驴生殖道支原体的研究 I.莱氏无胆固醇支原体的分离与鉴定

从陕北患流行性阴道子宫内膜炎驴生殖道分泌物中,分离到一株支原体,对其进行了生物学性状,生化特性和血清学鉴定。该分离物在22~37℃ 均能正常发育,菌落呈典型油煎蛋样,在无抑菌剂的培养基上连续传代6次未出现细菌形态。菌体呈多形,能通过G5-6号玻璃滤器,对毛地黄皂苷不敏感,能发酵葡萄糖,不分解精氨酸和尿素。经生长抑制试验和间接荧光抗体试验,确定为莱氏无胆固醇支原体种(Acholeplasma Laidlawii)     

绵羊肺炎支原体贵州分离株的鉴定

【目的】对贵州省疑似绵羊肺炎支原体(Mo)感染山羊病例进行病原确定性诊断。【方法】采集疑似Mo感染山羊肺脏,以支原体专用培养基从其中分离致病支原体,并通过形态学观察、生化试验、血清学试验及分子生物学方法对分离菌株进行鉴定。【结果】分离菌株菌落呈无中心脐圆形凸起,菌体呈多形性,大小在0.2～0.4μm;分离株表现出了与Mo标准株Y98相同的生化特性,在含抗Mo血清培养基中不生长;分离株16SrRNA基因序列与Mo Y98株同源性达99.55%,系统进化树分析与MoGH3-3株进化关系最近。【结论】成功分离到了Mo,为确定本地山羊支原体肺炎病原种类提供了理论依据,并为后续围绕病原进行防控工作研究奠定了基础。     

绵羊肺炎支原体FJ01-CL株的分离和鉴定

为明确福建省某羊场发生的疑似山羊传染性胸膜肺炎病例的病原,利用支原体培养基对肺组织的病原进行分离培养和纯化,通过生化试验和特异性PCR方法进行鉴定,结果显示菌落呈"桑葚状,无中心脐";分离株能发酵葡萄糖,不能水解精氨酸,不分解尿素,美兰还原反应阳性,氯化四氮唑还原反应阳性,血细胞吸附试验阳性,胆固醇需要试验阳性;PCR结果扩增出绵羊肺炎支原体特异大小为361bp的目的片段,将该序列同GenBank中8株绵羊肺炎支原体序列进行比较,结果证明该序列同绵羊肺炎支原体标准株Y-98同源性为98.1%,与地方株MoGH3-3的同源性最高,为98.7%。鉴定结果表明本次分离到的支原体为绵羊肺炎支原体,并命名为FJ01-CL株。本研究首次证明了福建省存在由绵羊肺炎支原体(Mycopalsam ovipneumonia,Mo)引起的羊支原体性肺炎。     

绵羊肺炎支原体的微生物学特性的研究

绵羊肺炎支原体是山羊和绵羊呼吸道中最常见的支原体,引起非进行性肺炎(CNP).2001～2002年对河北省的保定、邢台、邯郸、廊坊的6个种羊场的绵羊、山羊通过微量间接血凝试验(IHA)进行血清学检测,发现绵羊肺炎支原体的自然病例的阳性检出率为84.2%;并且从病羊的肺脏和鼻腔中分离出18株支原体,经过理化特性鉴定与生长抑制试验定型,证明其中12株为绵羊肺炎支原体,6株为精氨酸支原体.     

猪肺炎支原体与猪鼻支原体分离鉴定及鉴别检测

为建立猪肺炎支原体与猪鼻支原体的鉴别诊断方法,对从河南省及周边地区猪场采集的患呼吸道疾病的猪只样品进行支原体的分离培养,针对猪肺炎支原体与猪鼻支原体设计了2对引物,扩增片段大小分别为480 bp和360 bp,对所分离纯化的病原微生物进行了菌落形态观察及分子鉴定。结果显示,分离的病原微生物为支原体,菌落呈典型的"煎蛋样"特征;通过单一PCR扩增反应,分别得到了猪肺炎支原体与猪鼻支原体相应的目的扩增片段。表明分离到了猪肺炎支原体与猪鼻支原体。在单一扩增的基础上,建立了猪肺炎支原体与猪鼻支原体二重PCR反应方法,可同时得到2条目的条带,与单一PCR扩增结果一致。表明建立的二重PCR方法可用于猪肺炎支原体与猪鼻支原体的同时检测和鉴别诊断。     

