不同毛色獭兔皮肤中黑色素沉积及毛囊发育规律

旨在研究不同毛色成年獭兔在毛囊再生过程中皮肤黑色素沉积以及毛囊发育规律。选用2月龄黑色、白色、青紫蓝色、海狸色、蛋白青色和蛋白黄色獭兔各3只,分成6组,定期采集不同生长时期(拔毛后第7天、14天、21天、28天和35天)的皮肤组织,制作石蜡切片。利用光学显微镜观察不同时期皮肤中黑色素含量及毛囊生长情况,并利用Simple western全自动蛋白表达分析技术检测黑色素合成的限速酶-酪氨酸酶(Tyrosinase,TYR)在拔毛后不同时期獭兔皮肤组织中的蛋白表达水平。结果发现,拔毛后7～21 d,毛囊处于生长期;21～28 d,毛囊由生长期进入退化期;在35 d左右时,毛干脱落,毛囊处于休止期。不同毛色獭兔的毛囊均分布在皮肤真皮层中,且不同时期毛囊在真皮层中的深浅不同;不同毛色獭兔皮肤组织在不同时期黑色素含量不同,均在14～21 d黑色素沉积量达到最高,28～35 d时,沉积量逐渐减少;TYR蛋白在不同时期的不同毛色皮肤组织中均表达,且均在21 d时表达水平最高。由此表明,毛囊再发育过程中,经历生长期、退化期和休止期。在不同时期不同毛色獭兔皮肤组织中黑色素含量变化趋势一致,黑色素合成的限速酶TYR在不同毛色獭兔皮肤中蛋白表达水平均最高,与黑色素沉积情况一致。     

金边鲤皮肤黑色素合成及转运相关基因表达分析

[目的]研究影响金边鲤皮肤色素沉着的关键基因及信号通路,揭示其皮肤颜色差异形成的原因,为金边鲤良种培育提供候选基因信息.[方法]基于突变型金边鲤黄色皮肤(Y组)和黑色皮肤(B组)及野生型金边鲤黑色皮肤(W组)的转录组测序数据,筛选分析获得部分共有差异表达基因,利用实时荧光定量PCR检测差异表达基因和黑色素合成相关基因的表达情况,并分析各基因间的相关性.[结果]依据转录组数据筛选获得ACT3、MYH2、TPM1、TPM2和TPM3共5个来源于心肌肾上腺素信号通路及与细胞动力相关的基因;除ACT3基因外,其余4个基因(MYH2、TPM1、TPM2和TPM3)在Y组皮肤中的相对表达量均显著低于B组和W组(P<0.05,下同),与转录组分析的差异基因表达趋势一致.MC-1R、TYR、TYRP1和TYRP2等4个黑色素合成相关基因在金边鲤皮肤中的表达情况为:B组皮肤中MC-1R基因的相对表达量显著高于Y组和W组;TYR、TYRP1和TYRP2基因在3组皮肤中的相对表达量排序均为W组>B组>Y组,其中W组的相对表达量显著高于B组和Y组.相关性分析结果显示,MC-1R和TYR基因与ACT3、MYH2、TPM1、TPM2和TPM3基因呈显著或极显著(P<0.01)正相关,而TYRP1和TYRP2基因与这5个差异表达基因均无显著相关性(P>0.05).[结论]ACT3、MYH2、TPM1、TPM2和TPM3基因及其所在的心肌肾上腺素信号通路可能影响黑色素合成与运动,且与黑色素合成相关基因存在相关性,可作为金边鲤体色变异研究中的标记基因.     

斑马鱼性腺的荧光组织学观察

【目的】探索斑马鱼性腺经不同染色剂染色后在不同激发光激发下的荧光特性。【方法】以斑马鱼性腺为材料，用Bouin's液固定，石蜡切片未经染色或单染伊红、单染苏木精、HE染色后，分别在白光（明场）、绿色激发光、蓝色激发光和紫外激发光下观察斑马鱼性腺的荧光特性。【结果】未染色的斑马鱼性腺组织切片，经不同激发光激发后，可观察到自发产生较弱的荧光；而以单染伊红、单染苏木精或HE染色后，经不同激发光激发，斑马鱼性腺中的生殖细胞和体细胞分别呈现不同的荧光特性，且不同染色切片经相应的激发光激发后所发出的荧光及细胞结构的清晰度均存在明显差异。【结论】将组织学技术中最常用的苏木精和伊红染色方法与荧光技术、荧光观察结合起来，可更简易而快速区分不同细胞类型、不同细胞周期等。     

