蜜蜂DNA提取纯化与RAPD反应体系的建立

以意大利蜜蜂为材料，研究了蜜蜂DNA的提取以及对RAPD分析的影响因素，包括模板浓度、Mg^2 、dNTP和引物，建立了适于蜜蜂RAPD分析的PCR反应体系，即20μL反应体系中，包括10mmol／L Tris—HCl(pH8．3)、50mmol／L KCl、20～60ng DNA、3．0mol／L MgCl2、0．2mmol／L dNTP、0．5μmol／L随机引物和1．5unit Taq聚合酶。扩增程序为：94℃预变性5min，94℃变性1min，36℃退火1min，72℃延伸2min，40个循环：最后在72℃延伸10min．     

黄麻DNA提取与RAPD反应体系的建立

以假黄麻、假长果、越南圆果 (圆果种黄麻 )等为材料 ,研究了黄麻 DNA的提取方法以及对 RAPD分析的影响因素 ,包括模板浓度、Mg2 + 、d NTP、引物和 Taq酶等 ,建立了适于黄麻种质 RAPD分析的 PCR反应体系 .即在 2 5μL反应体积中 ,Tris- HCl(p H8.0 )、KCl、Mg Cl2 、d NTP、随机引物的浓度分别为 10 mmol· L-1、5 0mmol·L-1、2 .5 mmol· L-1、15 0 μmol· L-1、0 .2 μmol· L-1,并含有 30 - 60 ng DNA与 1.5 U Taq DNA聚合酶 .扩增程序为 :94℃预变性 5 min;然后 94℃ 30 s,37℃ 1.5 min,72℃ 1min,4 1个循环 ;最后 72℃延伸 7mi     

台湾杉DNA提取及RAPD反应体系的建立

台湾杉富舍多糖和多酚等物质,这对获取高质量的DNA造成了困难,采用常规CTAB法和改良的CTAB法分别对台湾杉DNA的提取进行了研究.结果表明,常规CTAB法提取的DNA含杂质多、难溶解、易降解;改良的CTAB法提取的DNA质量高,A260/A280比值在1.8左右,每1.0 mg干样可获取DNA200～600ng左右;电泳检测表明,所获得的DNA完整、无降解.通过对台湾杉RAPD-PCR反应体系中的各个影响因素进行优化,建立了台湾杉RAPD扩增分析的稳定反应体系.即20μL反应体系中舍1UTaqDNA聚合酶,0.2 mmol·L-1 dNTPs,1.8 mmol·L-1 Mg2 ,0.4μmol·L-1引物,40 ng模板DNA.应用优化后的反应体系PCR扩增获得的RAPD指纹图谱,带型清晰,重复性好,为进一步开展台湾杉的保育遗传学研究奠定了基础.     

荸荠基因组DNA的提取及RAPD反应体系的建立

以荸荠叶状茎为试验材料,采用改良的SDS法提取其基因组DNA,并对其RAPD反应体系进行优化,建立了荸荠的RAPD—PCR优化反应体系和程序。结果表明,提取的基因组DNA纯度和完整性较好,OD260/OD280值在1．8～2．0之间,DNA无降解现象,完全可以满足RAPD—PCR扩增要求。建立了荸荠RAPD反应体系：总体积为25μl,各有关成分的最佳浓度分别为25mmol／L Mg^2＋,1．0UTaqDNA聚合酶,0．2mmol／L dNTPs,1μmol／μl引物,1．5ng／μl DNA模板。PCR反应程序为：94％预变性3min;94℃变性1min,37℃退火30s,72℃延伸60s,40个循环;最后72％延伸10min。     

油葵种子DNA提取和RAPD反应体系的优化

[目的]为利用RAPD技术进行油葵的亲缘关系分析及杂种鉴定奠定基础。[方法]以6种杂交油葵种子为试材,采用改良的CTAB法提取油葵基因组DNA,并对提取DNA的浓度和纯度进行测定。通过单因子梯度试验,筛选出优化、稳定的RAPD-PCR反应体系。[结果]采用改良CATB法提取的油葵DNA质量好、得率高,且无蛋白质和酚类的污染。油葵的最适RAPD-PCR反应体系为:2.0μl 10×Buffer、2.0 mmol/L Mg2+、150μmol/LdNTPs、1.5UTaq酶、2.0 ng/μl DNA模板、0.25μmol/L引物,总体积为20.0μl。利用该体系对不同含油量的6个油葵杂交种进行扩增,均表现为带形清晰稳定、带数适宜。[结论]该RAPD技术体系适用于各种油葵杂交种的DNA分析。     

