将重组质粒高效导入农杆菌的电脉冲转化研究

利用电脉冲法将重组质粒PBI121/α-PAP导入农杆菌LBA4404,获得3.5×106转化子/μ g质粒DNA的转化效率.探讨了不同电激条件及农杆菌细胞生长状态对转化率的影响.结果表明,农杆菌LBA4404电脉冲转化的最适电激条件为电场强度18kv/cm,电容25μF,电阻200Ω;农杆菌最适细胞生长状态为OD600＝0.4～0.5.在一定范围DNA浓度与转化率成正比关系.     

基于CRISPR/Cas9介导的同源重组技术构建TK、gE和gI基因缺失的伪狂犬病病毒

为构建TK、gE和gI基因缺失的伪狂犬病病毒(pseudorabies virus,PRV),采用CRISPR/Cas9介导的同源重组技术,对从湖北某猪场送检的病料中分离到的PRV HB2017株进行基因编辑,并利用蚀斑纯化等方法获取基因缺失株.随后,采用PCR、基因测序、间接免疫荧光试验、生长曲线测定及安全性和效力试...     

植物遗传转化方法及其在水稻遗传改良上的应用

20年来，植物遗传转化技术日臻完善。作介绍了PEG法、电激法、基因枪法、农杆菌介导法的原理及在水稻抗病虫、抗逆及品质等遗传改良上的应用现状，并展望了植物遗传转化方法的应用前景。     

1株NSP2蛋白5个氨基酸缺失的PRRSV遗传进化分析

【目的】研究新疆猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)的遗传变异情况。【方法】提取PRRSV感染病猪肺脏RNA,通过RT-PCR方法对PRRSV NSP2部分基因和ORF5基因进行扩增、克隆和测序,分析其分子变异特征。【结果】成功克隆到1株PRRSV,命名为XJzx1株,其NSP2基因编码蛋白第472~476位存在5个氨基酸的连续缺失,有别于高致病毒株第482、533~561位30个氨基酸的典型缺失,位于经典毒株HB-2(sh)/2002第471~482位12个氨基酸缺失区域内;XJzx1与HK13株NSP2部分基因核苷酸序列相似性最高,为87.5%,系统进化树分析显示,XJzx1株与我国高致病毒株JXA1、HUN4、SX2009等同属一个分支;XJzx1 ORF5基因与我国经典毒株CH-1a、BJ-4、HK6等同属一个分支,其GP5蛋白不存在氨基酸的缺失或插入,而表现为多位点的突变。【结论】PRRSV XJzx1株具有独特的遗传进化特征,其毒性较经典毒株有所加强,推测为新型变异株。