马传贫病毒阿根廷株接种中国马病理变化的观察

对接种 EIAV 阿根廷毒株的10匹马进行了病理解剖,病理组织和病毒抗原分布的观察。结果表明,接种阿根廷毒马出现黄染,出血素质、实质脏器肿大与渐进性坏死,胸腺萎缩、出血与水肿,股骨红髓区扩大与稀薄,铁逆转,淋巴样细胞反应,网内系活化与增生,免疫器官中的巨噬细胞及肝脏的库氏细胞有病毒抗原存在等 EIA 共有的证病性病理变化。同时,在接种阿根廷毒的马也观察到出血性素质变化不十分严重;脏器淋巴结肿大、出血、水肿十分明显,而体表淋巴结不明显;85%病例髋结节区出现褥疮样皮下缺损;80%病例各器官,尤其脏器淋巴结髓质区、门区小梁动脉内皮下层显著水肿,甚至闭锁管腔,动脉周围大面积结缔组织增生,水肿;在肾脏,90%病例弓状动脉周围大面积增生,水肿的结缔组织附近尚见有贫血梗死样的大灶性细尿管坏死;部分小动脉,尤其内皮下水肿不明显的小动脉内皮细胞胞浆中有病毒抗原存在。这些特殊的病理变化是辽毒,wyoming 毒或云南毒接种马未曾观察到的。本文就这些共性和特殊性病变产生的原因,引起的结果,及其与防制的关系等进行了讨论。     

鸡淋巴细胞性自血病病毒和群特异性抗原（P27）在体内的分布与消长

应用生物素－亲和素法和电镜技术对接种鸡淋巴细胞性白血病病毒的实验鸡作了研究。结果：接种后１５ｄ的两只发病鸡雏骨髓中含有大量病毒抗原和群特异性抗原，ＢＡ阳性细胞主要是成髓细胞。接种后１个月一只实验鸡骨髓中形成成髓细胞性肿瘤结节，结节中成髓细胞ＢＡ弱阳性。接种两个月以后骨髓结构正常，各细胞群ＢＡ弱阳性。接种后１５ｄ法氏囊中即有病毒抗原和群特异性抗原，但主要是成髓细胞阳性。接种后２－５个月，法氏囊淋巴滤泡中一直存有病毒抗原和群特异性抗原，但以接毒后３－４个月时含量最高。接毒后６个月，法氏囊萎缩，结缔组织和成淋巴细胞ＢＡ弱阳性。电镜观察，在接毒后１－４个月的实验鸡法氏囊滤泡髓质巨噬细胞胞浆内和胞膜表面、网状细胞胞浆内和淋巴细胞之间观察到大量ＬＬ病毒粒子。根据ＢＡ法染色在法氏囊检出ＢＡ阳性细胞，或电镜在法氏囊检出大量ＬＬ病毒粒子。均可与ＭＤ相区别而建立ＬＬ病理学诊断。     

马立克氏病病毒Rispens株和RL株B抗原基因的分离、克隆及初步酶切分析

将马立克氏病病毒（ＭＤＶ）血清Ⅰ型Ｒｉｓｐｅｎｓ株和ＲＬ株分别接种于原代鸡胚成纤维细胞，待出现８０％以上细胞病变后收获，经蛋白酶Ｋ消化，酚、氯仿抽提，乙醇沉淀细胞和病毒的总ＤＮＡ（ｔｏｔａｌＤＮＡ）。以此为模板，根据已发表的Ｂ抗原基因核苷酸序列设计１对引物，通过聚合酶链式反应（ＰＣＲ）扩增出１条约２．８５ｋｂ的特异性条带，斑点杂交证实其为Ｂ抗原基因。双酶切消化后，克隆到质粒ｐＵＣ１９中。酶切分析表明，在这２株病毒的Ｂ抗原基因上，ＨｉｎｄⅢ、ＥｃｏＲＶ、ＢａｍＨＩ、ＥｃｏＲＩ的酶切位点分布与超强毒ＲＢＩＢ株、标准强毒ＧＡ株的完全相同。     

