胸膜肺炎放线杆菌对仔猪的感染试验

用作者分离鉴定的胸膜肺炎放线杆菌感染仔猪,临床特征为:呼吸困难,食欲不振,体温升高;病理解剖学变化为:胸腔有大量的积液,心包增厚,并且在肺脏和胸膜粘连胸膜增厚,肺脏萎缩,病灶区呈暗红色,轮廓清晰;病理组织学变化为:肺脏、肝脏和肾脏脉血管均有扩张出血,组织发生坏死.     

猪放线杆菌SHLI株的分离鉴定

从某猪场病死猪肉样变肺脏和严重出血的心脏、肝脏、肾脏及肠系膜淋巴结中分离到一株革兰氏阴性球杆菌。此菌大小０３５ ～０５ ×０５ ～１５μｍ , 单在、成双或短链状。菌落与琼脂有粘连性, 绵羊血琼脂平板上呈β溶血, 能生长于麦康凯琼脂上。发酵碳水化合物产酸不产气, 不发酵甘露醇、卫茅醇和肌醇, 能水解马粟苷和马尿酸钠, 尿酶、硝酸盐还原试验阳性, 不产生靛基质。鉴定为猪放线杆菌（ Ａｃｔｉｎｏｂａｃｉｌｌｕｓｓｕｉｓ） , 并将其定名为猪放线杆菌 Ｓ Ｈ Ｌ Ｉ株。其对小鼠和仔猪有强的致病性, 对豚鼠的致病性较弱。     

猪链球菌2型引致脑炎及败血症的豚鼠模型

选用不同日龄的健康豚鼠 132只 ,分组经不同途径接种对猪具有致病性的猪链球菌 2型江苏分离株 HA980 1,引致脑炎及败血症 ,建立了动物模型。试验表明 ,小于 2 4日龄提前断奶的豚鼠对该菌株较易感 ,最佳感染途径是皮下注射 ,腹腔、鼻腔次之。感染豚鼠表现出典型脑炎的临床症状及病理变化。经重复试验测得该菌株对豚鼠的 L D50 为 5 .5× 10 6cfu,从感染死亡豚鼠脑脊液、大脑、血液及各实质器官均可分离出该病原菌 ,与仔猪自然感染情况相似。该动物模型的建立为进一步探究猪链球菌 2型感染的体内动态分布、感染机制、毒力因子及免疫应答奠定了基础     

红霉素与四环素耐药基因在猪链球菌临床分离株中的检测

为了解临床分离的48株猪链球菌对大环内酯类药物及四环素耐药基因的分布,用微量稀释法测定48株临床分离的猪链球菌对大环内酯类、四环素、β-内酰胺类及头孢类9种抗生素的药物敏感性,建立PCR方法对耐药菌株大环内酯类耐药基因ermA/B/C、mefA/E、msrD、mphB、23S rRNA,L4,L22和四环素耐药基因tetM、tetO、tetL、tetK及与Tn916转座子相关的int和xis基因进行检测。结果表明,31株2型猪链球菌中大环内酯类药物耐药率为3.23%,17株9型猪链球菌红霉素耐药率为88.24%,泰乐菌素、磷酸替米考星、阿奇霉素的耐药率均为70.59%。48株猪链球菌对四环素均耐药,但对青霉素、阿莫西林、头孢曲松钠、氨苄西林均敏感。大环内酯类耐药基因主要以ermB为主,占75%(12/16),mefA/E、msrD占25%(4/16),16株红霉素耐药菌株中,tetM、tetO、int、xis的检出率分别为25%(4/16)、62.5%(10/16)、31.25%(5/16)和31.25%(5/16),没有检测到ermA、ermC、mphB、tetL、tetK。所有红霉素耐药菌株均未检测到23S rRNA、L4和L22突变。     

猪传染性胸膜肺炎放线杆菌PCR检测试剂盒的研制

根据GenBank中猪传染性胸膜肺炎放线杆菌apxⅣA基因序列,设计了1对引物,通过对PCR反应条件进行优化,研制了检测猪传染性胸膜肺炎放线杆菌的PCR试剂盒。该试剂盒扩增的阳性条带为600 bp,特异性与敏感性结果显示,该PCR检测试剂盒的最低核酸检测量为50 CFU/mL,而对金黄色葡萄球菌、链球菌、多杀性巴氏杆菌、鼠伤寒沙门氏菌、副猪嗜血杆菌、大肠杆菌的扩增结果均为阴性。-20℃至少可保存12个月,且重复性良好。应用该PCR试剂盒对41份临床样本进行了检测,其PCR检测结果与细菌学检测结果相一致。结果表明,猪传染性胸膜肺炎放线杆菌PCR检测试剂盒能够对APP临床样品进行快捷、灵敏、准确的检测。     

