茄子黄萎病综合防治技术

茄子黄萎病是一种由半知菌亚门真菌轮枝菌属大丽轮枝菌(Verticillium dahliae Kleb.)从根部侵染引起的土传病害,俗称半边疯、黑心病、凋萎病,是危害茄子生产的主要病害之一.20世纪50年代,该病仅限于在我国北方局部地区发生,现全国大部分茄子生产区均有发生.海南近几年茄子黄萎病也呈逐年加重趋势,一般减产20%～30%,严重的可达60%以上,有的地块近乎绝收.因此,如何防治黄萎病是茄子生产亟待解决的问题.现将茄子黄萎病的发病规律及其综合防治措施介绍如下.     

水茄泛素结合酶E2基因StUBCc的克隆及黄萎病菌诱导表达分析

以茄子近缘野生种水茄（Solanum torvum Swartz）幼苗根部为试材,并以黄萎病菌（大丽轮枝菌,Verticillium dahliae Kleb）处理的水茄的抑制差减文库中差异表达的EST片段F290为基础,利用RACE技术,获得一个756 bp的cDNA全长序列。经生物信息学分析发现该序列为泛素结合酶E2-2（UBC2）载体蛋白同源基因,命名为StUBCc,GenBank登录号为KP330492。StUBCc基因编码区共459 bp,编码152个氨基酸,该蛋白分子量为63.0925 kD,等电点为5.13。采用MEGA 5软件对StUBCc和其他同源蛋白的氨基酸序列比对,结果表明其与葡萄的同源蛋白一致性最高,达99%,有很高的功能区段保守性。采用荧光定量PCR对黄萎病菌侵染不同时间的水茄幼苗根部StUBCc基因的表达量进行测定,发现在侵染6 h后,表达量最高,为对照（无菌水处理）的6.79倍。     

钾、钙、硼、硅对茄子抗黄萎病效果的影响

以茄子黄萎病为研究对象,采用田间施用钾（K）、钙（Ca）、硼（B）、硅（Si）的方法,探讨4种元素对接种黄萎病菌后茄子幼苗的发病率、植株生长状况及防御酶活性的影响。结果表明,与对照相比,施用4种元素的各处理均降低了茄子黄萎病的发病率和病情指数,低浓度的K、Ca、B、Si促进了茄子幼苗株高、茎粗、根长、全株鲜质量、根系活力及POD、PPO、PAL活性,而后随着浓度增大,促进作用减弱。其中以B 50 mg·L^-1处理抗病性最好,其发病率比对照低46.66个百分点,各生长指标显著高于对照,根系活力比对照提高286 %;POD、PPO、PAL活性分别比对照提高20 %、78 %、87 %。说明B对诱导茄子黄萎病抗性有显著效果,可应用到生产。     

苹果MdDRB1基因在番茄中异位表达与功能研究

【目的】将苹果Md DRB1基因转入番茄中,探究苹果MdDRB1基因在番茄中的异位表达与功能。【方法】采用农杆菌介导法,将苹果基因Md DRB1转入番茄植物体内,用PCR检测到该基因已整合到番茄总DNA中。对获得的5个转基因番茄株系进行半定量RT-PCR分析,挑选MdDRB1基因表达水平由低到高的3个株系,用实时荧光定量PCR检测与生长素有关的mi RNAs及相应靶基因的相对表达量。并对非转基因和转基因番茄进行3μmol·L-1IAA和5μmol·L-1IAA处理,对植株进行向光性检测。【结果】转基因株系中miR164、miR160、mi R393表达量下调,mi R167表达量上调,同时,它们分别对应的番茄中的靶基因SlNAC1、SlARF10和SlARF16、SlTIR1的相对表达量上调,SlARF8相对表达量下调。IAA处理后,转基因株系幼苗的侧根数目比未转基因植株增多,同时,转基因株系幼苗的向光性也增强。【结论】苹果Md DRB1基因在番茄中的异位表达,通过抑制生长素响应相关的mi R164、miR160、miR393和增加miR167的积累水平,部分解除其对下游靶基因SlNAC1、SlARF10和Sl ARF16、SlTIR1以及增加Sl ARF8的转录后基因沉默作用,进而提高了转基因番茄对生长素响应的敏感性。     