猪传染性胃肠炎病毒的血凝位点的定位研究

通过转瓶培养ＩＢＲＳ２细胞，选择最佳接毒剂量、接毒时间和收毒时间生产出凝集价（ＨＡ）达２１２的猪传染性胃肠炎病毒（ＴＧＥＶ）血凝抗原。用抗ＴＧＥＶＳ蛋白和 Ｍ蛋白的单克隆抗体与不同稀释度的ＴＧＥＶ血凝抗原等量混合，在 ３７℃作用 ３０分钟后接种ＩＢＲＳ２细胞和做中和试验（ＮＴ）和血凝抑制（ＨＩ）试验。结果表明ＴＧＥＶ血凝位点与中和位点一致，血凝素位于Ｓ蛋白Ａ位点或其附近。     

山羊关节炎─脑炎的研究 3．CAEV89－GB1026毒株的人工感染试验

用ＣＡＥＶ８９─ＧＢ１０２６培养物的澄清液及其超速离心的病毒悬液，经关节—静脉、关节、脑内和口服途径接种土种山羊１９只。以琼扩检测其病毒抗体。感染羊，分别于接种后的第３、５、６和１２周发生血清阳转。４只羊的抗体持续２３周后宰杀，其他羊继续监测。感染羊血清与含犊牛血清的细胞培养液不发生沉淀反应，而与美国ＣＡＥ、国产ＯＰＰ和自制ＣＡＥ琼扩抗原发生沉淀反应。部分羊于接种后５个月出现关节肿大。被宰杀感染羊的关节滑膜、肺脏、乳腹等出现ＣＡＥ的特征性病理组织学变化，而对照羊则未见血清学和组织学变化。感染羊的关节滑液接种滑膜细胞单层，其培养液制成琼扩抗原，与感染羊血清又发生了特异性沉淀反应。     

马立克氏病（MD）胚胎免疫攻毒后病毒抗原的定位研究

本试验利用异硫氰酸荧光黄标记抗体和免疫金标记探针，对胚胎免疫攻毒试验鸡组织脏器中马立克氏病病毒（ＭＤＶ）抗原进行定位及动态观察。结果发现，不同组织细胞内ＭＤＶ抗原的表现形态略有不同，淋巴组织中阳性细胞内ＭＤＶ抗原多呈颗粒状或斑点状定位子细胞浆、细胞核内；脏器组织中阳性着染的实质细胞内病毒抗原则主要呈均匀弥散性分布于感染细胞（肾小管上皮细胞、肝细胞）的胞浆中而不发生瘤变。阳性细胞动态观察的结果则显示     

山羊关节炎—脑炎的研究：3.CAEV89—GB1026毒株的人工感染试验

用ＣＡＥＶ８９－ＧＢ１０２６培养物的澄清液及其超速离心的病毒悬液，经关节－静脉、关节、脑内和口服途径接种土种山羊１９只。以琼扩检测其病毒抗体。感染羊，分别于接种后的第３、５、６和１２周发生血清阳转。４只羊的抗体持续２３周后宰杀，其他羊继续监测。感染羊血清与含犊牛血清的细胞培养液不发生沉淀反应，而与美国ＣＡＥ、国产ＯＰＰ和自制ＣＡＥ琼扩抗原发生沉淀反应。部分羊于接种后５个月出现关节肿大。被宰杀感染羊     

马传染性贫血病毒驴白细胞弱毒株LTR启动子功能的研究

为了证明我国马传染性贫血病毒（ＥＩＡＶ）驴白细胞弱毒株的长末端重复序列（ＬＴＲ）是否能够启动基因的表达,我们将该ＬＴＲ克隆于含ＣＡＴ基因的载体中,获得重组质粒ｐＣＡＴ－ＬＴＲ,用ｐＣＡＴ－ＬＴＲ分别转染驴胎皮肤细胞（ＦＤＤ）、胶质母细胞瘤（ＴＪ－９０５）细胞、驴白细胞及接种ＥＩＡＶ弱毒的ＦＤＤ及驴白细胞,结果以ＥＩＡＶ弱毒的ＬＴＲ为启动子,ＣＡＴ在这几种细胞中均获得了不同程度的表达,证实了我国ＥＩＡＶ弱毒株的ＬＴＲ在ＦＤＤ、ＴＪ－９０５及驴白细胞中确实具有一定的启动子功能,并能被反式激活表达,为进一步研究ＥＩＡＶ弱毒复制及表达调控奠定了基础。     

