6份血清进行4次重复试验,方差分析显示P0.05,差异不显著;与PCV2-ELISA试剂盒(INGEZIM公司生产)的符合率比较,其总符合率达88.89%.可见,优化建立的检测PCV2抗体的间接ELISA方法特异性强、重复性高、稳定性好,可用于PCV2血清学诊断和血清学普查.     

酶联免疫吸附试验检测鸭瘟抗体的研究和应用

应用提纯的鸭瘟病毒作为包被抗原，建立了用于检测鸭瘟抗体的酶联免疫吸附试验（ＥＬＩＳＡ）间接法。试验结果表明，该法特异性高（与鸭病毒性肝炎等１３种病的阳性血清不发生交叉反应），与血清中和试验的符合率为１００％但其敏感性比血清中和试验至少要高１０００倍，且重复性好，结果可靠，用于大批量样品的检测大约经６小时即可获得结果，是一种适合于血清流行病学调查、进出口鸭对鸭瘟的检疫和对鸭群进行免疫抗体水平检测的敏感、快速、准确性高、特异性强、重复性好且简便实用的方法。     

兔支气管败血波氏杆菌双夹心ELISA检测方法的建立

为建立特异性好、敏感性高、稳定可靠的兔支气管败血波氏杆菌(Bb)双夹心ELISA检测方法,制备了兔抗Bb免疫血清和小鼠抗Bb腹水单抗(Bb McAb),并将它们提纯。用方阵法筛选最佳反应浓度,用特异性试验、敏感性试验和重复性试验对该方法进行鉴定,并与PCR检测方法比较。结果表明,兔抗Bb IgG的最佳稀释度为1∶6 400,浓度为2.5 mg/L;单抗的最佳稀释度为1∶800,浓度为5.0 mg/L。特异性试验和重复性试验结果表明,该方法特异性强、重复性好,与兔常见病菌大肠埃希氏菌、多杀性巴氏杆菌和产气荚膜梭菌均不发生反应,同时与PCR检测方法的符合率为100%。     

自制和进口试剂盒检测马铃薯环腐病的比较研究

采用自制NCM-ELISA试剂盒和进口DAS-ELISA试剂盒进行马铃薯环腐病检测试验.比较发现:强化后的自制NCM-ELISA试剂盒不仅同进口DAS-ELISA试剂盒一样灵敏,而且价格低廉,且简便、快捷.自制NCM-ELISA试剂盒可以将点样后的硝酸纤维素膜存储数周,然后再继续实验,具有便于携带利于推广的优点.而且自制NCM-ELISA试剂盒在检测前,进行富集培养,与进口DAS-ELISA试剂盒相比将灵敏度提高100万倍,并且避免假阳性反应发生.因此NCM-ELISA试剂盒完全可以取代进口DAS-ELISA试剂盒.     

自制间接法猪瘟抗体ELISA检测试剂盒性能研究

为了评价实验室自行研发的间接法猪瘟抗体ELISA检测试剂盒的性能,我们用调试后的ELISA试剂盒和两个进口试剂盒(法国LSI公司及美国IDEXX公司产品),分别对184份临床样品进行了检测。结果显示:实验室初步建立的检测体系与LSI公司试剂盒符合率为83.6%、特异性100%、敏感性80.6%,与IDEXX公司试剂盒符合率为76.7%、特异性62%、敏感性93%。