新疆线椒黄萎病的初步研究

对新疆地区线椒黄萎病的田间病状、病症及病原菌株进行了观察,确定其病原菌为大丽轮枝菌(Vertillium dahliaeKleb)PV143株系(线椒黄萎病143),并对其培养、鉴定、纯化及增殖进行了探索。结果表明:该病多在花期和结果初期侵染发病,致使植株很快枯死。病原菌的分生孢子梗、瓶梗和分生孢子以及微菌核等的生长与形态均与棉花大丽轮枝菌有一定的差别,其菌丝生长最低温度为5℃,适温范围20~25℃,以22.5℃为最佳。孢子萌发适温范围5~30℃,以25℃为最佳。     

细辛提取物对茄子黄萎病及茄子生长与抗性生理指标的影响

以茄子黄萎病为研究对象,采用不同浓度的细辛（Herba asari）提取物灌根处理茄子幼苗,研究其对茄子黄萎病的抗性、植株生长状况及保护酶活性的影响。结果表明：与清水对照相比,施用不同浓度的细辛提取物均降低了茄子黄萎病的发病率及病情指数,作用强度随着细辛提取物浓度的增加先增强后略有下降,预防处理明显比治疗处理效果好,4 g•L^-1细辛提取物预防处理的防治效果可达86.26%;不同浓度的细辛提取物对茄子幼苗的株高、茎粗、鲜质量、相对电导率、叶绿素含量、根系活力、苯丙氨酸解氨酶（PAL）活性、过氧化物酶（POD）活性和超氧化物歧化酶（SOD）活性均表现为促进作用,最佳处理浓度为4 g•L^-1。     

茄子黄萎病研究进展

茄子(Solanum melongena L.)是茄属的第三大栽培作物,在我国各地广泛种植。茄子黄萎病又称凋萎病,俗称“半边疯”,是威胁茄子生产最严重的病害之一,由大丽轮枝菌(Verticillium dahliae Kleb.)引起的一种世界性土传维管束病害,发生普遍,危害严重,可大幅度降低茄子的产量和品质。因此,了解和掌握茄子黄萎病发病症状及其规律,及早预防,以减少它的危害十分必要。笔者围绕近年来在茄子黄萎病发病症状、致病机制、抗黄萎病机制和综合防控等方面的研究成果,论述了茄子黄萎病研究进展,旨在为茄子抗黄萎病分子育种提供借鉴和参考,进而促进我国茄子产业的可持续发展。     

茄子TRV-VIGS体系的优化及SmIAA19基因功能初步分析

以经过改造的烟草脆裂病毒（Tobacco rattle virus,TRV）载体PYL156为工具,采用叶片注射法侵染茄子（Solanum melongena L.）叶片,通过表型比较、TRV病毒分子检测和荧光定量PCR技术分析,探究环境温度、植株大小、目的基因插入片段大小对茄子TRV-VIGS沉默体系的影响。结果表明,昼夜温度为（25 ± 3）℃和（20 ± 2）℃时,接种茄子幼苗子叶的植株沉默效果明显,侵染后植株叶片中目的基因表达量与阴性对照相比明显降低;早春日光温室和秋季日光温室条件下,侵染植株表型性状和基因表达量差异不显著。沉默片段大小为200 bp左右时目的基因的沉默效果最好;侵染茄子幼苗子叶期植株出现明显病毒斑,而接种6周龄真叶则无明显表型差异。用茄子生长素诱导基因（SmIAA19）为靶基因对其进行验证,结果表明显著抑制了SmIAA19的表达,其在叶片中的表达量和生长素含量均显著降低,表明SmIAA19是1个与生长素代谢途径相关的基因。     