2型猪链球菌的血清学鉴定

本试验首次证实了２型猪链球菌在我国的存在，采用玻片凝集、琼脂扩散及毛细管沉淀等３项试验，对１９９０年以来广东某猪场断奶仔猪暴发流行的败血症、脑膜炎及关节炎病猪中分离的１５株链球菌进行了血清学鉴定。结果表明：１５株链球菌均为２型猪链球菌；用高压法提取抗原进行沉淀反应，其结果比酸热法提取抗原具有简便、敏感、特异性强的特点。     

头孢喹肟在猪呼吸道感染中应用的研究进展

呼吸道疾病严重威胁畜禽养殖业的发展,导致动物生长缓慢,使发病率和死亡率大幅升高,造成巨大的经济损失。胸膜肺炎放线杆菌、多杀性巴氏杆菌、链球菌、副猪嗜血杆菌等是诱发猪呼吸道感染的常见病原菌。头孢喹肟为第4代头孢菌素类动物专用抗生素,具有抗菌谱广、吸收速度快、达峰时间短、生物利用度高、对哺乳动物毒性低及对β-内酰胺酶稳定的特点,能有效治疗猪呼吸道类疾病,防止耐药性的产生。文章阐述了头孢喹肟的理化特性、杀菌机理、药动学特征等,并通过比较头孢喹肟在不同动物体内的药学参数表明头孢喹肟在猪体内达峰时间短,达峰浓度高,消除半衰期较长,能迅速发挥高效的抗菌作用,且能维持一定时间的抗菌效果;系统地介绍了头孢喹肟对猪呼吸道主要致病菌的体外抗菌活性及临床治疗效果,发现呼吸道临床病原菌对头孢喹肟敏感性高,临床应用前景广。目前头孢喹肟在临床应用存在一些问题,不合理使用会导致其出现耐药性,通过PK-PD同步模型的研究及耐药判定标准的建立,可为该药的合理应用提供科学依据。     

胸膜肺炎放线杆菌菌影疫苗免疫仔猪前后差异表达基因的鉴定与分析

为获得胸膜肺炎放线杆菌(APP)菌影诱导的仔猪淋巴细胞差异表达基因,本研究应用代表性差异分析技术构建APP菌影免疫前后正、反两个外周血淋巴细胞cDNA差减文库,并对文库中的差异基因进行克隆、测序和生物信息学分析.试验结果表明,正向文库中获得11个表达丰度上调的基因,其中7个基因与已知基因具有相似性,4个为未知新基因,经进一步功能注解发现,正向文库功能基因包括免疫信号传导相关蛋白RhoE、防御相关蛋白糖基转移样酶-1、上皮膜蛋白2、白介素-17和肿瘤免疫相关的周期素依赖性蛋白激酶抑制因子3等,这些功能基因表达丰度升高,可能有助于机体建立抗APP的免疫应答.     

广东省1株猪2型链球菌的分离鉴定及部分生物学特性研究

为确诊引起广东省某规模化猪场保育仔猪发生死亡的病因,本试验采集病猪肝脏、脾脏、心脏、脑、关节液和淋巴结等病料进行细菌分离,并对分离菌株进行纯化培养、菌落形态观察、革兰氏染色、形态学观察、生化试验,用血清型特异性引物进行PCR扩增,并进行毒力基因检测、药敏试验、生长曲线测定及动物试验。结果显示,分离菌株在成牛血清琼脂平板上呈圆形、灰白色、表面光滑、边缘整齐的菌落,镜检为革兰氏阳性球菌,呈链状排列。该菌株的生化试验结果符合链球菌的特征,PCR扩增结果显示猪链球菌保守基因片段（gdh和gapdh）和猪2型链球菌特异的cps2J基因片段均为阳性,表明该分离菌株为猪2型链球菌。毒力基因检测结果表明,该菌株毒力因子基因型为gdh⁺/gapdh⁺/epf⁺/mrp⁺/sly⁺/orf2⁺/fbps⁺。分离菌株用营养肉汤培养6 h达到对数生长期,培养10 h的菌液D_{600 nm}值为0.310。药敏试验结果表明,该菌株对青霉素、阿莫西林、阿莫西林-克拉维酸钾等药物敏感,但对强力霉素耐药。动物试验结果表明,感染分离株的BALB/c小鼠未出现死亡且无明显临床症状,毒力较低。本研究为该猪场链球菌病的防控提供了重要参考信息。     