斑马鱼性腺的荧光组织学观察

【目的】探索斑马鱼性腺经不同染色剂染色后在不同激发光激发下的荧光特性。【方法】以斑马鱼性腺为材料,用Bouin＇s液固定,石蜡切片未经染色或单染伊红、单染苏木精、HE染色后,分别在白光（明场）、绿色激发光、蓝色激发光和紫外激发光下观察斑马鱼性腺的荧光特性。【结果】未染色的斑马鱼性腺组织切片,经不同激发光激发后,可观察到自发产生较弱的荧光;而以单染伊红、单染苏木精或HE染色后,经不同激发光激发,斑马鱼性腺中的生殖细胞和体细胞分别呈现不同的荧光特性,且不同染色切片经相应的激发光激发后所发出的荧光及细胞结构的清晰度均存在明显差异。【结论】将组织学技术中最常用的苏木精和伊红染色方法与荧光技术、荧光观察结合起来,可更简易而快速区分不同细胞类型、不同细胞周期等。     

牦牛脾脏的解剖学和组织学研究

为了解身处特殊生存环境的牦牛脾脏的结构特征,采用解剖学和组织学的方法分别对10头成年牦牛的脾脏进行了观察,同时对牦牛脾脏的长度、宽度、厚度、质量以及被膜厚度、小梁面积、脾小结数量和动脉周围淋巴鞘面积等指标进行了测量、统计与分析.结果表明:牦牛脾脏呈扁平的长椭圆形,中间厚,两边薄,其平均长度、宽度、厚度和质量分别为(42.9±3.16)cm、(9.6±0.732)cm、(1.6±0.185)cm、(407.3±114.48)g,脾脏被膜厚度为(316.16±32.3)μm,脾小梁和动脉周围淋巴鞘的面积分别为(5.29±0.36)×105μm2、(7.42±1.9)×104μm2,脾小结的平均数量为(15.2±9.5)个.牦牛脾小结的分布密度大,与动脉周围淋巴鞘界限不明显;脾窦呈规则的长条状,腔隙大,周围分布巨噬细胞.     

大通牦牛皮肤发育规律的研究

[目的]探讨大通牦牛的皮肤发育规律。[方法]采用组织学方法对4个年龄段（1日龄、30日龄、180日龄和成年牦牛）大通牦牛的皮肤组织结构进行研究。[结果]4个年龄段大通牦牛的皮肤均表现为表皮薄、真皮特厚的特点,且真皮层内毛细血管较少,表皮层内含大量色素细胞;4个年龄段大通牦牛的全皮厚均表现为出生后至30日龄逐渐变厚、至180日龄时又变薄、至成年时又变厚的一种变化趋势。[结论]为深入了解大通牦牛皮肤适应高原恶劣环境的组织结构特点提供了理论依据。     

大通牦牛皮肤发育规律的研究

[目的]探讨大通牦牛的皮肤发育规律。[方法]采用组织学方法对4个年龄段（1、30、180日龄和成年牦牛）大通牦牛的皮肤组织结构进行研究。[结果]4个年龄段大通牦牛的皮肤均表现为表皮薄、真皮特厚的特点,且真皮层内毛细血管较少,表皮层内含大量色素细胞;4个年龄段大通牦牛的全皮厚均表现为出生后至30日龄逐渐变厚、至180日龄时又变薄、至成年时又变厚的一种变化趋势。[结论]为深入了解大通牦牛皮肤适应高原恶劣环境的组织结构特点提供了理论依据。     

半野血牦牛及普通家养牦牛鲜肉氨基酸成分分析

为了研究阿里地区改则县半野血牦牛与家养普通牦牛之间肉质特性差异,促进当地牦牛产业健康持续发展,对当地16头牦牛进行肌肉化学性质测定。结果表明,半野血牦牛鲜肉肉质理化性质总体上与当地家养型牦牛鲜肉肉质理化性质无显著性差异(t=0.238 1df=7,P>0.05),但是半野血公牦牛各理化性质均优于其他类型,而半野血母牦牛各理化性质均弱于其他类型。总体上讲,半野血牦牛与家养牦牛必需氨基酸与总量氨基酸的比值EAA/TAA分别为40.69和40.75,均高于FAO/WHO模式提出的标准(40%),说明2个品种牦牛肉内蛋白质均为优秀蛋白质,营养价值显著。     