一株猪肺炎支原体强毒株的分离和鉴定

从猪支原体肺炎病例病料中分离得到1株支原体,对其进行培养试验、代谢抑制试验、PCR鉴定和动物回归试验.分离株攻毒猪后,该猪出现典型的猪支原体肺炎临床症状和病变,证明该分离株为猪肺炎支原体.这为猪肺炎支原体的研究提供了条件.     

猪肺炎支原体的分离方法

为了寻求分离猪肺炎支原体更好的方法,本试验采用剪碎法、研磨法、匀浆法和灌洗法对猪肺组织进行处理,并研究了不同肺脏组织处理方法对猪肺炎支原体活力的影响。结果显示,剪碎法与灌洗法获得的处理液对猪肺炎支原体的影响小于研磨法与匀浆法。采用剪碎法、灌洗法和研磨法对100份猪肺组织进行猪肺炎支原体野毒株分离的结果显示,经PCR鉴定,剪碎法分离到1株猪肺炎支原体,分离率为1%;研磨法分离到7株猪肺炎支原体,分离率为7%;灌洗法分离到2株猪肺炎支原体,分离率为2%。以上结果表明,研磨法获得的组织处理液对支原体活力有一定的影响,但其分离率好于剪碎法和灌洗法。因此,研磨法是一种较好的猪肺炎支原体分离方法。     

福建省羊支原体性肺炎分子流行病学研究

为了解福建羊支原体性肺炎和山羊传染性胸膜肺炎的分子流行情况,于2014-2016年从福建省6个市采集到疑似羊支原体性肺炎或山羊传染性胸膜肺炎病料61份,用支原体目引物、绵羊肺炎支原体、丝状支原体山羊亚种、山羊支原体山羊肺炎亚种、山羊支原体山羊亚种、精氨酸支原体、莱氏无胆甾原体和无乳支原体的特异引物,通过PCR方法进行检测。挑取部分PCR阳性病料进行支原体分离和纯化,用16SrRNA基因通用引物进行克隆测序。结果显示61份样品中检出绵羊肺炎支原体45份(73.77%),检出丝状支原体山羊亚种4份(6.56%),检出莱氏无胆甾原体4份(6.56%),检出精氨酸支原体2份(3.28%)。该研究结果表明福建省发生的类传染性胸膜肺炎是以绵羊肺炎支原体为主的羊支原体性肺炎,为福建省羊支原体性肺炎的有效防治提供了科学依据。     

猪几种支原体部分特性的初步研究

猪肺炎支原体、猪鼻支原体和猪滑液支原体是三种不同性的病原,对猪引起三种不同的疾病.猪肺炎支原体对所有年龄的猪只引起慢性肺炎;猪鼻支原体对3～10周龄猪只,引起多发性浆膜炎和多发性关节炎;猪滑液支原体对10周龄以上猪只引起关节炎.猪絮状支原体和三种支原体(莱氏、粒状、黄色支原体)的病原性尚未确定.为了鉴定我国猪的呼吸道上已分离到的猪支原体的种属,测定其对江苏“太湖猪”的致病性,我们对猪肺炎支原体、猪鼻支原体、猪滑液支原体和不需胆醇的莱氏支原体,在猪肺炎支原体江苏2号液体培养基中的生长特性,对小白鼠、“太湖猪”的致病性、形态大小等作了初步试验和观察.     

