利用薄层细胞培养技术建立‘铺地金’等菊花高效再生体系的研究

以菊花品种‘铺地金’和‘七月桃花’的幼嫩茎段为外植体，从基部至茎尖依次横向切成0．3～O．5mm的薄层，放在添加不同浓度6-BA、NAA的MS培养基上，进行不定芽的诱导，研究不同激素组合和不同薄层部位对不定芽再生的影响，分别以蔗糖和果糖为碳源，考察碳源种类和浓度对玻璃化的影响。结果表明，适宜于‘铺地金’诱导不定芽再生的最佳培养基为MS＋2mg／LBA＋0．5mg／LNAA，再生率达到96．4％，适合于‘七月桃花’诱导不定芽再生的培养基为MS＋2mg／LBA＋0．1mg／LNAA时，不定芽再生率可高达97．9％，适当提高蔗糖浓度可以有效减少薄层组培中的玻璃化现象，而高浓度的果糖会对外植体产生毒害作用。     

玫瑰叶片直接再生及其影响因素

以‘唐白’、‘紫枝’、‘唐红’和‘朱龙游空’4个玫瑰品种为试材研究不同的外植体、暗培养时间和激素组合对玫瑰不定芽直接诱导和植株再生的影响。结果表明:4个玫瑰品种在不定芽诱导培养基上黑暗培养10~15d转入光照培养15~20d,而后转入含有0.5mg/L BA和0.01mg/L NAA的MS培养基光下培养,再生效果最好;不同外植体间存在显著差异,未展开小叶的再生能力最好;不同基因型之间存在显著差异,‘唐白’在添加1.0mg/L TDZ、0.05mg/L NAA的1/2MS培养基中再生率最高,达到70.6%;‘紫枝’和‘唐红’在添加1.5mg/L TDZ、0.05mg/L NAA的1/2MS培养基中再生率最高,分别为47.9%和36.5%;‘朱龙游空’在添加1.0mg/L BA、0.3mg/L TDZ和0.05mg/L NAA的1/2MS培养基中再生率最高,达到60%。黑暗培养对不定芽分化有一定的促进作用,但不利于不定芽再生,‘唐白’、‘紫枝’和‘朱龙游空’的最佳暗培养时间为10d,而‘唐红’的最佳暗培养时间为15d。另外,4个玫瑰品种在添加有IBA 0.5mg/L的1/2MS培养基上生根率最高。     

薄荷茎段不定芽离体诱导影响因素分析及植株再生体系的建立

以薄荷(Mentha haplocalyx Briq.)茎段为外植体,研究激素种类与浓度、外植体位置和品种等因素对不定芽诱导的影响,建立高再生率的薄荷离体培养植株再生体系,并确定2种抗生素的选择压.试验结果表明:激素种类和浓度、外植体位置和品种对薄荷离体不定芽诱导率存在显著影响;适合薄荷离体不定芽再生最佳培养基为MS培养基(添加3.0 mg/L TDZ+ 0.2 mg/L IAA+ 25％椰乳),最佳外植体为薄荷品种73-8的第2至第4节间茎段;潮霉素对薄荷3个品种73-8、68-7和沪-39的选择压分别为4、3、2 mg/L,卡那霉素的选择压分别为50、40、40 mg/L.     

甜瓜‘黄蛋子’子叶再生完整植株研究

为了通过不定芽发生途径建立甜瓜‘黄蛋子’体细胞再生完整植株的技术体系,并了解掌握该品种的再生能力和再生特点,以‘黄蛋子’的幼龄子叶作为外植体,进行了组织培养条件下的再生试验。试验结果表明,在MS+6-BA2.0mg/L不定芽诱导培养基上外植体发出的再生芽(丛)为不定芽来源。58块外植体的不定芽分化频率平均为44.8%,并产生质地、数量不等的愈伤组织。在MS+6-BA0.05mg/L不定芽伸长培养基上,分化的不定芽(丛)能够伸长长大,但存在程度不同的玻璃化现象。在1/2MS+IAA0.5mg/L生根培养基上无根苗发根,生根率可达99%。与相关文献中报道过的其他甜瓜厚皮品种相比较,‘黄旦子’属再生能力弱的品种,但品种内个体之间存在再生能力上的明显差异,通过选择自交技术有可能获得再生能力得到提高的纯化株系。     