山羊关节炎－脑炎琼扩诊断抗原的研制

通过对不同的毒株、不同细胞及不同抗原制备方法比较，选用国内分离的山羊关节炎－脑炎（ＣＡＥ）毒株ＧＳ－３５接种山羊滑膜细胞（ＧＳＭ）或角膜细胞（ＧＣ）繁殖病毒，ＰＥＧ１００倍浓缩，乙醚处理后制备琼扩（ＡＧＩＤ）抗原。用该抗原对已知不同种类阳性血清以及人工ＣＡＥ病毒感染羊的检测，证明该抗原性能稳定、特异性好，其结果与国外引进的参考阳性抗原一致。     

山羊关节炎—脑炎琼扩诊断抗原的研制

通过对不同的毒株，不同细胞及不同抗原制备方法比较，选用国内分离的山羊关节炎－脑炎（ＣＡＥ）毒株ＧＳ－３５接种山羊滑膜细胞（ＧＳＭ）或角膜细胞（ＧＣ）繁殖病毒，ＰＥＧ１００倍浓缩，乙醚处理后制备琼扩（ＡＧＩＤ）抗原。用该抗原对已知不同种类阳性能稳定，特异性好，其结果与国外引进的参考阳抗原一致。     

用山羊关节炎—脑炎病毒实验感染绵羊的研究

用山羊关节炎－脑炎病毒（ＣＡＥＶ）接种２只绵羊，３￣４个月后，可观察到接毒绵羊发育迟缓和消瘦，其中１只绵羊在接毒后第８个月出现呼吸困难。未接毒对照绵羊发育正常。用ＣＡＥＶ琼扩抗原检测，２只接毒绵羊于接毒后第７周血清抗体阳转。病理剖检在１只接毒绵羊的多种器官中观察到比较轻微的病变，组织学检查可看到轻微的间质性肺炎、脑膜炎和滑膜炎的病变。实验结果表明，ＣＡＥＶ可感染绵羊，对绵羊有一定的致病性。因此用Ｃ     

鸡马立克氏病（MD）与淋巴细胞糖皮质激素受体（GR）相关性研究：II.…

运用ＢＡ免疫组化技术与ＨＥ染色进行对比研究，探讨了实验性攻击马立克氏病病毒（ＭＤＶ）后鸡体内病毒抗原分布与病变特点之间的关系。结果表明，ＭＤＶ能引起胸腺髓质区、脾动脉周围淋巴鞘、法氏囊生发中心淋巴细胞坏死、网状细胞增生，开逐渐在全身各部位产生多发性淋巴样细胞增生灶。病毒抗原阳性反应与网状细胞增生明显相关。ＭＤＶ抗原阳性细胞主要包括网状细胞，浓缩碎裂的淋巴细胞及浸润的淋巴样细胞，这些细胞浆和胞核均哇     

马传贫弱毒疫苗免疫机理的研究：—马传贫弱毒接种马、驴体内病毒抗原跟踪观

用免疫荧光技术对接种马传贫弱毒的14匹马和20头驴体内病毒抗原进行了8－9个月的连续跟踪观察，结果表明，病毒抗原主要出现在肝淋、脾淋、脾淋、蛋白髓等免疫器官，其形态主要有三大类，第一类存在于巨噬细胞胞浆内；第二类是以免疫复合物形式附贴在增生的嗜酸性粒细胞及其崩解的颗粒上，第三类的为泡沫样无定型荧光，主要存在于肾细胞管管腔中，本文就弱毒抗原在体内持续存在的机理，弱毒抗原与免疫形态学及机体免疫状态关系，神经内分泌调节在免疫发生中的作用以及马与驴免疫形态差异产生的原因等进行了讨论。     