秦巴山区野生山丹百合DNA提取与RAPD反应体系建立

以秦巴山区野生山丹百合幼嫩叶片为材料,采用常规CTAB法提取百合基因组DNA,得到的DNA基本能满足RAPD-PCR分析。通过单因素逐一递进优化,得到在20μL的PCR反应体系中,野生山丹百合RAPD分析的最佳反应体系为:40 ng的模板DNA,0.4μmol/L随机引物,2.25 mmol/L Mg2 ,0.2 mmol/LdNTPs,Taq DNA聚合酶1.5U,1×buffer缓冲液,ddH2O补足20μL。RAPD扩增反应程序为:94℃预变性4 min,94℃30 s,37℃45 s,72℃90 s,35个循环,最后72℃10 min,4℃保存。该反应体系具有较好的稳定性及可重复性。     

蓝莓RAPD反应体系的建立

以蓝莓幼嫩叶片为试材,采用CTAB法提取基因组DNA,并对影响RAPD反应的因素进行了研究,建立了适用于蓝莓的RAPD最佳反应体系。结果表明:从幼嫩的叶片中提取的DNA质量高;20lμRAPD-PCR体系中,退火温度37℃d、NTPs浓度0.25 mmol/L、模板DNA浓度0.5~1.5 ng/μl、引物浓度1 pmol/μlT、aq酶用量1.0 U时,获得的特异性谱带清晰可靠,可重复性高。     

蝴蝶兰RAPD反应体系的建立

为建立一个稳定的蝴蝶兰RAPD反应体系,对RAPD反应体系中模板DNA、Taq DNA聚合酶用量、随机引物浓度、Mg2+浓度和dNTPs浓度等各项参数进行筛选比较。结果表明,最佳反应体系为:25μl反应体系中,其中含模板DNA(20 ng/μl)1.5μl,Taq DNA聚合酶(5 U/μl)0.4μl,随机引物(20μmol/L)1μl,Mg2+(25 mmol/L)2.5μl,dNTPs(10 mmol/L)0.5μl,10×PCR Buffer2.5μl,ddH2O 16μl。     

苹果RAPD反应体系的研究

对苹果基因组 DNA的 RAPD扩增体系各参数进行筛选比较 ,建立的最佳反应体系为 :模板 DNA 1 .0 mg/L ,引物 1 .5mg/L ,Taq DNA聚合酶 0 .1 mol/(L· min) ,Mg2 +2 .5mmol/L,d NTPs0 .4mmol/L。     

平菇基因组DNA的提取及RAPD体系的优化

应用SDS与β-SH乙醇结合的方法对平菇菌丝体、原基、菇蕾和成熟子实体4种材料的基因组DNA进行了提取,并对影响RAPD反应的各因素进行了优化,20 μL反应体系中,模板加入量为6～10 ng,引物加入量10 pmol,dNTPs(各2.5 mmol)加入量为1.5～2 μL,Taq酶加入量为0.5U,退火温度设置在略低于引物Tm值的范围.     

刺参基因组DNA的提取及RAPD条件的优化

以野生刺参为试验材料,探索了刺参基因组的提取方法,并对影响RAPD反应的各因素进行了优化,建立了刺参的优化反应体系和程序.反应体系总体积为25μL,各组分的含量为10倍缓冲液2.5μL,Mg2 (20 mmol·L-1)3μL,TaqDNA聚合酶(1 U·μL-1)1.5μL,dNTPs(10 mmol·L-1)2.5μL,随机引物(5pmol·μL-1)1μL,模板DNA(40 ng·μL-1)2.5μL.PCR循环程序为96℃预变性5 min;94℃变性0.5 min,36℃退火1 min,72℃延伸1 min,35个循环;最后72℃延伸10 min.     