两种间接测定生长牦牛采食量方法比较

舍饲条件下，对１－１．５岁和２－２．２５岁生长牦牛应用称重法和４当时（ｍｏｌ／Ｌ）盐酸不溶灰分（４Ｎ－ＡＩＡ）法测定采食量。结果表明，称重法高于４Ｎ－ＡＩＡ法所测采食量（Ｐ＜０．０１）。两种方法所测采食量均低于实际采食量（Ｐ＜０．０１），但均与实际采食量存在直线回归关系。     

内皮素受体A在不同毛色羊驼皮肤中的分布

利用免疫组织化学技术对不同毛色羊驼皮肤中的内皮素受体A(EDNRA)的分布进行定位分析,并根据其在不同毛色羊驼皮肤中的差异性表达分析其功能。免疫组织化学结果显示,EDNRA在羊驼皮肤的毛乳头、毛根鞘及表皮细胞中均有表达;棕毛组和白毛组皮肤相比较,仅在棕毛组的毛根鞘细胞处的表达显著高于白毛组(P<0.05),其余2个部位处的表达差异不显著(P>0.05)。实验结果提示,EDNRA在不同毛色羊驼皮肤的毛根鞘部存在表达差异,表明其与黑素细胞的形成相关,推测其可能参与不同毛色的形成。     

c-myc蛋白在不同毛色羊驼皮肤中的定位及表达

为了探索c-myc蛋白在羊驼皮肤中的定位及表达情况,以不同毛色的成年羊驼为研究对象,采用免疫组织化学方法检测c-myc蛋白在羊驼皮肤组织中的表达和定位.结果显示,c-myc在羊驼皮肤毛囊毛球部细胞中呈阳性表达,根据光密度值分析得出c-myc在棕色羊驼毛囊中显著表达,其相对表达量是白色羊驼的5.51倍.研究表明c-myc可能参与羊驼毛色形成.     

应激模式对不同品种肉鸡肉色的影响

采用2×3二因素随机区组试验设计,探讨了在相同日龄屠宰及相同生长周期屠宰条件下适温自由采食、适温限饲和高温自由采食3种应激模式对AA肉鸡和北京油鸡肉色造成的差异。结果表明:按相同日龄屠宰时,2个品种肉鸡之间胸肌亮度、红度、黄度均差异极显著;3种应激模式之间的亮度、红度、黄度差异均不显著。按相同生长周期屠宰时,2个品种肉鸡之间的亮度、红度差异极显著,黄度差异不显著;3种应激模式下的亮度差异显著,红度、黄度差异不显著。     

内皮素3对不同毛色绵羊黑色素细胞的影响

【目的】探索内皮素3(EDN3)对来源于不同毛色体外培养的黑色素细胞产生黑色素作用机制及差异的影响。【方法】体外培养不同毛色皮肤来源的黑色素细胞,通过MTT法检测不同细胞在EDN3影响下的增殖率,分别提取两种细胞的总RNA和总蛋白,总RNA经反转录合成c DNA,采用实时荧光定量PCR方法检测EDN3对两种细胞内EDNRB、NRas及TYR在m RNA水平相对表达量的影响,总蛋白通过Western blot方法检测EDN3对两种细胞内EDNRB、NRas及TYR在蛋白水平的表达量是否发生变化,结果均使用SPSS19.0软件进行差异显著性分析。【结果】MTT法测得EDN3对黑白两种来源的黑色素细胞的增殖均产生促进作用,实时荧光定量PCR结果显示添加EDN3的白色来源细胞内EDNRB m RNA的相对表达量是正常细胞组的1.7992倍,NRas是正常细胞组的1.8536倍差异极显著(P0.01),但TYR m RNA的相对表达量未发生明显变化;添加EDN3的黑色来源细胞内EDNRB m RNA的相对表达量是正常细胞组的2.2512倍,NRas是正常细胞组的1.3859倍,TYR是正常细胞组的15.5710倍差异极显著(P0.01);Western blot结果显示添加EDN3的白色来源细胞内EDNRB蛋白表达量是正常细胞组的3.0827倍差异极显著(P0.01),NRas是正常细胞组的1.2936倍差异显著(P0.05),TYR蛋白表达量未发生明显变化;添加EDN3的黑色来源细胞内EDNRB蛋白表达量是正常细胞组的3.9800倍差异极显著(P0.01),NRas是正常细胞组的1.3658倍差异显著(P0.05),TYR是正常细胞组的1.8498倍差异显著(P0.05)。【结论】EDN3促进白色来源的黑色素细胞增殖但对色素合成的限速酶TYR未产生促进作用;EDN3促进黑色来源的黑色素细胞增殖并可能促进黑色素生成。     