吉林省主栽亚麻品种组织培养再生植株

本试验主要选用吉林省主栽亚麻品种进行组织培养,均获得了再生植株。研究结果:吉亚4号无菌苗下胚轴上半部分不定芽诱导率为47%,下半部分不定芽诱导率达到90%;IAA对不定芽状态影响明显,1.0 mg/L为适宜浓度,与0.5 mg/L BA组合外植体玻璃化现象较轻,不定芽诱导率为100%,约2 cm高不定芽转到生根培养基,再生植株移栽成活率为80%。不同亚麻品种诱导不定芽能力差别不大,诱导率均可以达到90%以上,但是不同品种外植体培养过程中玻璃化程度有差异,玻璃化外植体诱导的不定芽呈玻璃化状态,不能正常生长。     

利用绿色荧光蛋白优化辣椒遗传转化体系

【目的】农杆菌介导的辣椒遗传转化较为困难,至今仍未建立高效转化体系。绿色荧光蛋白(GFP)基因是植物遗传转化中常用的报告基因,以GFP为报告基因,优化农杆菌介导的辣椒遗传转化体系。【方法】利用GFP表达系统,统计3个辣椒品种(‘HP’‘8214’和‘L55’)中3种不同外植体(子叶、下胚轴和Flamingo-bill外植体)的不定芽分化率、不定根分化率与荧光阳性率,探究农杆菌侵染浓度、侵染时间、预培养时间和共培养时间等因素对不定芽、不定根分化率及荧光阳性率的影响。【结果】3个辣椒品种的Flamingo-bill外植体不定芽分化率均显著高于下胚轴与子叶外植体,其中‘L55’ Flamingo-bill外植体的不定芽分化率最高、达77.59%,故选用‘L55’ Flamingo-bill外植体进行后续研究。4种农杆菌不同侵染浓度和时间组合下,‘L55’Flamingo-bill外植体均可产生不定芽、不定根及表达GFP的愈伤组织,当农杆菌侵染浓度为OD₆₀₀=0.05,侵染时间为30 min时,不定芽分化率和荧光阳性率最高,分别达48.39%、4.84%。在6种不同预培...     

甜瓜品种‘GT-1’真叶再生体系的建立

以甜瓜薄皮品种‘甘甜一号’(‘GT-1’)为材料,研究了不同生长素对甜瓜真叶外植体不定芽分化的影响以及不同生长素、无机盐和糖浓度对甜瓜生根的影响.结果表明,‘GT-1’在含有MS+6-BA 1.0 mg/L+IAA 0.01mg/L的分化培养基上的不定芽诱导率最高,达95%,诱导真叶外植体分化附加IBA,对不定芽的分化诱导并不明显;在1/2MS+IBA 0.5 mg/L+蔗糖20 g/L的诱导生根培养基上生根效果最好,生根率达97.5%.     

菊花2个品种高效再生体系的建立

以地被菊花2个品种‘铺地金’和‘北林红’的叶片为外植体,以MS为基本培养基,以不同浓度配比的6-BA,NAA为生长调节物质进行离体培养,直接分化出不定芽获得再生植株.试验表明:‘铺地金’叶片外植体再生的最适培养基为MS 6-BA 2.0 mg/L NAA 1.0 mg/L,再生率高达96%,其叶柄在此培养基上的再生率为90%;‘北林红’再生的最适宜培养基为MS 6-BA 1 mg/L NAA 0.5 mg/L,再生率为96%,但其茎段和叶柄在此培养基上不能高效再生.‘铺地金’腋芽增殖的最佳培养基为MS 6-BA 0.5 mg/L NAA 0.01 mg/L,每腋芽外植体平均增殖不定芽数达到5.5个.‘北林红’腋芽增殖的最佳培养基为MS 6-BA 0.5 mg/L NAA 0.05mg/L和MS 6-BA 0.5mg/L NAA 0.01mg/L,腋芽外植体平均增殖不定芽数达到6.3个和5.6个,二者之间的差异不显著.     

‘丰香’草莓叶片再生体系的建立

以草莓(Fragaria ananassa Duch.)主栽品种‘丰香’叶片为外植体,就不同质量浓度生长激素对叶片外植体成活率、愈伤组织、不定芽的诱导率和再生芽生根培养的影响进行了研究,并建立了再生体系.结果表明:MS+1.5 mg/L噻苯隆(Thidiazuron,TDZ)+0.4 mg/L吲哚乙酸(3-indolebutyric acid,IBA)培养基最适于叶片不定芽分化,再生芽在1/2MS+0.1 mg/L IBA培养基上生根效果最好.     

