适于转基因苹果种子和果肉总DNA提取的方法

为探求适宜的转基因苹果种子和果肉DNA提取方法,以转豇豆胰蛋白酶抑制剂基因（CpTI）嘎拉（Gala）苹果果实为试材,采用改良CTAB法、SDS法与高盐低pH值SDS法对苹果种子和果肉进行基因组总DNA提取。结果表明,在提取种子基因组DNA时,供试3种提取方法均可获得纯度较高的DNA,但不同方法所获得的DNA产量差异较大,以改良CTAB法获得的DNA产量最高,为0.221 mg?g-1鲜重,SDS法和高盐低pH值SDS法所获得DNA产量偏低,分别为0.053 mg?g-1鲜重和0.034 mg?g-1鲜重;在提取果肉基因组DNA时,SDS法在纯度和产量上效果最好,DNA的A260/ A280 值为1.808,产量为0.012 mg?g-1鲜重,而其它两种方法提取质量较差。考虑到质量和得率的综合因素,认为改良CTAB法适宜提取转基因苹果种子DNA,SDS法适宜提取转基因苹果果肉DNA。     

一种快速高效的油茶叶片DNA提取方法

油茶叶片含有较多的多糖和多酚等次生代谢产物是提取DNA的重要障碍。本研究以油茶叶片为材料研究高质量的DNA提取方法。建立了一种改良的CTAB法,运用2×CTAB缓冲液来裂解细胞,在裂解细胞后的溶液中加入终浓度为2 mol/L Li Cl,用氯仿异戊醇抽提溶液,用等体积的异丙醇沉淀DNA,用预热的70%乙醇洗涤DNA沉淀。运用紫外分析和琼脂糖凝胶电泳分析测定了DNA的产率和质量,并与经典SDS法、经典CTAB法、高盐低p H法进行了对比。结果表明,改良的CTAB法提取的DNA产率比经典SDS的少,与经典CTAB法和高盐低pH法的相似,达到39.0μg/g,且纯度高,无RNA的污染。改良的CTAB法提取的叶片DNA可用于油茶后续的PCR分析研究。     

黄山木兰叶片基因组DNA提取方法的比较研究

以珍贵渐危植物黄山木兰的嫩叶为材料,利用改良CTAB法、SDS法、高盐低p H法和Bio Teke试剂盒法提取基因组DNA,通过超微量紫外分光光度计检测、琼脂糖凝胶电泳、限制性内切酶消化和EST-SSR引物扩增法系统地检测DNA的质量及得率。结果表明,在DNA纯度和得率方面,改良CTAB法提取的DNA结果最佳,Bio Teke试剂盒法提取的DNA纯度较好但得率较低,SDS法和高盐低p H法提取的DNA有明显的蛋白质杂质、多糖及其他次生代谢物和RNA的污染;酶切消化结果中改良CTAB法和Bio Teke试剂盒法表现良好;EST-SSR引物扩增结果中唯有改良CTAB法提取的DNA扩增目的基因条带数目最多且清晰。综合分析,改良CTAB法是最适合黄山木兰叶片基因组DNA提取的方法。     

枳壳基因组DNA提取方法的比较研究

以枳壳（酸橙）叶片为试验材料,分别采用改良CTAB法、CTAB-硅珠法、SDS法、高盐低pH值法和周世良法5种方法提取枳壳基因组DNA,并通过紫外分光光度计、琼脂糖凝胶电泳及SSR-PCR扩增3种方法对所提取的DNA样品进行检测。结果表明,5种方法中SDS法提取的DNA浓度最高（平均为900 ng/ul）,纯度最好（OD260/OD280平均值为1.90）,且SSR-PCR扩增结果与紫外分光光度计和凝胶电泳检测结果基本一致。因此,SDS法是枳壳DNA最佳提取方法,可用于分子检测试验。     

三种DNA提取方法对检测草莓镶脉病毒稳定性的研究

草莓成熟叶片中含有大量的多糖、蛋白质、多酚和色素等物质,影响高质量DNA的提取和下游PCR反应的进行。为确定适用于PCR技术检测草莓镶脉病毒(Strawberry vein banding virus,SVBV)的DNA提取方法,从草莓叶片中提取DNA后,对样品中的SVBV进行特异性的PCR检测,比较确定不同DNA提取方法对PCR检测SVBV稳定性的影响。以感染SVBV的草莓叶片为材料,分别采用CTAB试剂盒法、高盐低pH法、改良SDS法提取草莓叶片的总DNA,将不同方法提取的DNA通过紫外分光光度法和琼脂糖凝胶电泳法进行测定,对DNA产量和质量进行分析。结果表明,3种方法均能获得较为完整的DNA片段,用CTAB试剂盒提取的DNA质量最高,改良SDS法提取的DNA质量较低。将不同方法提取的DNA经过PCR反应特异性检测SVBV后,将与目的片段大小一致的PCR扩增产物经序列测定及分析,证明与SVBV的序列相吻合,证明了方法的可靠性,其质量能够满足PCR特异性检测需要。     

