人初乳与牛初乳中乳清蛋白组成的对比研究

通过十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰氨凝胶电泳(sodium dodecyl sulfate polyacrylamide gel electrophoresis,SDSPAGE)将人初乳与牛初乳中乳清蛋白进行分离并结合液质联用技术鉴定,在人初乳乳清蛋白中鉴定出477种蛋白质,牛初乳乳清蛋白中鉴定出325种蛋白质,其中人初乳中有343种特异性表达蛋白质,牛初乳中有191种特异性表达蛋白质,两者有134种相同表达蛋白质。通过基因本体(gene ontolpgy,GO)功能注释分析发现,人初乳乳清蛋白在生物过程中发挥的作用高于牛初乳,尤其表现在应激反应功能上;在分子功能上,人初乳乳清蛋白主要体现在结合作用方面;在细胞组成上,与牛初乳乳清蛋白相比,人初乳乳清蛋白参与的细胞组成均较多,其中在细胞胞外区的组成上参与最多。通过京都基因与基因组百科全书系统(Kyoto Encyclopedia of Genes and Genomes,KEGG)代谢通路分析可知,人初乳乳清蛋白中有23种蛋白参与了与消化吸收相关的KEGG通路-酶酵解。     

牛初乳与牛常乳中乳脂肪球膜蛋白质的组成及功能的对比研究

利用十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(sodium dodecyl sulfate polyacrylamide gel electropheresis,SDS-PAGE)将牛初乳与牛常乳中乳脂肪球膜蛋白质的组成部分进行分离鉴定,发现牛初乳与牛常乳中乳脂肪球膜蛋白质的组成存在较大的差异,且在牛初乳中鉴定出628种乳脂肪球膜蛋白质,牛常乳中鉴定出487种乳脂肪球膜蛋白质.由基因本体(gene ontology,GO)功能注释分析发现,在生物过程中生物调控作用是牛初乳和牛常乳中乳脂肪球膜的主要生物过程.在分子功能上,牛初乳的乳脂肪球膜蛋白质的绑定作用大于牛常乳.在细胞组成上,牛初乳乳脂肪球膜蛋白质参与细胞外区域远远大于牛常乳.通过京都基因与基因组百科全书系统(Kyoto Encyclopedia of Genes and Genomes,KEGG)代谢通路分析可知,牛初乳和牛常乳乳脂肪球膜蛋白质参与的代谢途径不同,表明牛初乳在日后的生产加工中更具有利用价值.     

荷斯坦奶牛乳与牦牛乳的差异蛋白质组学分析

本试验利用蛋白质组学方法分析荷斯坦奶牛乳与牦牛乳乳清与乳脂肪球膜中的差异蛋白,比较功能差异,为开发不同品种牛乳提供帮助。通过离心法分离荷斯坦奶牛乳与牦牛乳的乳清与乳脂,分别提取蛋白,通过串联质谱标签（TMT）法进行蛋白质定性与定量分析,得到差异蛋白;对差异蛋白进行GO功能注释、KEGG代谢通路、蛋白质互作（PPI）等生物信息学分析。结果显示：牦牛乳的乳脂、乳蛋白、乳糖、总固形物和非乳脂固形物含量均显著高于荷斯坦奶牛乳（P<0.05）。在2种牛乳乳清中共鉴定到可信蛋白641种,在乳脂肪球膜中共鉴定到可信蛋白543种;在乳清中筛选出差异蛋白268种,其中牦牛乳比荷斯坦奶牛乳上调70种,下调198种;在乳脂肪球膜中筛选出差异蛋白267种,其中牦牛乳比荷斯坦奶牛乳上调68种,下调199种。GO功能注释及富集分析表明2种牛乳的乳清和乳脂肪球膜差异蛋白均主要富集在细胞外空间、小分子结合和免疫反应等方面。KEGG注释及富集分析表明2种牛乳的乳清和乳脂肪球膜差异蛋白主要富集在金黄色葡萄球菌感染、补体与凝血级联等通路。差异蛋白互作网络分析发现2种牛乳的乳清差异蛋白中甘油醛-3-磷酸脱氢酶（GAPD...     

