11株禽多杀性巴氏杆菌OmpA基因克隆测序及其序列分析

为了解国内禽多杀性巴氏杆菌流行株（Pasteurella multocida,Pm）OmpA基因的变异情况,参考GenBank中已发表的多杀性巴氏杆菌序列设计一对特异性引物,采用PCR方法对11个禽Pm菌株和3个荚膜型参考株（A,B,D）的OmpA基因进行扩增,将各菌株纯化回收的扩增产物与pMD18-T载体连接,筛选阳性克隆进行测序。结果表明：14个菌株的OmpA基因开放阅读框在1 047～1 077 bp之间,其中长度为1 062 bp的有9个菌株;Signal IP 4.0预测表明,信号肽均为N端21个氨基酸残基,成熟蛋白氨基酸残基数量在327～332之间,推测的分子量为35.19～36.35 kD。与GenBank中12个菌株OmpA基因核苷酸序列比对及遗传进化分析发现,核苷酸同源性为85.3%～100%;氨基酸同源性为83.1%～100%;其中C48-1,1010,9003,890920,921012,xj等6个国内禽Pm分离株OmpA序列同源性为100%。由此可见国内禽Pm菌株OmpA基因非常保守。     

禽多杀性巴氏杆菌C48-1株OmpA基因表达与抗原性鉴定

为了研究禽多杀性巴氏杆菌(Pm)外膜蛋白A(Omp A)的免疫原性,根据C48-1菌株Omp A基因序列设计一对特异性引物,采用PCR方法扩增去信号肽的成熟Omp A基因.将去信号肽的成熟Omp A基因扩增片段双酶切后,克隆到p GEX-6p-1表达载体中,构建重组表达质粒p GEX-Omp A,转化宿主菌BL21并经异丙基硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达.SDS-PAGE的结果显示,融合蛋白GST-Omp A大小约为63 ku,与预期的分子质量相符.免疫印迹分析结果表明,该融合蛋白与鸡抗Pm血清具有明显的免疫反应,说明Omp A具有良好的抗原性,这为禽Pm Omp A在免疫防御研究中的应用奠定了基础.     

禽多杀性巴氏杆菌弱毒菌苗免疫研究综述

本文对国内外应用外科切除腔上囊、胸腺以及间接血凝,ELISA等血清学方法,在弱毒禽多杀性巴氏杆菌免疫机理方面的研究进展加以概述。血清学等方法的研究与应用,对禽多杀性巴氏杆菌弱毒苗的研制是十分重要的。     

竹鼠多杀性巴氏杆菌灭活苗的制备及免疫效果

以蜂胶为佐剂,将已灭活的竹鼠多杀性巴氏杆菌菌株与蜂胶乙醇浸液等体积混合,制备蜂胶佐剂灭活苗,并对其物理性状、安全性和免疫保护率进行检测.结果表明,制备出的灭活苗物理性状稳定,上层为淡黄色的澄明液体,下层为灰白色沉淀,振摇后呈均匀的乳黄色悬浊液体.建立动物模型,小白鼠接种后没有出现不良反应,灭活苗具有较好的安全性.攻毒试验结果表明,灭活苗的保护率达78.6％,免疫效果良好.     

禽多杀性巴氏杆菌C48-1株omp基因克隆及序列分析

根据Genbank中禽多杀性巴氏杆菌的omp（outer membrane protein）基因核苷酸序列设计1对特异性引物,应用PCR方法扩增出禽多杀性巴氏杆菌（5∶A）C48-1株的omp基因全长片段,与克隆载体pmD18-T连接后,转化感受态细胞,对经PCR鉴定和酶切鉴定均为阳性的克隆进行测序。结果表明omp基因全长2 376bp,编码791个氨基酸。序列分析表明该菌株与PBA100株、P52株、EU570212、PM70株核苷酸同源性为48.7%～98.6%,氨基酸同源性为34.8%～99.0%。     

检测禽多杀性巴氏杆菌PCR方法的建立

为禽多杀性巴氏杆菌感染提供特异、敏感的诊断方法,本研究建立了检测禽多杀性巴氏杆菌PCR方法.该方法能从禽多杀性巴氏杆菌扩增出1条460 bp的特异片段,而无法从大肠杆菌、鸭疫里氏杆菌、沙门氏菌、金黄色葡萄球菌、禽1型副黏病毒、番鸭呼肠孤病毒和鸭基因组DNA扩增出目的片段.敏感性试验显示该PCR方法最低可检测出1 ng·L-1的细菌基因DNA.     