酪氨酸酶在不同被毛颜色羊驼皮肤组织中的表达与定位

【目的】研究酪氨酸酶(tyrosinase,TYR)在不同毛色羊驼皮肤组织中的表达与定位,为揭示羊驼被毛颜色形成的机制奠定基础。【方法】采用半定量RT-PCR方法检测TYR mRNA在不同毛色羊驼皮肤组织中的相对表达量,采用免疫组织化学技术对TYR在羊驼皮肤中的表达进行定位。【结果】不同毛色羊驼皮肤组织中均有TYR基因mRNA的表达,有色被毛皮肤组织中TYR的基因mRNA表达量显著高于白色被毛组织的表达量;在有色被毛皮肤组织中,TYR阳性反应区主要集中于毛球部位,即毛根成形部;而白色被毛组织中,TYR阳性反应区主要位于毛根壶腹部及膨大部,即毛根永久部。【结论】综合分析TYR基因mRNA表达量及蛋白定位结果可知,TYR是成熟黑色素细胞的标记分子之一,羊驼毛色形成取决于成熟黑色素细胞在毛囊组织中的相对数量及分布部位。     

LEF1基因在巴什拜羊不同毛色皮肤组织中的DNA甲基化及mRNA表达水平分析

【目的】分析LEF1基因在红棕色与青灰色巴什拜羊皮肤组织中DNA甲基化与mRNA的表达水平。【方法】运用BSP(亚硫酸盐修饰后测序PCR)与RT-RCR(实时荧光定量PCR),检测不同毛色巴什拜羊皮肤组织LEF1基因启动子区的甲基化水平与mRNA表达量。【结果】在红棕色巴什拜羊皮肤组织中的LEF1基因启动子区的甲基化水平高于青灰色的甲基化水平,且二者甲基化CpG位点不同,二者呈显著的负相关(P< 0.05)。【结论】DNA甲基化水平对红棕色与青灰色巴什拜羊的毛色形成具有调节作用,可作为一个候选的巴什拜羊毛色遗传标记。     

牦牛胚胎皮肤及其附属物形态发生规律

通过胚胎组织切片及常规染色发现,胚胎期第35天已经初步分化形成皮肤,随后表皮经历复层化,真皮经历胞外基质纤维堆积,形成哺乳动物典型皮肤结构。毛囊形态发生开始于胚胎期第75天,经历基板形成、毛芽、毛钉和毛囊分化成熟几个主要阶段。初级毛囊形成过程中伴随几波次级毛囊发生,最终形成由3种不同毛囊类型组成,呈单毛囊散在分布的毛被结构。皮脂腺和汗腺的发育伴随毛囊发生而发生,经历形态发生和分化成熟过程,最终形成毛囊-皮脂腺-汗腺单位。牦牛皮脂腺和汗腺分布于初级和次级毛囊,这种广泛分布特征体现了其环境适应性。     

不同地区牦牛乳营养成分比较研究

[目的]比较不同地区牦牛乳营养成分,为牦牛乳的进一步开发利用提供理论基础。[方法]对采自甘肃天祝、甘南玛曲和青海天峻3个地区,以及甘肃天祝3个牧区共150头份牦牛乳进行常规营养成分分析,包括检测乳蛋白,乳脂肪,全脂固体,非乳脂固体和乳糖含量,以及乳密度,冰点和酸度的测定。[结果]3个地区的牦牛乳脂肪含量和乳蛋白含量均存在显著差异,随着牦牛所处地区海拔的升高,其乳蛋白和乳脂肪含量呈现明显上升的趋势;而全脂固体、非乳脂固体、乳糖、冰点、密度和酸度的变化无明显规律。3个牧区的牦牛乳蛋白,乳脂肪以及全脂固体含量差异不显著,其非乳脂固体、乳糖、冰点和密度呈现不规律变化。[结论]海拔高度对牦牛乳的乳蛋白含量以及乳脂肪含量有一定的影响,海拔越高,其乳蛋白和乳脂肪含量越高。