番茄过表达SlMYB102对种子萌发及生长的影响

番茄（Solanum lycopersicum L.）基因组中已鉴定到121个R2R3-MYB转录因子,但其中绝大多数的生物学功能仍然未知。为探究R2R3-MYB转录因子基因SlMYB102的功能,从‘Micro-Tom’番茄中,利用PCR技术克隆了SlMYB102的编码区,全长为1 089 bp。保守结构域和系统进化树分析显示,SlMYB102蛋白包含两个保守的MYB结构域,与马铃薯的StMYB34同源性最高。亚细胞定位结果显示,SlMYB102编码的蛋白定位于细胞核中。SlMYB102在根、茎、叶、花和未绿熟、红熟果实中均有表达,在茎、叶、花中表达量较高。利用农杆菌介导,将35S::SlMYB102转入番茄,获得了两个过表达株系。与野生型相比,过表达株系种子萌发速率明显升高,而植株高度、叶面积、地上部及地下部的鲜质量均显著降低。显微观察结果表明,与野生型相比,过表达株系叶片表皮细胞面积大小并没有变化,推测过表达SlMYB102是通过减少细胞分裂来抑制番茄植株的生长。     

拟南芥At-pri-miR828 基因的克隆及其对番茄的遗传转化

 MicroRNA828（miRNA828）是一种新近发现的生物学功能还未全面研究的miRNA。为从 不同角度阐明miRNA828 的生物学功能,从拟南芥中克隆到At-pri-miR828 基因并构建了该基因过量表达 的植物表达载体pC2300-pOT2-At-pri-miR828,通过农杆菌介导的叶盘法将pC2300-pOT2-At-pri-miR828 导入异源植物番茄品种‘Ailsa Craig’中。PCR 鉴定结果显示,外源基因At-pri-miR828 已成功整合到转 基因番茄基因组中,共获得9 个转基因株系,67 株转基因植株。定量PCR 检测结果显示,与野生型番茄 植株相比,转基因植株中miR828 的表达量显著增加,而生物信息学所预测的miR828 靶基因Sly-myb-like1 的表达水平则相应降低。花青素含量测定结果显示,miR828 过量表达的转基因番茄植株花青素含量明显 低于野生型植株,表明miR828 参与了番茄花青素的生物合成调控。     

苹果miR396家族鉴定及在不定根发育过程中的表达分析

分析了苹果miR396家族进化特性及其在苹果不定根发育过程中的表达模式。结果表明:苹果miR396家族有4条成熟体和7条前体序列(pre-miRNA)。Mfold预测显示Pre-miR396家族7个成员序列均可形成典型稳定的茎环二级结构,最小折叠自由能介于–62.9 kal·mol~(-1)(pre-miR396b)～–51.9kal·mol~(-1)(pre-miR396g)之间。系统发育进化树分析显示,pre-miR396家族亲缘关系可分为3个亚组(G1、G2、G3),每个亚组内基因数量不同,分别含有11、9、19个。靶基因预测显示,苹果miR396靶基因包括MdGRF1、MdGRF2和MdGRF5等,降解组测序进一步验证了mi R396对其候选靶基因MdGRF1、MdGRF2和MdGRF5的剪切关系。苹果miR396家族成员在侧根和果实中的表达量显著高于其他组织,其候选靶基因表达量则在花芽和腋芽中显著高于其他组织;不定根发育过程中,miR396家族不同成员表达模式存在显著差异,整体上呈上调表达趋势,其候选靶基因呈下调表达趋势;外源IBA处理显著诱导miR396家族成员的表达,尤其是在不定根诱导期和根系生长期更为显著。     

苹果miR396家族鉴定及在不定根发育过程中的表达分析

分析了苹果miR396家族进化特性及其在苹果不定根发育过程中的表达模式。结果表明：苹果miR396家族有4条成熟体和7条前体序列（pre-miRNA）。Mfold预测显示Pre-miR396家族7个成员序列均可形成典型稳定的茎环二级结构,最小折叠自由能介于–62.9 kal ? mol-1（pre-miR396b）~–51.9 kal ? mol-1（pre-miR396g）之间。系统发育进化树分析显示,pre-miR396家族亲缘关系可分为3个亚组（G1、G2、G3）,每个亚组内基因数量不同,分别含有11、9、19个。靶基因预测显示,苹果miR396靶基因包括MdGRF1、MdGRF2和MdGRF5等,降解组测序进一步验证了miR396对其候选靶基因MdGRF1、MdGRF2和MdGRF5的剪切关系。苹果miR396家族成员在侧根和果实中的表达量显著高于其他组织,其候选靶基因表达量则在花芽和腋芽中显著高于其他组织;不定根发育过程中,miR396家族不同成员表达模式存在显著差异,整体上呈上调表达趋势,其候选靶基因呈下调表达趋势;外源IBA处理显著诱导miR396家族成员的表达,尤其是在不定根诱导期和根系生长期更为显著。     