多杀性巴氏杆菌的分离和PCR鉴定

从甘肃省某县一猪场病死猪剖解肺部分离,经过涂片镜检观察,为革兰氏染色为阴性的球杆菌,经过生化试验鉴定初步定为多杀性巴氏杆菌.设计1 对引物进行PCR扩增、克隆之后,送往大连宝生物公司测序,测序结果运用BLAST软件比对,与多杀性巴氏杆菌同源性为100%.对分离株进行药敏试验,其对青霉素、链霉素、四环素等抗生素和磺胺类药物敏感.     

3株羊源D型多杀性巴氏杆菌的生物学特性研究

为探究羊源多杀性巴氏杆菌(Pasteurella multocida,Pm)的生物学特性,对3份送检病死羊的肺脏组织进行细菌分离,将分离到的3株菌株分别命名为P1、P2和P3.3株菌株经多杀性巴氏杆菌特异性基因kmt PCR扩增阳性,随后检测荚膜血清型、多位点序列分型、18种毒力基因、药物敏感性和致病性.结果表明:3株分离株均为荚膜血清型D型多杀性巴氏杆菌,P1和P2序列型均为ST131,P3序列型为ST320;3株菌株的毒力基因各不相同,P1—P3均携带毒力基因RpoB、OmpH、ToxA、NanH,P3携带HgbA基因,P2携带pfhA基因,P1和P2携带SodA基因.该菌攻毒小鼠6 h后死亡,然而,采取相同的剂量攻毒白羽鸡未发生死亡;药敏结果显示3株分离株对左氧氟沙星、诺氟沙星、丁胺卡那、美洛西林、头孢曲松钠、复方新诺明敏感,对多黏菌素B、多西环素耐药.综合而言,从临床分离的3株羊源多杀性巴氏杆菌,荚膜血清型均为D型,基因型、毒力基因和致病性具有独特性,对小鼠致病力较强,对鸡致病力较弱.     

17株兔多杀性巴氏杆菌药敏测定

为寻求治疗兔巴氏杆菌病的有效药物,我们以通常使用的13种抗菌药物对分离自不同地区、部位的17株兔多杀性巴氏杆菌以常规纸片法做了药物敏感性测定试验,现将结果报告如下。     

禽多杀性巴氏杆菌ompW基因的克隆与序列分析

提取禽多杀性巴氏杆菌分离株Pm27基因组DNA,参考GenBank中Pm70株ompW基因序列设计引物,应用PCR技术扩增了细菌ompW基因,将扩增片段克隆到pMD18-T载体后测序。生物信息学分析表明,该基因编码区长度为615bp,编码204个氨基酸;氨基酸序列与参考株Pm70 OmpW蛋白的同源性最高,达98%;与睡眠嗜血杆菌的同源性77%,与琥珀酸产生菌的同源性为69.3%,与霍乱弧菌、大肠杆菌、耶尔森菌的同源性为50%左右。OmpW蛋白前21个氨基酸残基为信号肽序列,潜在的糖基化位点位于第122位氨基酸残基。     

农民资金互助合作社对农业支持力度的调查研究——以江苏省南京市竹镇为例

以南京市六合区竹镇农民资金互助合作社为例,通过问卷调查获取数据,研究农民资金互助合作社贷款对于农业生产的支持力度,建立Probit模型,分析个体特征、家庭经济特征、贷款资金等方面因素对农民贷款用途意愿的影响.结果表明,资金互助合作社贷款投向偏好受农户受教育程度、是否从事农业生产等因素影响显著,合作社方面更偏好于贷款给受教育程度高、从事农业生产的社员.据此提出了促进资金互助合作社发展的针对性建议.     

