月季内生真菌分离及抗黑斑病活性菌株的筛选

[目的]分离并筛选具有抗黑斑病活性的内生真菌。[方法]从陕西省西安、咸阳、宝鸡、渭南4个地点采集各种类型的健康月季品种,从茎和叶组织中分离内生真菌并通过转接2～3次进行纯化,采用改良的打孔法筛选对黑斑病病原菌有拮抗作用的内生真菌。[结果]共分离获得月季内生真菌67株,其中咸阳采集的样品内生菌的定殖率和分离率最高;月季的茎段内生真菌的定殖率和分离率明显高于叶片。从67株内生真菌中筛选出3株具有抗黑斑病活性的内生菌菌株,并且全部来自宝鸡。[结论]为进一步筛选生防真菌的候选菌株及环境友好型真菌生物防治奠定了基础。     

越橘产黄酮类化合物内生真菌的筛选

从越橘(Vaccinium)属植物的叶片和茎中共分离出176株内生真菌.应用显色反应对176株越橘内生真菌的发酵产物进行初步分析,筛选出2株产黄酮类化合物的内生真菌Y2-3和L5-5,经鉴定1株为细链格孢(Alternaria.tenuissima),另一株为无孢菌株.利用高效液相色谱(HPLC)进一步检测.应用薄层层析检测出菌株所产生的黄酮类化合物与越橘原植物产生的黄酮类化合物相同或相似,利用分光光度法测定出其总黄酮含量.     

罗布麻产黄酮内生真菌的筛选与鉴定

以罗布麻叶中内生真菌为研究对象,用化学显色法和薄层层析显色法对产生黄酮的内生真菌进行筛选,并根据形态特征对筛选到的内生真菌进行鉴定。结果表明:内生真菌菌株P-1和P-2均能产生黄酮;菌株P-1为镰孢菌(Fusariumsp.),菌株P-2为嗜松青霉(Penicillin pinophilum)。     

一株产紫杉醇云南红豆杉内生真菌分离和筛选

紫杉醇是临床上所用的非常重要的天然抗癌药物.从云南丽江塔城地区分离的云南红豆杉中采用无菌技术分离得到110株内生真菌,经过PDA液体培养基发酵后用TLC、紫外分光光度法、HPLC、质谱等方法检测,发现其中有1株的胞外分泌物中含有紫杉醇,标记为G7-B1.经过形态学鉴别,属于拟盘多毛孢属(Pestalotiopsis sp.),紫杉醇产率为360.75 μg/L.该种菌具有进一步研究的价值.     

产银杏内酯B内生真菌的分离与筛选

研究了银杏内生真菌与其宿主产生具生理活性物质银杏内酯B之间的关系,并对部分银杏内生真菌进行了形态学鉴定。结果表明:从银杏植株不同组织中共分离到109株内生真菌;在马铃薯葡萄糖液体培养基上发酵后对发酵液进行薄层层析,有16株菌的斑点和标品有相同的迁移率,用HPLC-UV方法对该16株菌发酵样品进行分析,其中有3株内生真菌(G10、Y30和Y40)的浓缩发酵液的保留时间和标品保留时间一致,确定菌株G10能产生银杏内酯B;菌株G10、Y30和Y40分别为卵形孢霉属(Oospora Wallr.)、枝链孢霉属(Sirodesmiumde Not)和青霉属(Penicillium LK.ex Fries)。     

东北红豆杉内生真菌的分离和筛选

从长白山自然保护区原始森林200多年生东北红豆杉（Tasxus cuspidata Siebet Zucc.)树皮中分离出21种内生真菌，经鉴定：1种属于子囊菌，20种属于半知菌。用薄层层析技术，测定了各菌种发酵代谢产物，经筛选发现：链格孢（Alternaria sp.,1011)、葡萄孢（Botrytis sp.,1014)、散囊菌（Eurotium sp.,1001)、曲霉（Aspergillus sp.,1003)4种内生真菌的代谢产物可与紫杉烷类物质显色剂－香草试液发生较明显的颜色反应。其中，链格孢（Alternaria sp.1011)菌种的代谢产物中有一种含量较大的组分还可与烯碘化铋钾生物碱试剂发生反应，经过光谱分析，该组分化合物I为紫杉烷类二萜Ⅲ型化合物，说明该菌能高产紫杉烷类物质。     

冬凌草内生真菌抗肿瘤活性菌株筛选

[目的]筛选冬凌草内生真菌抗肿瘤活性菌株,为开发利用冬凌草内生真菌资源提供依据。[方法]以药用植物冬凌草为试验材料,分离筛选能产抗肿瘤活性物质的内生真菌。通过组织分离法,从贵州省施秉县产冬凌草中分离到152株植物内生真菌,利用抗肿瘤体外细胞增殖抑制筛选模型(SRB法)对其进行活性检测。[结果]结果表明,20株内生真菌(占总分离菌株的13.1%)对人慢性髓性白血病K562细胞具有显著的增殖抑制活性。[结论]冬凌草内生真菌是寻找抗肿瘤活性代谢产物的良好资源。     