抗生素对梨离体叶片不定芽再生的影响

以沙梨‘金花’和西洋梨‘丰产’两个品种的无菌苗幼叶为试材，研究了卡那霉素、头孢霉素和羧苄青霉素对梨离体叶片不定芽再生的影响。用新梢顶端1～3节新展开的叫‘片制备外植体，分别接种在NN69 BA5mg／L NAA0．3mg／L CH300mg／L的培养墓上，附加不同浓度的抗生素，黑暗处理20d，结果表明：500mg／L的浓度下，头孢霉素完全抑制供试品种叶片的再生；400mg／L的浓度下，羧苄青霉素完全抑制供试品种叶片的再生。丰产和金花对卡那霉素均敏感，5mg／L就极显著的抑制不定芽再生；10mg／L时不定芽不能正常生长，白化死亡，同浓度下供试品种不能分化不定根。     

云南榅桲的薄层培养再生体系建立和多倍体诱导

旨在建立云南榅桲的薄层培养再生体系,并以此为基础进行云南榅桲的多倍体诱导。以云南榅桲茎段薄层为外植体,系统研究各种因素对茎段薄层再生不定芽的影响,以及不同质量浓度秋水仙素对云南榅桲茎段薄层不定芽再生率以及多倍体植株诱导的影响。结果表明,云南榅桲薄层再生不定芽的适宜培养基组合为MS+TDZ 1.5mg·L-1+IBA 0.4mg·L-1+蔗糖30mg·L-1+琼脂7g·L-1,暗培养7d,再生频率最高为35.41%,平均再生芽数2.15。薄层再生苗在生根培养基1/2 MS+NAA 0.3 mg·L-1+蔗糖20g·L-1+琼脂7g·L-1上已经生根。利用薄层再生结合秋水仙素处理诱导出云南榅桲多倍体,经流式细胞仪鉴定,确定获得的多倍体为四倍体植株。     

大豆子叶节高效再生系统的研究

为建立一个大豆子叶节高效再生体系用于大豆的遗传转化,以桂春豆1号、桂早2号、桂夏1号和桂夏豆2号4个大豆品种为材料,子叶节为外植体诱导丛生芽,再生完整植株.实验研究了大豆种子的消毒方法,基因型以及培养过程中植物激素的浓度等影响大豆子叶节再生的因素.结果表明在适宜的条件下,4个大豆品种的丛生芽分化率都可达到90％,丛生芽数基本都在4～6个范围内,4个大豆品种均为子叶节器官发生途径的理想基因型.最适合的种子灭菌方法是双氧水灭菌法;桂春豆1号和桂早2号的适宜芽诱导培养基为B5+ 6-BA 1.6 mg/L+ IBA 0.2 mg/L,桂夏1号和桂夏豆2号为B5 +6-BA 1.0 mg/L +IBA 0.2 mg/L;4个大豆品种的适宜丛生芽伸长培养基为1/2 MS+B5有机+GA3 0.5 mg/L;生根培养基为B5 +NAA0.5 mg/L+ 2.0 g/L活性炭.     

欧李的组织培养

对欧李不同外植体对分化率的影响及不同生很方法的生根效果进行了研究。结果表明，田间自然长出的带叶茎尖净增殖系数显著高于温室促萌茎尖的净增殖系数．其比值为4：1．2，生根生长素（IBA＋NAA）的最适总浓度为1～1．2mg／L，生长素短时间处理生报效果最佳，移栽湿度保持相对饱和，移栽成活率85％。     

4种化合物对离体培养二色胡枝子组织分化的影响

以BADH基因为选择标记基因进行遗传转化最适宜的选择剂、抑菌剂种类和浓度,通过不同浓度NaCl、甜菜碱醛、PEG及甜菜碱醛和NaCl的不同组合等进行胡枝子子叶节分化,茎段增殖以及生根培养,发现NaCl和甜菜碱醛都能抑制二色胡枝子的子叶节分化、茎段增殖和生根,可作为遗传转化中的选择剂。培养基中添加0.8g/L NaCl就能完全抑制二色胡枝子子叶节和茎段增殖,可作为遗传转化过程中子叶节和茎段增殖阶段的选择剂浓度。培养基中添加0.5g/L NaCl能抑制生根,适合作为离体培养生根阶段的选择剂浓度。随着培养基中甜菜碱醛浓度的增加,子叶节分化能力下降,当甜菜碱醛达到1.5g/L时子叶节不再分化,这可作为以甜菜碱醛为选择剂时子叶节分化阶段的最佳筛选。培养基中同时添加NaCl和甜菜碱醛时,NaCl 0.7g/L+甜菜碱醛0.3g/L就抑制了离体培养过程中茎段增殖和生根,比较适合二色胡枝子离体培养时茎段增殖和生根的筛选浓度。对头孢霉素的研究发现:培养基中添加200~300mg/L头孢霉素对离体培养的二色胡枝子子叶节分化影响不大,培养基中添加100mg/L的头孢霉素对离体培养的二色胡枝子茎段增殖和生根无显著影响。     