牛支原体疫苗候选株的筛选及免疫原性研究

为筛选牛支原体疫苗候选菌株并评价其对新西兰大白兔的免疫原性,本试验从病牛鼻拭子和乳样中分离牛支原体,通过形态学鉴定、活菌滴度鉴定验证和PCR方法进行鉴定;分离鉴定后的牛支原体免疫新西兰大白兔后,进行免疫原性试验。结果表明:筛选得到10株奶牛支原体,选取5株并验证其符合牛支原体的典型特征,其中,BV-01株对其它4株的ELISA效价均高于1:10 667。BV-01株牛支原体有较好的免疫原性,初步证明其可作为牛支原体疫苗候选株。     

河南省猪肺炎支原体感染的流行情况调查

为了对河南省猪肺炎支原体的流行情况进行调查,试验从发生呼吸道疾病的肺中分离鉴定猪肺炎支原体,对疑似猪肺炎支原体的肺组织样品通过液体培养传代、固体培养基培养、吉姆萨染色镜检,PCR扩增,并进行测序比对。结果表明,2017年1—12月从河南省猪场发生呼吸困难的猪的实变的肺脏共采集148份,共分离25株猪肺炎支原体,分离率达16.89%。结果说明猪肺炎支原体在河南省发生呼吸道疾病的猪场中感染率较高。     

贵州省水城某肉牛场支原体肺炎诊治

为了解贵州省水城某肉牛支原体肺炎流行情况,试验结合流行病学调查、临床症状及病原菌分离及鉴定对该肉牛场支原体病进行初步诊断。结果表明,从感病肺样中分离得到的病原微生物具有支原体的典型特征。说明该肉牛场发生的流行病为牛支原体感染引起的牛传染性肺炎。     

猪肺炎支原体山西株的分离与鉴定

研究旨在获得猪肺炎支原体山西地方株,以期补充猪肺炎支原体山西地方株的菌株信息,为山西猪支原体肺炎的诊断及防治提供理论依据。将具有猪支原体肺炎典型病理特征的肺脏剪成米粒大小,放入KM2液体培养基,盲传培养后在固体培养基中纯化培养,用16S rRNA和种特异性基因P36进行PCR检测,对P36扩增结果测序与登录NCBI GenBank的猪肺炎支原体进行同源性比较,并构建系统发育树。结果显示,液体培养基变色提示培养基中含有猪肺炎支原体;菌落中间暗、边缘光滑,呈典型的"煎蛋样",大小0.2μm左右,生理生化特性符合支原体特性;16S r RNA和P36基因经PCR扩增确认分离菌株为猪肺炎支原体,并命名为JZ01株。JZ01株是从山西最近发病且致病性严重的猪肺中分离而来,其不仅能成功适应人工培养基,而且传代生长良好,为潜在的疫苗菌株。     

绵羊肺炎支原体的分离鉴定及其HSP70基因遗传多样性

为探明新疆地区绵羊肺炎支原体(Mycoplasma ovipneumoniae,MO)流行株是否存在遗传多样性,用KM2培养基对塔城地区7个羊场疑似MO感染的肺脏病料进行病原分离,并进行菌落形态、生化试验和分子生物学鉴定。结果表明:15株分离均为MO,菌落呈乳头状,菌体呈多形性;能水解葡萄糖但不能水解精氨酸、尿素,可使美兰牛乳褪色、吸附并引起红细胞溶血;16Sr RNA序列大小为361bp。其中,5株MO HSP70基因的核苷酸同源性为94.1%,氨基酸同源性为93.2%,与MO标准毒株Y98相比,分离株在593位点均插入Gln(谷氨酰胺)。MO新疆分离株已发生遗传变异,存在遗传多样性。     

不同培养基组分对牛支原体生长的影响

为了解不同培养基组分对牛支原体生长的影响,试验选用3种动物血清和4个厂商的琼脂,按照5%、10%、15%的血清浓度依次制备了9种液体培养基,分别进行了牛支原体生长试验;在此基础上,用4个厂商的琼脂依次制备了4种固体培养基,分别进行了牛支原体生长试验;通过对液体培养基OD值的测定和对固体培养基性能指标评价来判断牛支原体生长状况。结果表明,牛支原体在9种液体培养基中均能生长,且培养至60 h时其OD值达到最大;在添加血清浓度相同的情况下,添加马血清培养基的OD值与添加猪血清或胎牛血清培养基的OD值相比差异显著(P0.05);在添加相同类型血清的情况下,添加猪血清或胎牛血清的各培养基之间的OD值相比差异不显著(P0.05),而添加马血清的各培养基之间的OD值相比,添加量10%和15%与5%相比差异显著(P0.05),而10%与15%相比差异不显著(P0.05)。而固体培养基的指标性能评分分别为9(BD公司)、7(香港某公司)、5(上海某公司)、6分(成都某公司)。说明添加10%马血清的液体培养基最适宜牛支原体生长,固体培养基应在此液体培养基的基础上,添加BD公司的琼脂所制备的固体培养基最适宜牛支原体的生长。     