河北核桃叶片DNA提取方法的比较

以13个河北核桃优系(罗汉头、南安庄、艺核1号、C12、J16、M3、H12、C15、M10、MB、C13、M9、A7)的叶片为材料,比较了高盐低pH法(2%PVP40,3%PVP40)、SDS法(0.5%,1%,1.5%)和CTAB法(2%,3%)提取基因组DNA的效果,旨在筛选出适合河北核桃DNA提取的最佳方法,为进一步开展河北核桃的分子群体遗传研究奠定基础。通过紫外分光光度计法和琼脂糖凝胶电泳等方法对所提取的DNA样品进行检测,比较所得DNA的纯度和质量。结果表明,几种提取方法均能提取到核桃叶片的基因组DNA,其中含3%PVP40的高盐低pH法所提取的DNA浓度适中,蛋白质、RNA、多糖等去除彻底,无降解且OD260/OD280值为1.86,确定3%PVP40的高盐低pH法为河北核桃叶片DNA提取的最适方法。     

五种兜兰属植物基因组DNA提取方法比较

为获得兜兰属植物基因组DNA的高质量提取方法,以麻栗坡兜兰(Paphiopedilum malipoense)、紫纹兜兰(Paphiopedilum purpuratum)、长瓣兜兰(Paphiopedilum dianthum)、硬叶兜兰(Paphiopedilum micranthum)和带叶兜兰(Paphiopedilum hirsutissimum)植物成熟叶片为试材,采用CTAB法、改良CTAB法、高盐低pH法和SDS法提取五种兜兰属植物基因组DNA,用琼脂糖凝胶电泳和分光光度计法分别检测所得总DNA的完整性和纯度。结果表明应用改良CTAB法从五种兜兰属植物中均可提取获得较高质量的基因组DNA,其它三种方法提取获得的兜兰属植物基因组DNA质量差异较大,CTAB法可从紫纹兜兰、长瓣兜兰和硬叶兜兰中提取获得较高质量的基因组DNA,SDS法可从麻栗坡兜兰和带叶兜兰中提取获得较高质量的基因组DNA。兜兰属植物基因组DNA的高质量提取方法获得为后续以核酸为基础的功能基因克隆和表达等分子实验提供了依据。     

小麦条锈菌DNA提取方法的比较研究

以小麦条锈菌夏孢子为实验材料,分析比较了CTAB法、SDS法、尿素法和CTAB/SDS法4种方法对小麦条锈菌基因组DNA的提取效果。结果表明,利用4种方法提取的小麦条锈菌夏孢子DNA的纯度和得率存在一定差异,单位重量夏孢子分离的DNA量依次为：CTAB法＞尿素法＞CTAB/SDS法＞SDS法,而所获得的DNA纯度依次为：CTAB/SDS法＞CTAB法＞SDS法＞尿素法。以不同分离方法获得的小麦条锈菌DNA为模版,利用特异性微卫星引物RJ17进行PCR扩增和电泳分析,4种方法均能满足SSR反应,但CTAB法更适于SSR反应。     

青藏高原珍稀藏药水母雪莲药材DNA微量提取方法优化

本研究采用改良CTAB法、改良SDS法、高盐低p H法提取自然风干的水母雪莲植株的基因组DNA,并对提取方法进行优化筛选出适合于水母雪莲药材DNA的提取方法。研究表明改良CTAB(CTAB浓度为2%,PVP浓度为1%,β-巯基乙醇浓度为2%)法所提取的基因组DNA得率较高,且使用氯仿/异戊醇抽提两次时提取出的DNA质量较好,能够满足ISSR分析要求。在此基础上对实验材料进行预处理,优化获得了完全适用于水母雪莲风干药材DNA提取的一整套提取流程。该方法能够有效去除次生代谢产物对DNA提取的影响,且对原材料消耗较少,可以应用于后续水母雪莲种质资源鉴定和遗传多样性分析。     