XT稠油乳状液特性试验

利用管流试验装置和偏光显微镜系统，对XT稠油乳状液特性进行了试验研究。试验结果表明，XT稠油乳状液为W／O／W型多重乳状液，常温下添加800mg／L乳化剂，降粘效果和稳定效果较好，剪切流量对乳状液的稳定性影响明显，剪切流量增大时，稳定性增强。     

天津滨海新区湿地景观格局变化研究

以天津滨海新区湿地景观为主要研究对象,基于ETM/TM遥感及非遥感数据,以1999～2007年为时间尺度,以滨海新区新的行政区划为空间（尺度）范围开展景观格局变化研究。结果表明,湿地景观变化的主要特征是自然湿地和农用地呈减少趋势,盐田、养殖区、建设用地面积有明显增加。整体景观的形状均向着简单化和规则化的方向发展;随着人口与社会经济的发展,人类对景观过程的干预能力也不断提高。     

输气管道气体置换混合长度变化规律研究

分析了管内二元气体的混合机理,对不同流速影响混合长度规律的三维数值模拟进行了研究。结果表明,在置换初始阶段,混合长度增长速率加大,随着置换距离的增加,增长速率减小;混合区浓度在轴向上为非对称分布,呈"头短尾长"特征;流速是置换的重要控制参数,湍流时的混合长度小于层流,但是进入湍流状态后,提高流速对减少混合长度的作用逐渐减弱。     

几个板栗优系生长结实特性的调查分析

对高接后３ａ，综合性状优良，品种、产地与成熟期均不相同的６个板栗优系的生长结实特性进行了调查与分析，明确了板栗优系生长结实的基本特性，结果母枝粗度和结果枝粗度、数量、着生部位与雌花序数的关系，为板栗良种选育和丰产栽培提供了一定的理论依据。     

柴油机燃用生物质燃油--柴油混合燃料燃烧特性的研究

在测定生物质燃油物理性能的基础上,将生物质燃油和柴油做各种配比,最后筛选出了生物质燃油柴油(体积比)=19的混合燃料与纯柴油进行了台架对比试验.结果表明在发动机结构不变的情况下,燃用混合燃料1和混合燃料2是可行的,与纯柴油相比节油效果显著,节油率可分别达11.7%和6.6%,并有效降低了柴油机的排放污染,CO2含量分别降低了7.1%和4.5%.     

民国时期乌鲁木齐地区的隐地初探

通过对所收集的相关档案与田野调查资料的详细梳理,本文发现民国时期乌鲁木齐地区普遍存在着隐地现象。针对此种现象出现的原因及政府所采取的治理措施等方面进行了初步探讨,结果显示:隐地不仅大量存在,而且还成为地方官员攫取民间财富的一种手段和吏治贪腐的源泉,造成了地方财政流失,使得本来就左支右绌的地方财政更是雪上加霜。尽管政府采取了一些相关措施,力图杜绝隐地发生及由此而产生的纠纷,但腐败无能新疆政府及上行下效的各级地方官员根本不可能根除这一顽疾。     

麻疯树油对几种植物病原真菌的抑制活性

以植物病原真菌水稻稻瘟病菌、玉米纹枯病菌、玉米弯胞病菌、小麦赤霉菌、墨入霉菌、绿色木霉菌为供试菌,检测了麻疯树油的抗真菌活性.半抑制浓度(IC50)、最低抑制浓度(MIC)、最低杀菌浓度(MBC)值显示,麻疯树油对水稻稻瘟病菌的抑制作用最强,处理组菌丝生长量减少,孢子萌发受到抑制.     

葫芦岛地区寒潮发生特征及成因分析

基于1960~2009年葫芦岛地区4个气象观测站的逐日气象观测资料,利用寒潮蓝色和黄色预警信号的发布标准将其分类,分别统计分析了其时间和空间的分布特征。结果表明,葫芦岛地区寒潮发生的月份从当年的9月一直到次年5月均有可能发生,出现寒潮最多的月份是10和11月,最少的月份是5月,这主要与气候的季节性转换有关;寒潮发生次数最多时段是20世纪60年代,随着平均（最低）气温的升高,达到寒潮蓝色预警标准的次数呈减少趋势,达到寒潮黄色预警标准的寒潮发生次数与气温的变化不具有明显的相关性。从地域分布来看,出现寒潮次数最多的地方是建昌县,最少的地方是绥中县,主要受下垫面、纬度和海拔高度等因素的影响和制约。     

设计从研究场所开始--遵化市小河公园景观设计

笔者针对景观行业目前存在的过分强调视觉效果而无视用地特点,将主观设计强加于用地的现象,以小河公园设计的构思为线索详细阐述用地研究对于设计的重要作用。