应用间接酶联免疫吸附试验检测鸡传染性法氏囊病病毒

用制备的抗鸡ＩｇＧＭｃＡｂ－ＨＲＰ作为免疫试剂，以ＩＢＤＶ的高免阳性鸡血清作为抗体，用间接ＥＬＩＳＡ法检测经ＩＢＤＶ强毒攻击的各脏器含毒情况，同时与ＡＧＰ法进行比较。结果表明两种方法具有良好的平行关系，间接ＥＬＩＳＡ法比ＡＧＰ法更为敏感；攻毒鸡的法氏囊带毒最多，而在脾、胸腺、肾中均未检出病毒抗原。     

鸡马立克氏病（MD）与淋巴细胞糖皮质激素受体（GR）相关性研究Ⅱ．病毒抗原定位与病变特点相关性研究

运用ＢＡ免疫组化技术与ＨＥ染色进行对比研究，探讨了实验性攻击马立克氏病病毒（ＭＤＶ）后鸡体内病毒抗原分布与病变特点之间的关系。结果表明，ＭＤＶ能引起胸腺髓质区、脾动脉周围淋巴鞘、法氏囊生发中心淋巴细胞坏死、网状细胞增生，并逐渐在全身各部位产生多发性淋巴样细胞增生灶。病毒抗原阳性反应与网状细胞增生明显相关。ＭＤＶ抗原阳性细胞主要包括网状细胞、浓缩碎裂的淋巴细胞及浸润的淋巴样细胞。这些细胞胞浆和胞核均呈强阳性着染。     

重组马传染性贫血病病毒核心蛋白抗原在 A GID 和ELISA中应用的评价

用昆虫杆状病毒表达系统获得的马传染性贫血病病毒（ Ｅ Ｉ Ａ Ｖ） 核心蛋白（ Ｇａｇ） 和 Ｐ２６ 蛋白, 作为免疫琼脂双扩散（ Ａ Ｇ Ｉ Ｄ） 和酶联免疫吸附试验（ Ｅ Ｌ Ｉ Ｓ Ａ） 抗原。对７６ 份已知马传贫非特异性血清进行检查, 同时与市售 Ａ Ｇ Ｉ Ｄ 和 Ｅ Ｌ Ｉ Ｓ Ａ 试剂盒作比较。证明, 用表达蛋白作抗原的 Ａ Ｇ Ｉ Ｄ 和 Ｅ Ｌ Ｉ Ｓ Ａ 检测结果均为阴性反应, 而用市售 Ａ Ｇ Ｉ Ｄ 试剂盒检查有５４ 份马血清出现非特异性反应, 市售 Ｅ Ｌ Ｉ Ｓ Ａ 试剂盒检查也出现了非特异性反应, Ｏ Ｄ 值比表达抗原 Ｅ Ｌ Ｉ Ｓ Ａ 高３５ 倍。初步证明在 Ａ Ｇ Ｉ Ｄ 和 Ｅ Ｌ Ｉ Ｓ Ａ 法中, 表达抗原优于常规马传贫病毒抗原。     

马传染性贫血病病毒弱毒疫苗株感染性分子克隆的构建

采用ＰＣＲ方法分三段扩增出马传染性贫血病毒驴白细胞弱毒疫苗株（ＥＬＡＶ　 ＤＬＡ）的前病毒ＤＮＡ,这三个片段覆盖马传染性贫血病毒的全部基因组,ＰＣＲ产物经克隆后顺次连接,获得一个含有ＥＬＡＶ全基因（８．０Ｋｂ）的重组质粒,将其命名为ｐ８．０。将此８．０Ｋｂ ＥＩＡＶ全基因再亚克隆到含有一完整 ＥＩＡＶ ＤＬＡ株长末端重复序列的质粒中,获得一含有 ＥＩＡＶ驴白细胞弱毒前病毒全基因的重组质粒,将其命名为ｐ８．２,经核苷酸序列分析,证明ｐ８．２含有ＥＩＡＶ前病毒的全基因。用ｐ８．２转染驴白细胞,将其作为种毒进行传代,于感染该克隆毒的细胞培养上清中检测出了反转录酶,说明在驴白细胞中由ｐ８．２衍生出了ＥＩＡ病毒。驴白细胞经该克隆毒感染后,第４天出现病变,经透射电镜可观察到典型的马传染性贫血病毒粒子,进一步证明ｐ８．２具有感染性,我们获得了马传染性贫血病毒驴白细胞弱毒疫苗株的感染性分子克隆,为进一步在分子水平上阐明我国ＥＩＡＶ疫苗株的减毒机理和免疫保护机制奠定了基础。     