茄子黃萎病的综合防治技术

1 症状 茄子黄萎病苗期发病少,多在门茄开花坐果后开始表现症状,且多自下而上或从一边向全株发展.叶片初在叶缘及叶脉间变黄,后发展至半边叶片或整片叶变黄.早期病叶晴天高温时呈萎蔫状,早晚尚可恢复,后期病叶由黄变褐,终致萎蔫下垂以至脱落,严重时全株叶片变褐萎垂以至脱光仅剩茎杆.此病为全株性病害,剖检病株根、茎、分枝及叶柄等部,可见维管束变褐,但挤捏上述各部横切面,无米水状混浊液渗出,别于青枯病.大丽轮枝菌在茄子上引起黄萎病的症状有3种类型:枯死型:植株矮化严重,叶片皱缩、凋萎、枯死脱落.病情扩展快,常致整株死亡.黄斑病:植株稍矮化,叶片由下向上形成掌状黄斑,仅下部叶片枯死,一般植株不死亡.黄色斑驳型:植株矮化不明显,仅少数叶片有黄色斑驳或叶尖、叶缘有枯斑,一般叶片不枯死.     

嫁接茄子抗病性与电导率,脯氨酸含量及苯丙氨酸解氨酶活性的关系

嫁接可显著降低茄子黄萎病的发病株率和病情指数。在感病逆境条件下，相对电导率、脯氨酸含量增高，但增高的程度，嫁接茄子极显著低于ＣＫ。说明嫁接可有效阻止病原菌的侵染及在体内的扩展，致使以积累脯氨酸来缓解病菌侵害的作用减弱。嫁接后植株体内ＰＡＬ活性明显升高，并保持较高的活性水平，这可能是嫁接茄子表现抗病的重要生理原因之一。     

西瓜miR164b靶基因鉴定及其对黄瓜绿斑驳花叶病毒侵染应答的分析

将miR164b序列与西瓜基因组进行比对,获得miR164b前体Pre-miR164b基因并克隆。Pre-miR164b长度为97 bp,含有完整的茎环结构。Pre-miR164b启动子区含有光响应元件、赤霉素响应元件、乙烯响应元件、水杨酸响应元件、真菌诱导响应元件等多个顺式作用元件。降解组测序获得miR164b的4个靶基因,均注释为NAC转录因子基因,剪切位点位于miR164b序列5′ 端第10位碱基。miR164b及靶基因在黄瓜绿斑驳花叶病毒（CGMMV）侵染不同时间的表达模式不同,靶基因Cla018596的表达模式与miR164b呈负相关,而Cla019099、Cla023219和Cla023357的表达模式与miR164b没有相关性。     

茄子黄萎病识别与综合防控

<正>茄子黄萎病与绵疫病、褐纹病在我国北方菜区并称为茄子的三大病害。茄子发生黄萎病后,往往导致植株枯死,一般年份减产30%,严重时可减产70%,甚至绝收。为了科学防治茄子黄萎病,发挥当前防控新技术的优势,减轻病害损失,现对该病症状的识别、病原菌侵染规律以及病害综合防治新技术作以介绍。1症状特征在茄子生长前期一般不表现出症状,多在门茄坐果后开始发病。病情自下向上发展,初期叶缘及叶脉间出现褪绿黄斑,病斑不断扩大,颜     