多重耐药胸膜肺炎放线杆菌GD2107株全基因组测序及生物信息学分析

【目的】通过对多重耐药胸膜肺炎放线杆菌(Actinobacillus pleuropneumoniae,APP)GD2107株进行全基因组测序及生物信息学分析,丰富APP基因组数据库信息;构建基于ApxⅣ基因的系统进化树,分析该菌株的进化关系,为探索APP致病机制和临床防控猪传染性胸膜肺炎(porcine contagious pleuropneumia, PCP)提供参考。【方法】通过药敏试验测定分离菌株的耐药谱;采用全基因组测序技术(whole genome sequencing, WGS)对细菌DNA进行全基因组测序,分别利用Illumina NovaSeq、PacBio SequeI测序平台对全基因组测序结果进行基因功能注释及生物信息学分析(包括基因组基本信息、功能元件分析及亚系统分析等);基于ApxⅣ基因构建系统进化树。【结果】药敏试验结果显示,GD2107菌株对青霉素、头孢拉定(先锋Ⅵ)、卡那霉素等14种抗菌药均耐药。对GD2107株全基因组测序得到1条大小为2 271 987 bp的环状染色体(GC含量为41.21%)和2个大小分别为5 027和3 497 bp的环状质粒...     

An outbreak of septic endometritis in the Arctic blue fox (Alopex lagopus) caused by Clostridium carnis

An outbreak of endometritis and septicaemia in farms that raise Arctic blue foxes is described. Eleven animals from eight different farms were examined, most of them pregnant or with newly delivered litters. Pathological examination indicated inflammation of the uterus, and focal necrotic changes in the liver. In some animals evidence of hemorrhaging was found in the anterior part of the small intestine. Bacteriological examination revealed abundant growth from different organs of the animals of a pure culture of a small, slender, Gram-variable, sporeforming rod, which was identified phenotypically as aerotolerant Clostridium carnis. This identification was confirmed by DNA hybridization. The organism caused death in mice 1–2 days after intraperitoneal inoculation, and killed an Arctic blue fox which was inoculated intracervically. Two foxes, pretreated with diethyl-stilboestrol, became seriously ill after intrauterine inoculation, but survived. The spontaneous outbreak of the disease was characterized by sudden onset of septicaemia with few or no clinical symptoms before the animals succumbed.     

广东省猪传染性胸膜肺炎放线杆菌分离鉴定及耐药表型和耐药基因检测与分析

【目的】了解广东省部分规模化猪场引起猪传染性胸膜肺炎(PCP)的病原菌猪传染性胸膜肺炎放线杆菌(APP)的耐药表型和耐药基因携带情况,并分析比较其相关性,为有效防控该病提供理论依据。【方法】将2019-2021年从广东省不同地区规模化猪场采集的疑似猪传染性胸膜肺炎病死猪病料通过病原分离培养、革兰氏染色、生化试验、PCR扩增等方法进行病原菌分离鉴定和测序分析,随后对分离株进行药敏试验并通过PCR检测其耐药基因,确定其耐药表型和耐药基因的携带率,分析比较两者的一致性。【结果】分离菌需在含有血清和NAD的培养板中生长;革兰氏染色结果显示分离菌为红色,可判定为革兰氏阴性细菌,通过生化试验、PCR结果及测序分析确定分离到20株APP,且没有表现出明显的地域特性。所有菌株均呈现多重耐药且约50%菌株呈8重及以上耐药;其中对四环素类、磺胺类、氯霉素类和大环内酯类药物耐药率较高,分别为77.5%、65.0%、55.0%和48.8%;进一步分析发现,分离菌主要对四环素、磺胺异噁唑、氟苯尼考和林可霉素等抗菌药物耐药,而对头孢唑啉(先锋Ⅴ)和阿奇霉素敏感。23种主要耐药基因中共检测到bla_CMY、aph(2″)-Ⅰb、sul1、sul2、sul3、tetA、tetB、tetM、tetO、tetR和floR这11种耐药基因,携带率分别为85%、85%、50%、60%、75%、30%、100%、85%、100%、70%和80%;未检测到喹诺酮类、大环内酯类和林可胺类相关耐药基因。【结论】从广东省猪群中分离到的APP表现出广泛耐药性,且为多重耐药,耐药基因与耐药表型基本一致,表明耐药基因的携带是细菌对抗菌药物产生耐药的主要原因之一,但也可能存在其他未检测的耐药基因,或存在新的耐药机制。     