过滤器辅助样品前处理法测定乳脂肪球膜蛋白质的研究

牛乳是世界上消费最广泛的乳类,并为消费者提供必需的营养物质。牛乳包括蛋白质,脂肪,糖类,维生素和矿物质。蛋白质是牛乳的重要组成部分,包括酪蛋白、乳清蛋白及乳脂肪球膜蛋白质。牛乳乳脂肪球被乳脂肪球膜覆盖,乳脂肪球膜是一个含有3层膜的膜结构,其上附着或者包含蛋白质。近些年来,对于乳中蛋白质的鉴定成为新的研究热点。随着蛋白质组学技术的发展,鉴定出的蛋白质的种类和数量都在增加。但是由于乳脂肪球膜的特殊性质,在牛乳乳脂肪球膜蛋白质的鉴定中,缺乏方便快捷及效果好的方法。作者运用过滤器辅助样品前处理法（FASP）结合纳升液相质谱（NanoLC-MS/MS）测定牛乳乳脂肪球膜蛋白质的种类和数量,共鉴别出169种蛋白质,是目前鉴别数量最大的一种方法。此方法的建立为今后乳脂肪球膜蛋白质研究领域提供一种方便快捷准确的试验工具。     

乳脂球膜蛋白的研究进展

乳脂球膜蛋白是乳腺在泌乳时包被在脂肪滴外的膜蛋白。乳脂肪球膜（milk fat globule membrane,MFGM）是磷脂、鞘脂和多种蛋白质组成的3层膜结构。乳脂球膜蛋白包含100余种蛋白质,含量最丰富的8种蛋白质为黏液素1、黄嘌呤氧化还原酶、黏液素15、CD36、嗜乳脂蛋白、乳凝集素、脂肪分化相关蛋白和脂肪酸结合蛋白。乳脂球膜蛋白已被证明具有丰富的开发利用价值,包括：反映奶牛母体的生理状态;作为幼体的营养和免疫来源,会影响犊牛的发育和母源抗体;会影响人和动物的免疫调节和体质,未来可能应用于疾病的治疗。作者介绍了乳脂球膜蛋白的来源、组成及一种新建立的乳脂球膜蛋白结构,阐述了几个主要蛋白的生理特性及乳脂球膜蛋白的研究进展,并对未来的研究方向提出建议。     

细粒棘球绦虫原头蚴蛋白表达谱分析

旨在探索细粒棘球绦虫原头蚴蛋白表达特性,揭示在此发育阶段虫体主要的功能蛋白以及信号通路,为揭示虫体的发育调控、筛选疫苗以及药物靶标奠定基础。本试验采用LC-MS/MS技术对虫体原头蚴表达的蛋白质进行研究,然后对获得数据进行GO、KOG以及KEGG等分析;最后采用qRT-PCR和原位杂交技术对鉴定得到的Wnt信号通路的关键基因β-catenin进行了差异表达和组织定位研究。结果显示,本研究共鉴定得到7 172个肽段,1 197个蛋白质,其中包括多个潜在的抗原蛋白质,如四跨膜蛋白超家族、6-磷酸葡萄糖酸脱氢酶、表皮抗原蛋白和烯醇酶等。信号通路分析结果显示其中632个蛋白参与276个调控通路,诸如与虫体发育紧密相关的Wnt、Notch、Hedgehog、NF-κB、cAMP以及胆酸盐信号通路。对β-catenin的验证结果显示,此基因分布于细粒棘球绦虫原头蚴顶突的小刺以及散在的细胞中,同时其相对转录量在体外培养0~10d的过程中呈递减趋势。综上,本研究解析了细粒棘球绦虫原头蚴的蛋白质表达元件,揭示了原头蚴主要的调控信号通路,为虫体的生长发育机制以及包虫病的有效防控提供了理论依据。     

最新脂肪球膜上蛋白质排列模型被提出

比利时科学家近日从牛乳中分离乳脂肪球膜，用特异性胰蛋白酶和非特异性链霉蛋白酶水解，以研究脂肪球膜上蛋白质的不对称排列结构。学者利用二维电泳和基质辅助激光解析电离飞行时间质谱法，鉴定脂肪球膜经胰蛋白酶酶解后的产物。     