月季萨蔓莎不定芽的直接诱导和植株再生的研究

 以月季品种萨蔓莎为试材研究不同外植体、叶片位置、暗培养时间和激素组合对月季不定芽诱导和植株再生的影响。结果表明，月季萨蔓莎在含1.5 mg·L－1TDZ和0.05 mg·L－1NAA的MS培养基上黑暗培养8 d后转入含0.5 mg·L－1 BA和0.01 mg·L－1NAA的MS培养基光下培养，再生效果最好，小叶外植体和复叶柄的再生率分别为51.8%和10%。小叶的叶位对植株再生无显著影响，暗培养时间过长，外植体易形成愈伤组织而不利于不定芽的分化，植物生长调节剂中生长素浓度升高易导致愈伤组织形成而影响植株再生。本研究所建立的不定芽直接再生系统可用于该品种的转基因遗传改良研究。     

激素对魔芋球茎愈伤组织诱导和植株再生的影响

以魔芋球茎为外植体,采用附加不同种类和浓度的生长素、细胞分裂素的MS培养基,研究激素对魔芋愈伤组织诱导、生长和分化的影响。结果表明:在适量的生长素配合作用下,6-BA浓度为1.5 mg/L,有利于球茎愈伤组织诱导增殖,浓度增加为2.0 mg/L,则有利于芽的分化;6-BA浓度一定时,生长素浓度较高,愈伤长势旺盛,但分化出苗较慢,生长素浓度偏低,愈伤增殖较慢,但芽分化较快。分析了不同种类激素的作用效果,认为适合花魔芋球茎植株再生的最适培养基是MS+6-BA 1.5~2.0 mg/L+NAA 0.1~0.5 mg/L。     

‘长富2号’红富士苹果离体叶片高效再生不定芽技术研究

以‘长富2号’(Nagafu No.2)红富士苹果试管苗为试材,研究了BA和TDZ组合、不同浓度的TDZ、糖的种类和不同暗培养时间对红富士苹果离体叶片再生不定芽的影响。结果表明:高浓度的TDZ可以有效提高红富士苹果离体叶片再生效率;最适宜叶片再生的糖类为蔗糖,最适宜的暗培养时间为3周,最佳的叶片再生培养基为MS+TDZ 6.0 mg/L+NAA 0.1 mg/L+蔗糖35 g/L+琼脂6.2 g/L。在上述培养条件下,‘长富2号’红富士苹果离体叶片再生率达到100%,平均叶片再生芽数达到10.6个。     

Direct Adventitious Bud Induction and Plant Regeneration of Rosa hybrida Samantha

Effect of explant, site of leaflet, induction period in the dark and combinations of plant growth regulators on direct adventitious bud induction and plant regeneration of Rosa hybrida Samantha was investigated. The results showed that after an induction period of 8 d on MS medium with 1.5 mg L-1 TDZ and 0.05 mg L-1 NAA in the dark and a subculture on MS medium with 0.5 mg L-1 BA and 0.01 mg L-1 NAA under light, the best plant regeneration was obtained and the regeneration frequencies of leaflets and petioles were 51.8 and 10% respectively. There was no significant difference in regeneration ability between leaflets at different sites of the compound leaves, longer time of induction in the dark or high concentration of auxin would cause callus formation, which was disadvantageous for shoot regeneration, and the regeneration frequency was significantly reduced. This regeneration system could be applied for genetic transformation of this cultivar in the future.     

屋顶长生花的离体培养

捅要：为建立屋顶长生花快速繁殖体系,以希腊引种的屋顶长生花肉质叶为外植体,通过组织培养,对影响其愈伤组织诱导、玻璃化苗现象及根、芽分化的几个主要因素进行了研究．结果表明,不同种类激素组合对其愈伤组织形成、芽分化以及根的形成有不同的影响．以MS 2,4-D2．0mg／L 6．BA2．0mg／L为最适诱导愈伤组织培养基;以MS 6-BA2．0mg／L NAA0．2mg／L GA30．4mg／L为最适分化培养基;用于继代增殖的培养基,6-BA的质量浓度为0．3～4mg／L;生根以I／2MS NAA0．2mg／L 1AA1．0mg／L 0．3％活性炭为宜．采用增加光照度、降低培养温度、增加培养基中蔗糖和琼脂质量分数以及加入青霉素等措施能较有效地防止玻璃化苗现象．