牛支原体检测方法初探

为了解广西某肉牛场外购牛感染牛支原体情况,采集鼻拭子60份,进行了牛支原体的分离培养和PCR检测。支原体分离结果显示,从60份鼻拭子中分离出2株支原体,分离率为3.33%(2/60),PCR鉴定为牛支原体。PCR检测结果显示,在60份鼻拭子中共检测出19份牛支原体,检出率为31.67%(19/60)。结果表明,该场外购肉牛的牛支原体具有较高的感染率。     

以微粒凝集反应鉴定猪支原体菌株

以微粒凝集反应试验诊断猪地方性肺炎和鉴定肺炎支原体菌株的研究已有报导(畜牧兽医学报1980年11卷3期).为了进一步了解国内猪呼吸道支原体种属情况,将征集到的我国12个省市自治区15个协作单位自猪呼吸器官分离有63个地方菌株,以微粒凝集法进行鉴定.材料和方法1.试验用定型菌株:由美国爱荷华州立大学兽医研究所和英国国家菌株保存中心提供,计有猪肺炎支原体、猪鼻支原体,猪滑液支原体和莱氏不需胆醇支原体四种.2.兔、猪高免血清制备:分别用上述四种猪支原体接种于江苏2号培养基,逐级扩大培养.高速离心沉淀,收集管底沉积菌体抗原.用灭菌生理盐水     

蛋鸡大肠杆菌病和支原体病混感的诊治

从蛋鸡大肠杆菌病和支原体病混合感染的临床症状、割检变化、细菌分离、培养鉴定以及细菌药敏试验等方面,对大肠杆菌病和支原体病混感作出了科学、系统、详细的阐述。并提出了疫苗接种是预防该病发生的重要拳措,重申了药敏试验在治疗大肠杆菌病等细菌性疾病时的重要性。     

儿童支原体肺炎临床诊治分析

目的：观察大环内酯类药物治疗儿童肺炎支原体（ MP ）感染患者的疗效,为临床治疗药物的选择提供有效参考.方法将筛选的儿童肺炎支原体患者随机分成4组,分别采用红霉素、阿奇霉素、罗红霉素、交沙霉素治疗,评估以上4种药物的药效.筛选单一抗生素治疗效果不明显的重症患者联合甲泼尼龙冲击疗法治疗,对比、评估疗效.实验室中利用支原体分离株做10种抗支原体药物的敏感性试验,找出对MP有效的药物.结果阿奇霉素治疗组患儿的体温下降时间、咳嗽消失时间、X线肺部阴影消失时间显著高于其他3组,总有效率达93.1%;其次为交沙霉素组、罗红霉素组,其有效率分别为84%和82.1%;红霉素组疗效最差,有效率仅为69.2%;重症患者应用甲泼尼龙联合阿奇霉素治疗取得了较好的效果.结论儿童支原体肺炎首选阿奇霉素,对重症肺炎支原体患者给予阿奇霉素联合甲泼尼龙治疗效果明显,无不良反应.     

RAPD法分析猪肺炎支原体DNA多态性

应用RAPD技术,用7条随机引物对7株猪肺炎支原体和2株猪鼻支原体基因组DNA进行了多态性分析,结果表明,7条引物共产生244个扩增片段,其中有92个是多态性片段.相似系数分析结果显示,国际标准株J株和国内分离株之间相似性系数为0.139～0.333,猪肺炎支原体和猪鼻支原体之间相似性系数为0.203-0.400.