西藏牦牛卵母细胞蛋白质组表达谱的构建与分析

用液相色谱-串联质谱(LC-MS/MS)技术构建西藏牦牛生发泡(GV)期去透明带卵母细胞的蛋白质组表达谱并进行生物信息学分析。结果显示:共鉴定到550种蛋白质,相对分子质量主要分布在200 000以下,等电点集中在4~12,穹隆蛋白(MVP)是丰度最高的蛋白质;聚类(GO)分析表明:与细胞组分相关的蛋白质主要集中在细胞质(125种),与分子功能相关的蛋白质中发挥多聚A结合RNA功能的蛋白质最多(54种),生物学进程相关的蛋白质中参与内肽酶活性的负调节过程的蛋白质最多(26种);调控通路富集(KEGG Pathway)分析发现,参与的有代表性的通路有补体系统通路,核糖体代谢通路,磷脂酰肌醇3激酶-丝氨酸/苏氨酸激酶(PI3K-Akt)信号通路,碳代谢通路等;通过蛋白质互作网络分析,筛选出与网络稳定性关系最密切的10种蛋白质。总之,构建的西藏牦牛GV期卵母细胞蛋白质组表达谱及分析结果,将为探索西藏牦牛卵母细胞成熟机理及关键基因的研究等奠定基础。     

富含乳脂肪球膜蛋白乳清粉中总磷脂的含量测定方法研究

建立富含乳脂肪球膜蛋白乳清粉中测定总磷脂的方法,采用甲醇-三氯甲烷提取,经过高温灼烧,用钼蓝比色法测定无机磷的含量,再乘以系数26.31折算成试样中总磷脂的含量,该法标曲线性关系良好(R2=0.9990),回收率＞90%,RSD<3%。该法简单,准确率高,可用于富含乳脂肪球膜蛋白中总磷脂的测定。     

基于转录组测序挖掘奶牛乳脂代谢关键候选基因

旨在对高、低乳脂率奶牛乳腺上皮细胞(BMECs)转录组测序的mRNA表达谱数据进行深入分析,挖掘影响奶牛乳脂代谢的关键候选基因。本研究采用Illumina PE150方法对乳脂率具有极端差异的荷斯坦奶牛(高、低乳脂组各4头)的BMECs进行转录组测序,以P<0.05和|log₂FoldChange|≥1.5为阈值筛选差异表达基因,并利用KOBAS在线网址进行功能富集分析,最后通过实时荧光定量PCR(qRT-PCR)技术分析测序结果的准确性及乳脂代谢相关差异表达基因的组织表达谱。结果表明,在高、低乳脂组之间共发现578个差异表达基因,包括332个上调差异表达基因,246个下调差异表达基因。功能富集分析共确定了包含生物学过程(BP)、细胞组分(CC)和分子功能(MF)的366个显著富集的GO条目(P<0.05),其中与脂代谢密切相关的GO条目有长链脂肪酸的运输、脂肪细胞分化的正向调节、乳腺肺泡发育、花生四烯酸的结合等。差异表达基因显著富集到47条KEGG通路(P<0.05),参与脂代谢的通路有15条,分别为脂肪细胞内脂解的调节、磷脂酶D信号通路、河马...     

基于蛋白质组学分析羊乳、牛乳和人乳的蛋白质功能特性

为进一步了解羊乳、牛乳和人乳3种乳样蛋白质相关信息,对其基本成分进行测定,并通过蛋白质组学技术对所含蛋白质进行生物信息学分析.结果表明:羊乳和牛乳的蛋白质含量高于人乳,人乳的脂肪和乳糖含量较高;3种乳中共鉴定出3370种蛋白质,乳中蛋白质的生物过程主要集中在细胞和代谢过程,细胞定位主要分布在腔体和细胞器上,分子功能表现...     

Research Progress on Milk Fat Globule Membrane Proteins

Milk fat globule membrane protein is packaged outside the fat granule during mammary gland lactating. Milk fat globule membrane has three-layered structure composed of phospholipids,sphingolipids and proteins. Milk fat globule membrane protein contains more than one hundred kinds of proteins,of which there are the most abundant of eight kinds of proteins including mucin 1,xanthine oxidoreductase,mucin 15,CD36,butyrophilin,lactadherin,adipophilin,fatty acid binding protein .Milk fat globule membrane protein has been shown to have special value which reflects the physiological state of cow,affects the growth of calf and maternal immune as a source of nutrition and immunity for calves,and affects the human and animal's immunity regulation and physical fitness,it may be applied to treat diseases in the future. This article summaries the study of milk fat globule membrane protein in recent years aimed at describing the source,composition of the milk fat globule membrane proteins,introducing a novel established structure of milk fat globule membrane protein,explaining the physiological characteristics of some main proteins and progress in milk fat globule membrane proteins research and making recommendations for future research directions.     