雷公藤内生真菌的分离及活性菌株的筛选

以传统药用植物雷公藤为试验材料，分离筛选能产抑制作物病原真菌的活性物质的内生真菌。通过组织分离法，从雷公藤组织中分离得到36株内生菌。发酵和抑菌试验结果表明，10号菌株的代谢产物对多种作物病害病原真菌有明显的抑制作用。10号内生真菌发酵代谢产物对水稻纹枯病菌、黄瓜立枯病菌、黄瓜枯萎病菌、葡萄炭疽病菌、菜豆炭疽病菌、西瓜枯萎病菌、番茄早疫病菌、番茄灰霉病菌、柑橘炭疽病菌和香蕉炭疽病菌的抑制率分别为88．89％，100％，72．73％，85．00％，80．00％，60．00％，100％，100％，85．71％，66．67％。     

番茄内生真菌的分离和拮抗生防菌的筛选

采用内生菌常规分离法对健康番茄植株体内的内生真菌进行了分离和筛选。结果表明: 番茄的不同品种不同部位内生真菌的数量有所不同, 同一品种茎部比根部种类多。经初步鉴定, 除1种属于子囊菌外, 其余均为半知菌。拮抗结果表明: 无孢菌、曲霉对灰霉和菌核病菌均有较强的抑制作用, 产生明显抑菌带。其它部分菌株对病原菌均有不同程度的抑制作用。无孢菌Fq72菌株培养滤液活性测定结果表明: 其培养滤液对6种病菌均有不同程度的拮抗作用, 尤其对菌核病菌和灰霉病菌抑制率最高, 而且其培养滤液高温处理后活性不丧失, 对病菌仍有较强的拮抗作用, 因此其具有一定的生防潜能。     

银杏内生真菌抗真菌活性菌株的分离和筛选

从银杏(Ginkgo biloba L．)的根、茎、叶和果实中分离获得522株内生真菌,采用菌丝生长抑制法测定 了对7种植物病原真菌的抑制作用。结果表明302株具有抗菌活性,占总数的57．85％,其中12株抗菌效果非 常明显。银杏组织中存在丰富的内生菌,不同组织内生真菌的数量存在一定差异;对病原真菌具有活性的内 生真菌比例较高;对大多数供试病原菌都可以筛选到拮抗效果较好的菌株;银杏内生真菌可以产生丰富的具 有抑菌活性的次生代谢产物,可以作为对多种病原物具有抑菌活性物质筛选的资源。     

石斛茎部内生真菌的分离与分布

采用70%酒精与0.1%升汞(HgCl2)相结合的表面消毒法,分离石斛茎部内生真菌。实验结果表明,升汞的消毒时间1~8 min均可,以5 min左右为宜。石斛茎部内生真菌主要分布于紧贴表皮的一小部分组织中。     

茶树内生真菌的分离

从茶树的根、茎、叶中分离得到36株内生真菌,经显微形态特征观察鉴定为14个属,其中根部36株涉及11个属,茎部32株涉及9个属,叶部26株涉及6个属.结果表明,荼树的不同部位内生真菌的数量、分布和种群存在差异.     

银杏内生真菌的分离纯化及抑菌性的鉴定

采用组织分离法从银杏(Ginkgo biloba)健康组织中分离得到25株内生真菌,根据菌株在PDA培养基上的培养特征,5株被鉴定为链孢霉菌属、4株为酵母属、4株为曲霉属,3株为毛霉属、3株为青霉属,2株为根霉属,1株为简梗孢霉属,3株分离菌株不产孢子。测定25株内生真菌对3种受试指示菌的抑制作用,共筛选得到11株至少对一种指示菌的生长有抑制作用的菌株,对抑菌活性较强的菌株进行形态学和显微分析鉴定。     

薏苡种仁内生真菌的分离及其抗菌活性

为筛选薏苡种仁内生真菌的抗菌活性,采用组织分离法,从禾本科黍亚科蜀黍族薏苡种仁中分离内生真菌,采用菌饼法筛选其抗菌活性。通过5．8 S ITS 分子系统学鉴定菌种,高效液相色谱法（HPLC）分析鉴定菌种发酵液正丁醇提取物次的生代谢产物。结果表明：分离共获得23株薏苡种仁内生真菌,其中,有弯孢霉属、链格孢属、砖孢属、茎点霉属、灰软盘菌属、稻黑孢属、玉蜀黍赤霉属、曲霉属及其他真菌。57％的菌株至少对测试菌株中的1种具有抗菌活性,且 GZR19号菌株具有广谱抗菌活性并鉴定为1种茎点霉（Phoma sp ．）,其发酵液的次生代谢产物在该色谱条件下主要有4种物质含量较高,其中可能存在具有抗菌活性的化合物。     

Isolation and Screening of Black Spot-Resistant Endophytic Fungi Strains from Rosa chinensis

[Objective] This study aimed to isolate and screen black-spot-resistant en- dophytic fungi strains. [Method] Various species of healthy Rosa chinensis were col- lected from Xi＇an, Xianyang, Baoji and Weinan City in Shaanxi Province. Endophytic fungi was isolated from stems and leaves, and purified by 2-3 times of inoculation to screen endophytic fungi antagonistic to Marssonina rosae with modified punching method. [Result] Samples collected from Xianyang exhibited the highest colonization rate and isolation rate; endophytic fungi strains isolated from stems presented the highest colonization rate and isolation rate compared with leaves. A total of 67 en- dophytic fungi strains were isolated from Rosa chinensis, including 3 black spot-re- sistant strains which were all derived from Baoji. [Conclusion] This study laid the foundation for further screening candidate strains of biocontrol fungi and environ- ment-friendly fungal biological control.     