高盐低pH法提取尾叶桉叶绿体DNA方法建立及质量分析

以尾叶桉叶片为材料,用高盐低pH法纯化叶绿体,再用SDS法提取叶绿体DNA(cpDNA)。经琼脂糖电泳检测,纯化回收离心力为200 g、300 g、400 g、500 g得到的cpDNA条带较亮、无降解拖尾。以400 g提取的cpDNA为模板,用核基因组及叶绿体基因组特异引物做PCR,能扩增到叶绿体基因片段且没有扩增到核基因片段。以来自尾叶桉白色愈伤组织的核DNA作对照,能扩增到核基因片段且没有扩增到叶绿体基因片段。结果表明:高盐低pH法提取的尾叶桉cpDNA纯度高,没有核基因污染,适用于基因扩增。本研究操作简便,成本低,能为木本植物cpDNA的提取提供参考。     

大豆不同生长时期基因组DNA提取方法的优化

以优质大豆品种冀豆7号、冀豆16号、五星1号、五星2号和MK（Maverick）不同生长时期的叶片为材料,分别采用不同方法提取大豆基因组,并通过对提取的DNA的含量测定、琼脂糖凝胶电泳分析和内参基因的PCR扩增,对不同方法所提取的DNA质量进行综合评价。结果表明：在嫩叶期,改进的CTAB法能够 分离出纯度高、质量好的DNA,而在开花期,采用本试验的新改良CTAB法可以有效去除多糖、酚类等物质得到完整性和纯度较好的大豆基因组,为大豆的分子生物学研究奠定了基础。     

从干种子中快速获取高质量DNA的高盐提取方法

为寻求一种从植物干种子中简单快速提取高质量基因组DNA的有效方法进行本研究。将种子打磨成粉,取100 mg粉末加入高盐提取液抽提基因组DNA。采用超微量分光光度计检测、PCR及酶切的方法检验DNA的得率和质量。从100 mg 7种常见作物种子粉末中可以得到619.67~1811.21 ng基因组DNA,A260/A280比值在1.87~2.07之间,其纯度和质量适合进行PCR及酶切分析。通过普通PCR方法分别对7种作物的特异性内源基因片段进行扩增,结果均能扩增到明显的目的条带。用EcoRV和HindIII两种核酸内切酶能对所得的DNA充分酶切。结果表明本方法能快速地从干种子中提取到高质量的DNA。     

以PCR为目的的大豆叶片DNA提取方法的比较研究

模板DNA的质量直接影响PCR扩增的结果,而不同提取方法及其缓冲液的成份与浓度对提取DNA的质量有重要影响。本文以5个栽培大豆品种的叶片为材料,比较分析了SDS与CTAB两种提取方法以及不同浓度CTAB提取缓冲液对所提取的DNA质量的影响,并通过PCR进行检验。实验结果表明：用1％(W/V)、2％(W/V)浓度的CTAB提取缓冲液和1．25％(WV)SDS提取缓冲液所提取的大豆叶片DNA的质量较好,均能满足PCR扩增模板的需求,其中以1．25％(W／V)SDS提取得到的大豆叶片DNA质量最好,以其为模板扩增的效果最佳,而4％浓度的CTAB不适宜提取大豆叶片DNA。     

山豆根基因组DNA高效提取方法的建立与优化

为了探寻优化山豆根DNA提取的方法,本研究以山豆根的叶片为材料,用3种改良的CTAB法提取山豆根DNA,并将提取的DNA经分光光度计和电泳检测,用于cpDNA引物筛选试验,找出最有效的山豆根DNA提取方法。结果显示,高PVP和β-巯基乙醇提取法和样品预处理法可用于提取山豆根基因组DNA。其中,样品预处理法山豆根DNA的效果最好,提取DNA浓度高、质量好,引物筛选结果条带清晰且单一。本研究建立了山豆根高质量的DNA提取方法,为进行分子生物学研究提供支持。     

鹿茸基因组DNA提取方法的比较研究

本研究旨在建立一种稳定、高效的鹿茸药材DNA提取方法,以满足后续的鹿茸DNA条形码鉴定方法需求。采用2种试剂盒、改良的CTAB法以及SDS法对市场上5个厂家共8批次的鹿茸药材进行基因组DNA的提取,参考2015版《中华人民共和国药典》四部通则9107考察了样品量、水浴温度、水浴时间3个因素。实验结果表明4种方法均可以从鹿茸药材中提取出基因组DNA,其中天根试剂盒提取效果最佳,改良的CTAB法提取效果较差;通过方法学考察得出使用天根试剂盒,提取条件为样品量70 mg、水浴温度56℃,水浴时间6 h时提取效果最佳。本研究优化得到的天根试剂盒提取鹿茸DNA方法操作简便,提取DNA浓度、质量优良,能够用于后续的DNA条形码鉴定中。     