猪胸膜肺炎放线杆菌血清型研究进展

猪传染性胸膜肺炎是当前养猪业的主要呼吸系统传染病之一 ,其病原菌是胸膜肺炎放线杆菌 ,血清型多。准确区分此病原菌的不同血清型是研制预防有效疫苗的前提。根据 NAD依赖性 ,本菌可以分为生物 I型和生物 II型 ;采用传统的血清学方法 ,本菌又分为 1 5个血清型。各种血清学方法仍是现阶段对胸膜肺炎放线杆菌开展血清型鉴定的主要手段 ,但不足之处是存在一定程度的交叉反应以及不能对新分离的病原菌进行分型。采用聚合酶链式反应对不同基因进行扩增 ,根据扩增结果进行血清型鉴定的基因分型方法 ,具有准确和特异的优点 ,并可以克服传统血清学方法的不足 ,已经逐渐成为胸膜肺炎放线杆菌研究中的新的分型方法     

亚麻籽油对脂多糖刺激仔猪肝脏Toll样受体4和核苷酸结合寡聚化结构域信号通路关键基因表达的影响

本试验旨在研究亚麻籽油对脂多糖(LPS)刺激仔猪肝脏Toll样受体4(TLR4)和核苷酸结合寡聚化结构域(NOD)信号通路关键基因表达的影响。选取24头断奶仔猪,按体重相近原则随机分为4个组,分别为对照组、LPS组、2.5%亚麻籽油组(2.5%亚麻籽油+LPS)、5.0%亚麻籽油组(5.0%亚麻籽油+LPS),每组6个重复,每个重复1头猪,试验期21 d。试验组注射100μg/kg体重的LPS,对照组注射等量的生理盐水。注射LPS或生理盐水4 h后屠宰仔猪,取肝脏,测定TLR4和NOD信号通路关键基因及相关炎性介质的mRNA表达水平。结果表明:1)LPS刺激显著提高了肝脏肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、环氧酶2(COX2)、热休克蛋白70(HSP70)的mRNA相对表达量(P0.05),2.5%亚麻籽油可显著降低COX2、TNF-α的mRNA相对表达量(P0.05),5.0%亚麻籽油可显著降低TNF-α的mRNA相对表达量(P0.05)。2)LPS刺激显著提高了肝脏TLR4、髓样分化因子88(My D88)、白细胞介素-1受体相关激酶1(IRAK1)、NOD1、NOD2、受体互作蛋白2(RIPK2)、核因子-κB(NF-κB)的mRNA相对表达量(P0.05);2.5%亚麻籽油可显著降低NOD1、NOD2的mRNA相对表达量(P0.05),有降低RIPK2 mRNA相对表达量的趋势(0.05≤P0.10);5.0%亚麻籽油可显著降低NOD2的mRNA相对表达量(P0.05)。这表明LPS刺激导致仔猪发生炎症反应,亚麻籽油可能通过抑制NOD信号通路进而缓解肝脏炎症反应。     

猪链球菌精氨酸脱亚氨酸酶序列分析及其PCR检测

对9株猪链球菌2型重庆分离株的精氨酸脱亚氨酸酶基因进行克隆测序,结果表明该基因长度为1231bp,与Genbank发表的该基因序列相比,核苷酸同源性高于99%,推导的氨基酸同源性高于96%。根据精氨酸脱亚氨酸酶基因的测序结果建立扩增片段长度为237bp的PCR检测方法,35株猪链球菌致病株中,30株精氨酸脱亚氨酸酶基因的PCR检测阳性,有5株精氨酸脱亚氨酸酶基因的PCR检测阴性;14株正常猪扁桃体分离株中,11株为精氨酸脱亚氨酸酶基因的PCR检测阳性,3株为精氨酸脱亚氨酸酶基因的PCR检测阴性;猪链球菌1型、7型、9型、13型、1/2型各一株,均能扩增出精氨酸脱亚氨酸酶基因的片段。