雷公藤内生真菌的分离鉴定及抗肿瘤活性菌株筛选

目的:从雷公藤根(Tripterygium wilfordii)茎及叶中分离鉴定内生真菌,并对其发酵产物进行体外抗肿瘤活性筛选。方法:采用微生物纯化方法分离雷公藤植物的内生真菌,根据菌落形态和显微特征对菌株进行分类鉴定。选用HCT-8(人结肠癌细胞)、Bel-7402(人肝癌细胞)、BGC823(人胃癌细胞)、A549(人肺癌细胞)为指标,采用MTT法对发酵产物进行体外抗肿瘤活性筛选。结果:从雷公藤不同器官中分离得到64株内生真菌,经形态观察鉴定为3目,5科,11属。其中5株内生真菌发酵产物对不同肿瘤细胞具有显著选择性细胞毒作用。结论:雷公藤内生真菌种类多样,具有很好的研究和应用价值。     

无瓣海桑果实内生真菌的分离鉴定及其抑菌活性

基于18S r DNA序列分析和Gen Bank同源性比较,研究采用平板分离法从红树无瓣海桑(Sonneratia apetala)果实中分离得到20株内生真菌,共18个属。分别对20株内生真菌的发酵液进行抑菌活性筛选,其中BGMRC1036T的代谢产物对荔枝炭疽病菌(Colletotrichum gloeosporioides)有较好的抑制作用,BGMRC1123T的代谢产物和BGMRC11095T的代谢产物对番木瓜炭疽病菌有较好的抑制作用,BGMRC1008T的代谢产物对香蕉黑星病菌(Cladosporium cucumerinum)表现出较好抗菌活性。     

大花杓兰内生真菌多样性研究

对大花杓兰(Cypripedium macranthum Sw.)内生真菌类群组成及多样性进行了分析。结果表明,从大花杓兰植株中分离到内生真菌59株,利用ITS-r DNA序列分子鉴定法将大花杓兰内生真菌鉴定为18个分类单元,分布在7纲9目11科16属。北京大花杓兰内生真菌包括12个属,内生真菌的多样性指数H=1.39、D=0.96,优势菌群为毛壳菌属(Chaetomium)和茎点霉属(Phoma)真菌,分别占总菌株数的15.25%和8.47%;吉林大花杓兰样品内生真菌归于9个属,内生真菌的多样性指数H=1.31、D=0.93,以毛壳菌属(Chaetomium)为优势菌群,占总菌株数的23.73%。由此可见,北京大花杓兰中内生真菌多样性高于吉林大花杓兰。     

铁皮石斛促生内生真菌的筛选与鉴定

从铁皮石斛根中分离得到37株内生真菌,经过与组培苗共生筛选,获得9株促生菌,其中3株真菌对铁皮石斛的鲜质量增长率、根数增长率和芽数的促生效果最好。采用形态学观察和ITS序列测定相结合的方法对这9株促生菌进行鉴定。经形态学观察,初步鉴定出2株,均为瘤菌根菌属。根据rDNAITS序列分析显示,2株与Epulorhizasp．的相似性分别为100％和96％,1株与Guignardiacamelliae的相似性达100％,1株与MycosphaereUacruenta的相似性为99％。另外5株促生真菌分类地位尚不能确定,但这5株菌株与登录号为EU482263、GQ996178、AM901831、GU566294和GU566256的序列相似性分别达96％、95％、99％、98％和100％。     

单丛茶树内生拮抗真菌的筛选与鉴定

采用双层平板法和平板对峙法分别筛选对试验细菌指示菌和植物病原菌具有抑菌效果的内生拮抗真菌,并通过形态特征观察和18SrDNA序列测定对拮抗真菌进行鉴定。结果表明:从单丛茶树中筛选出F15GEN、F15YE和LB35JING这3株内生拮抗真菌,其中F15GEN对金黄色葡萄球菌抑菌圈直径为13.36mm,F15YE对枯草芽孢杆菌的抑菌圈直径为14.92mm,LB35JING和F15GEN对立枯丝核病原菌和梨腐烂病原菌的生长有抑制作用,F15YE对核桃叶枯病原菌的生长有抑制作用,LB35JING对茄腐镰刀病原菌的生长有抑制作用。经形态学和18SrDNA序列鉴定:F15GEN为斜卧青霉Penicillium decumbens,F15YE和LB35JING均属于青霉属Penicilliumsp.。