嗜果刀孢菌在野杏叶片致病过程中主要酶的种类及活性分析

【目的】明确引起野杏穿孔病的嗜果刀孢菌（Wilsonomyces carpophilus）在致病过程中主要酶的种类及活性。【方法】通过3,5-二硝基水杨酸（DNS）法开展了细胞壁降解酶的种类及其活性的测定，并分析了野杏叶片受嗜果刀孢菌侵染后抗氧化酶活性的变化。【结果】首次发现嗜果刀孢菌在体外不同诱导物培养条件下均可产生木聚糖酶、多聚半乳糖醛酸酶（PG）、聚甲基半乳糖醛酸酶（PMG）等6种细胞壁降解酶，且酶活性呈显著差异。嗜果刀孢菌侵染野杏叶片后产生的细胞壁降解酶中PG和PMG酶活性最高，羧甲基纤维素酶活性最低；过氧化物酶（POD）、超氧化物歧化酶（SOD）、过氧化氢酶（CAT）3种抗氧化酶活性随嗜果刀孢菌侵染时间的延长呈先上升后下降趋势。【结论】首次明确果胶酶在嗜果刀孢菌致病过程中起重要作用，野杏叶片受嗜果刀孢菌危害后体内抗氧化酶活性升高。     

苹果MdMYB121基因异位表达提高烟草的抗逆性

 苹果MdMYB121（序列号MDP0000196982）蛋白具有典型的R2R3MYB结构域,半定量RT-PCR检测发现,MdMYB121表达能被多种非生物胁迫和逆境相关激素不同程度地诱导。采用RT-PCR技术克隆出该基因的全长cDNA,构建其表达载体并侵染烟草,获得转基因植株。表型分析发现,与野生型对照相比,转基因烟草的种子萌发对盐胁迫不敏感,幼苗的抗盐性也得到明显提高;相对于野生型幼苗,转基因幼苗生长对水杨酸（SA）处理不敏感,根和茎较长,侧根更多。转基因烟草植株对高盐、干旱和低温的抗性比野生型对照明显提高。表明MdMYB121能够响应非生物胁迫,在植物抵抗非生物胁迫中具有重要功能。     

转Pofst3糙皮侧耳菌株农艺性状和胞外酶活性分析

通过袋栽实验比较野生型、Pofst3过表达型和Pofst3反义沉默型糙皮侧耳（Pleurotus ostreatus）菌株（分别记为Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ）的菌丝生长速度、原基数量、子实体数量、菌柄直径、菌盖直径等农艺性状;测定其漆酶、木聚糖酶、纤维素酶活性。结果表明：Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ菌丝生长速度差异不显著；与Ⅰ相比，Ⅲ的原基和子实体数量多，菌柄直径大，菌盖直径小，原基和子实体中Pofst3的相对表达量低；与Ⅰ、Ⅱ相比，Ⅲ的漆酶、木聚糖酶及纤维素酶活性较高；Pofst3对糙皮侧耳发育的影响可能与其胞外酶活性相关。     

土壤消毒结合微生物菌剂防控茄子黄萎病及对根际真菌群落结构的影响

通过田间微区试验,采用高通量测序技术,探究不同土壤消毒结合微生物菌剂方法对连作茄子黄萎病防控和根际土壤真菌群落结构影响。结果表明:土壤消毒结合枯草芽孢杆菌处理(BB)显著降低了根际真菌Ace、Chao和Shannon指数,分别比连作茄子处理(CK)降低了23.29%、19.78%和42.71%,黄萎病病原菌数量与病情指数分别比CK处理降低97.2%和51.6%。茄子根际土壤真菌多样性和黄萎病病原菌数量呈显著正相关性。根际土壤主要优势菌门为子囊菌门(Ascomycota),相对百分比在各处理中均大于50%。BB处理显著增加了接合菌门(Zygomycota)的相对丰度,比CK处理增加了73.3%,但子囊菌门和担子菌门(Basidiomycota)的相对丰度分别降低33.6%和61.1%;与对照处理(CK)和化学农药消毒(CF)相比,BB处理和土壤消毒处理(BF)毛壳菌(unclassified_f_Chaetomiaceae)和被孢酶属(Mortierella)等有益菌相对丰度增加,镰刀菌属(Fusarium)和马杜拉分枝菌属(Madurella)等病土传病原菌的相对丰度降低。土壤消毒并配施枯草芽孢杆菌改变土壤真菌群落结构使茄子黄萎病得到有效防控。