石鲽基因组DNA的提取及其RAPD体系的优化

[目的]研究石鲽基因组DNA的提取及其RAPD体系的建立和优化。[方法]以石鲽为试材,按常规酚/氯仿抽提法提取其基因组的DNA,对影响RAPD反应的各因素进行优化,建立了石鲽的最佳RAPD反应体系和程序。[结果]采用常规酚/氯仿抽提法获得的DNA完全能够满足RAPD分析的要求。通过优化建立一套适合石鲽的稳定的RAPD反应体系:反应体系总体积为25μl,包括10×buff-er2.5μl,MgCl22 mmol/L,dNTPs 0.15 mmol/L,引物0.2μmol/L,模板30 ng,Taq酶1 U。扩增程序为:94℃预变性5 min,45次PCR循环(94℃变性45 s,36℃退火45 s,72℃延伸2 min和72℃延伸10 min。利用该体系对OPK和OPV系列共40条引物进行扩增,发现其中部分引物能产生稳定、清晰的条带。[结论]该体系为石鲽遗传多样性以及相关分子标记的研究奠定了基础。     

藏獒基因组DNA提取及RAPD扩增体系的优化

采用改进的盐析法提取了藏獒血液基因组DNA,并对RAPD扩增体系进行了优化。结果表明,改进的盐析法所提取的藏獒基因组DNA完整、无降解,完全可以满足RAPD分析的需要;20μL的最佳扩增体系组成为2.50 mmol/L Mg2+、0.60 mmol/L dNTP、50 ng模板DNA、1.25U Taq酶和0.3μmol/L随机引物,最佳退火温度为36.5℃。     

水稻DNA快速提取及RAPD分析体系的优化

以水稻幼苗为材料,比较了3种不同DNA提取方法,获得了一种以CTAB法为基础的DNA的简便、快速提取方法,并对RAPD反应体系进行了优化。结果表明,改良CTAB法所提取的DNA产量高、质量好,完全能够满足RAPD分析的要求。通过对DNA模板、Mg2+、dNPT、Taq DNA聚合酶浓度等因素的试验,对水稻RAPD分析体系进行了优化。新建的分析体系扩增谱带清晰、多态性强,稳定性好。     

春兰基因组DNA提取及RAPD反应体系的优化

以春兰为研究材料,对春兰基因组DNA的提取以及RAPD-PCR反应体系进行了优化。结果表明,在提取液中加入PVP和β-巯基乙醇去除酚类物质,采用高盐沉淀DNA和多次洗涤去除糖类,可以得到高质量春兰基因组DNA。电泳检测表明,所获得的DNA完整,无降解,完全可以满足R-APD等分子标记分析的需要。同时对春兰RAPD-PCR反应体系中各个影响因素进行了优化,建立了适合春兰R-APD分子标记的最佳反应体系,即20μl反应体系中含1UTaqDNA聚合酶,60μmol／L dNTPs,2．25mmol／L Mg^2＋,1．0μmol／L引物,1．5ng／μl模板DNA。     

枸杞基因组DNA的提取及RAPD反应体系的优化

[目的]研究枸杞基因组DNA的提取及RAPD反应体系的优化。[方法]采用了进一步优化的CTAB法提取枸杞基因组DNA,检测所提取的DNA的浓度范围,并对RAPD反应体系进行了科学、合理的优化。[结果]结果表明,浓度范围在3．5～5．5μg/μl,完全能够满足RAPD—PCR的要求。[结论]该方法具有步骤少、费用低、效率高等特点,比较适用于枸杞基因组DNA的提取。     

10种绣线菊DNA的提取及RAPD反应体系的优化

旨在筛选出绣线菊属 RAPD 反应的最佳体系,为绣线菊属植物种质资源遗传多样性和亲缘关系的研究奠定基础.试验以 10 种绣线菊属植物为材料,采用改良 CTAB 法进行冬芽和嫩叶的总 DNA 提取并对影响 RAPD 扩增效果的因素进行优化.通过单因素优化筛选出最佳的 20μl 反应体系10×Taq buffer 2μl,Taq 酶 1.0U,0.15mmol/L dNTP,DNA 2ng/μl,引物 0.21μ mol/L,Mg2 2.0mmol/L;反应程序94℃预变性 4min,然后进行 40 个循环94℃变性 45s,37℃退火 1min,72℃延伸 1min.最后72℃延伸5min,4℃终止反应.结果发现,采用改良 CTAB 法所提取绣线菊冬芽的 DNA 达到 RAPD 反应的要求.筛选体系扩增出清晰稳定的多态性条带,可用于对绣线菊属遗传育种方面的研究.