马乳脂肪球膜蛋白组鉴定及潜在功能分析

试验旨在研究马乳脂肪球膜（milk fat globule membrane，MFGM）蛋白组成及潜在的生物学功能。选取12匹5岁左右、平均体重为450~500 kg的健康纯血母马作为试验动物，主要饲喂干牧草，所有马匹饲养和管理条件均相同。将12份样品以每组4份进行混合，分离提取产后第60天马乳中MFGM蛋白，进行高分辨质谱仪鉴定和生物信息学分析。结果显示，马MFGM组分中共鉴定出310种表达蛋白，这些蛋白主要参与的生物过程为生物调节、刺激应答、定位、多细胞生物过程、运输、信号、细胞通讯、发育过程、细胞分化和免疫系统过程等；细胞成分主要为胞外区域、膜、囊泡、核仁和线粒体等；分子功能主要为催化活性、蛋白质结合、碳水化合物衍生物结合和小分子结合等。KEGG通路分析表明，MFGM蛋白主要参与血小板活化通路、内吞、脂肪酸生物合成和Ras信号通路等。马乳MFGM蛋白的蛋白质互作网络分析图中共包含215种蛋白质。本研究结果揭示了马乳MFGM蛋白质组的复杂性，为解析其营养和生物学功能提供了科学数据。     

牛奶和山羊奶中乳脂球膜蛋白的比较研究

试验旨在分析牛奶与山羊奶中乳脂肪球膜（milk fat globule membrane,MFGM）蛋白组成及潜在的生物学功能。采集牛奶和山羊奶各30份,离心分离牛奶和山羊奶中脂肪,提取MFGM蛋白,液相色谱串联质谱分析结合数据库搜索鉴定,比较了奶牛和山羊MFGM蛋白的差异,分析了MFGM蛋白参与的生物过程、分子功能及相关代谢通路。结果显示,奶牛和山羊MFGM中分别鉴定了284和334个蛋白,奶牛和山羊中蛋白参与的生物学过程的模式非常相似,主要涉及生物调控、定位、转运、信号转导和应激反应等。分子功能方面二者存在一定的差异,奶牛MFGM蛋白主要涉及蛋白结合和核苷酸结合,而山羊MFGM蛋白主要涉及蛋白结合和结构分子活性。奶牛和山羊中差异表达的MFGM蛋白主要涉及结构分子活性。通路分析发现,奶牛和山羊MFGM蛋白涉及的生物学通路稍有差异,其中紧密接头、轴突导向、抗原加工与递呈、补体和凝血级联反应通路在奶牛MFGM蛋白中得到富集,而调节肌动蛋白细胞骨架通路在山羊奶中得到富集。研究结果展示了奶牛和山羊MFGM蛋白的表达模式及差异,为进一步探索两种奶畜乳腺合成脂肪球的分子机制的异同提供科学依据。     

Comparison of Milk Fat Globule Membrane Proteins in Milk Samples of Dairy Cow and Goat

In order to compare the difference of milk fat globule membrane（MFGM）proteins between dairy cow and goat milk,30 milk samples were collected in a dairy farm and a goat farm from Anhui area,respectively.Extracted proteins from the MFGM-enriched fractions were identified and quantified by LC/MS approach.The results showed that 284 and 334 proteins of MFGM from dairy cow and goat were identified,the biological processes of MFGM proteins were similar between dairy cow and goat which were mainly related to biological regulation,localization,transport,signal transduction and response to stimulus.Meanwhile,there were some differences in molecular functions,and protein binding and nucleotide binding were the most prevalent molecular functions in dairy cow MFGM proteins,while protein binding and structural molecule activity were the most prevalent molecular functions in goat MFGM proteins.And structural molecule activity was the main molecular functions among the difference proteins.Pathway analysis revealed that tight junction,axon guidance,antigen processing and presentation,complement and coagulation cascades were enrichment in dairy cow MFGM proteins,and regulation of actin cytoskeleton was enrichment in goat MFGM proteins.Those results revealed the protein expression pattern difference between MFGM protein of dairy cow and goat milk,and provide reference data for further exploring the molecular mechanism of synthetic milk fat globule.     

牛乳、驴乳乳清蛋白二级结构及其功能对比研究

采用傅里叶变换红外光谱法对驴初乳、驴常乳、牛初乳和牛常乳的乳清蛋白二级结构进行分析,再通过基因本体论功能注释和KEGG(Kyoto Encyclopedia of Genes and Genomes)代谢通路分析其功能及差异.结果表明:驴乳和牛乳乳清蛋白的二级结构存在差异;随着泌乳期的延长,二者的乳清蛋白二级结构含量也...