甘蓝型油菜成熟籽粒DNA快速提取方法探讨

以室温保存不同年份的甘蓝型油菜种子为材料,采用改良的CTAB法和DNA抽提试剂盒分别提取甘蓝型油菜籽粒DNA,探讨适合甘蓝型油菜籽粒DNA提取的方法。结果表明,不同保存年份种子提取的DNA含量无显著差异;受种皮色泽的影响也较小;用改良的CTAB法比试剂盒所提DNA产量高,结构完整性好,成本较低。PCR扩增检测结果表明两种方法获得的DNA均能满足一般的分子实验。因此,从油菜干籽粒中直接提取DNA可以节约时间,显著提高工作效率,为快速高效地进行甘蓝型油菜种质资源和遗传多样性分析奠定了基础,同时,也利于快速鉴定推广品种是否带有外源基因。     

黄山市几种资源植物基因组总DNA提取方法的初探

为了能在分子生物学基础上进行资源保护和提高综合开发利用价值,对黄山市几种资源植物进行了初步的分子生物学研究。通过3种不同方法（普通CTAB法、改良CTAB法和SDS法）对黄山贡菊、艾草、玉叶金花、柳叶蜡梅和秤锤树这5种黄山市资源植物,进行叶片基因组总DNA提取方法的研究,并用紫外分光光度法和1%琼脂糖凝胶电泳法分别检测所得产物DNA的纯度和完整性。结果表明：对于黄山贡菊、艾草和玉叶金花基因组总DNA的提取采用改良CTAB法所得提取效果最佳;对于柳叶蜡梅以普通CTAB法提取效果最佳;对于秤锤树以SDS法提取效果最佳。琼脂糖凝胶电泳结果显示完整度较好,能够用于进一步的分子生物学研究。     

一种改良的快速高质大豆基因组DNA提取方法

为了探索一种适用于大豆叶片基因组DNA的快速、高效的提取方法,在传统的SDS提取方法的基础上,通过将缓冲液成分和浓度进行改良并加入表面活性剂Tween-20,优化实验流程。用限制性内切酶对该方法提取的DNA进行酶切及电泳检测,可得均一弥散条带。以提取的DNA模版扩增大豆Actin基因,测序后证实片段正确。同样以其为模版以SSR引物Sctt011进行SSR-PCR反应,并通过聚丙烯酰胺凝胶电泳检测,也可观察到特异性明显且无杂质的目的条带。实验结果表明,该方法提取的DNA完全符合各种分子实验的要求。本研究方法可用于快速提取大豆叶片基因组DNA,同时提高了提取DNA的质量。     

紫色观赏辣椒基因组DNA提取及ISSR-PCR体系的优化

摘 要：为探索紫色观赏辣椒基因组DNA的最佳提取条件和建立ISSR-PCR最优反应体系,对比了三种基因组DNA提取方法,并通过正交设计实验优化了ISSR-PCR反应体系。结果表明,采用高盐低pH法从两种观赏辣椒中提取的基因组DNA的A260/A280值分别为1.807和1.818,DNA电泳条带明亮整齐,无拖尾;ISSR-PCR最优反应体系(20 μL)为：1×PCR buffer,1.5 mmol/L Mg2+,0.6 μmol/L引物,0.2 mmol/L dNTPs,1.0U Taq DNA聚合酶,60 ng模板DNA,扩增所得分子图谱稳定性高、重复性好;唯有高盐低pH法提取的DNA经该ISSR-PCR体系扩增能体现出两个辣椒品种间分子图谱的差异。     

黑核桃叶片基因组DNA提取方法比较研究

探索从富含多酚和多糖等次生代谢物质的黑核桃叶片中获得高质量DNA的提取方法。以黑核桃与核桃叶片为材料,采用SDS、CTAB和改良CTAB 3种DNA提取方法对黑核桃与核桃基因组DNA提取效果进行比较研究,并通过琼脂糖凝胶电泳与紫外分光光度计检测所提取样品的质量;SDS与CTAB法重复性较差,提取的黑核桃DNA易降解;改良CTAB法可有效抑制酚类物质及细胞内多糖对DNA纯度的影响,对样品提取的DNA也无降解现象,纯度较高,得到的DNA A260/A280值均处于1.80~1.95之间;改良CTAB法是适用于高质量黑核桃DNA的提取方法。