猪繁殖-呼吸综合征活疫苗对仔猪的安全性试验

本试验用猪繁殖-呼吸综合征（PRRS）活疫苗和国内分离的PRRS强毒CH—1a株接种PRRS阴性的断奶仔猪，分别在接种后的3、7、14d各剖杀1头，取各脏器分别做冰冻切片和病理切片观察。用间接免疫荧光法检测各脏器PRRS病毒的分布。结果表明，PRRS活疫苗在免疫初期，抗原主要分布在脾脏、淋巴结，其次是肾脏和肺脏，少见于肝脏和心脏，第14d时在脾、淋巴结和肾脏有一定量的抗原，而肺脏相比则数量很少，肝脏和心脏未检到PRRS病毒抗原的存在，表明接种PRRS活疫苗随着时间的推移抗原分布呈下降趋势。而强毒抗原分布以脾脏最多，依次是肾脏、肺脏、淋巴结、肝脏、心脏，接种后第14d仍能在各脏器检到PRRS病毒抗原。病理组织学检测结果表明，活疫苗产生以下颌淋巴结、脾脏增生为特征的免疫应答，组织损伤轻微，对肺的病变较少，且仔猪生长良好。强毒则引起以大面积的肺泡隔增宽为特点的间质性肺炎和微循环障碍的病理变化，淋巴小结、脾脏滤泡发生崩解与周围界限不清，个别淋巴细胞核浓缩，组织损伤严重。本试验表明弱毒疫苗对仔猪是安全的。     

马立克氏病病毒囊膜糖蛋白B抗原I型特异性和群共同性决定簇的…

用能表达马立克氏病病毒（ＭＤＶ）糖蛋白Ｂ（ｇＢ）的重组杆状病毒感染的Ｓｆ９细胞免疫小鼠，制备针对ＭＤＶｇＢ的单克隆抗体，以Ｉ型马立克氏病病毒ＧＡ株感染的鸡胚成纤维细胞作为检测抗原，同时以免疫荧光试验（ＩＦＡ）和酶联免疫吸附试验（ＥＬＩＳＡ）来筛选杂交瘤细胞，结果获得了ＩＦＡ和ＥＬＩＳＡ均为阳性的１株单克隆抗体细胞株，定义名ＢＡ４和ＢＤ８。在ＩＦＡ和免疫沉淀试验中，单抗ＢＤ８与Ｉ，ⅡⅢ型ＭＤＶ均呈阳     

提纯的马立克氏病肿瘤相关表面抗的在鸡体内的免疫应答

应用本瓜蛋白酶消化法，从马立克氏病病毒（ＭＤＶ）人工感染鸡的淋巴细胞瘤表面提取马立克氏病相关肿瘤表面抗原（ＭＡＴＳＡ）。所获得的抗原与从肿瘤细胞表面洗脱的抗ＭＡＴＳＡ抗体在ＥＬＩＳＡ中呈阳性反应。将这种抗原与白油佐剂乳化，给２０日龄鸡肌注免疫３次，应用间接ＥＬＩＳＡ对被免疫鸡的ＭＡＴＳＡ抗体进行了监测。结果表明，免疫前正常鸡的血清中无ＭＡＴＳＡ抗体存在，而用这种抗原免疫后１０天即可形成抗体应答，Ｅ