Gus基因在转基因棉花细胞中的表达及其与 NPTⅡ基因、Bt基因表达的相关性

通过农杆菌介导法将含有 Gus 基因、NPTⅡ基因、Bt基因的Ti质粒转入棉花细胞中,用Gus组织化学检测法检测转化愈伤组织、再生棉株R0、R1和R2代植株组织细胞中的 Gus 基因表达的水平,并用 NPTⅡ活性速测法和室内生物测虫法检测三个外源基因在 R0、R1和R2 代植物植株组织中的表达情况,分析三者存在及表达的相互关系.结果表明,Gus基因在转化愈伤组织细胞有丝分裂增殖过程中能稳定遗传给后代细胞.转化棉株 R0、R1和R2代Gus 活性、NPTⅡ活性、抗虫性三者有一定的相关性但不完全是共表达的,各基因的表达水平是多相的.     

不同农杆菌菌株和棉花品种在转基因棉花中的应用研究

本试验采用农杆菌（Ａｇｒｏｂａｃｔｅｒｉｕｍｔｕｍｅｆａｃｉｅｎｓ）菌株ＡＧＬ—１—１１、４４０４—７、２０８—１、２８１—６，与陆地棉品种晋棉７号、柯字２０１、相字３１２、冀合３２１的下胚轴切段共同培养，将Ｂｔ内毒素基因导入棉花愈伤组织，经体细胞胚胎发生途径转化再生植株。试验结果表明：菌株间转化率差异较大，菌株ＡＧＬ—１—１１、４４０４—７表现较好。品种之间在转化率上互有高低，差异不显著     

选择标记基因剔除及其在转基因棉花中的应用

转基因植物中选择标记基因可能对生物安全和环境安全带来的不利影响,有必要进行剔除。评述了剔除选择标记基因的几种方法,并设计了利用双T DNA共转化和位点特异性重组的方法初步建立培育无选择标记转基因棉花的体系。     

含NPTⅡ标记基因的转基因抗虫棉室内快速鉴定方法

通过试验研究,提出了3种室内快速筛选和鉴定含NPTⅡ标记基因的转基因抗虫棉的方法.一是待检测棉子去种皮,在含卡那霉素培养基培养,根据幼苗子叶颜色和棉苗状态来辨别是否是转基因材料,卡那霉素最适浓度为0.75 g·L-1;二是去皮种子培养在无卡那霉素的萌苗培养基上,在棉苗子叶上涂抹卡那霉素溶液进行鉴定,最适浓度为4.0 g·L-1;三是在待测棉苗子叶上打孔、滴加一定浓度的卡那霉素,根据打孔并滴加卡那霉素部位的叶片颜色变化,鉴别并统计转基因植株,其最适浓度为2.0 g·L-1.3种方法均可在卡那霉素处理后4～7 d内快速鉴定出转基因植株.同时,对转基因阳性植株进行PCR鉴定,结果表明3种卡那霉素方法鉴定的准确率均在90%以上.     

中国棉花转基因研究与应用

近十年来 ,植物基因工程取得了辉煌的成就 ,尤其是许多大田作物 (如水稻、玉米、烟草、番茄等 )的转基因产品已进入商品化生产阶段。本文就中国棉花基因工程方面的研究作一简要综述 ,主要包括抗虫性改良、抗除草剂性状改良、抗病性改良、抗逆性改良和品质性状改良等方面     

转基因技术在棉花育种上的应用

综述了转基因技术在棉花遗传改良中的应用,包括棉花抗病、抗虫、抗除草剂、抗逆以及品质改良等方面的最新进展,并对棉花转基因研究中存在的主要问题和今后的研究与应用前景进行分析和展望.     

花椰菜花叶病毒（CaMV）35S启动子在转基因棉花中的表达

利用GUS作为报告基因，通过GUS组织化学定位法检测棉花转化愈伤组织、体细胞胚，R0代棉花根、茎、叶、花器官以及正在发育的胚GUS基因表达情况，详细阐述了CaMV 35S启动子在棉花细胞中的表达轮廓。结果表明，在愈伤组织细胞有丝分裂和增殖过程中GUS基因能稳定表达并遗传给后代细胞；在根、茎、叶细胞中检测到GUS表达活性。在     

抗蚜转基因棉花的研究

用雪花莲凝集素(GNA)基因及有潜在抗蚜作用的尾穗苋凝集素(ACA)基因构建了韧皮部特异表达的单基因(pBCACA和pBdePACA)及双抗蚜基因植物表达载体(PBACG)。含有这些表达载体的农杆菌转化子已供合作单位开展棉花的转化，同时我们正在用转基因烟草研究这些基因组合的抗蚜效果。用含pBCACA或pBdEP—ACA的农杆菌转化了冀合321等棉花品种，     

转基因抗虫棉中cry1Aa基因表达盒的序列测定和检测

从转基因抗虫棉南农6号F1中克隆了一种新的Bt基因表达盒-cry1Aa基因表达盒,与已经测定的我国转基因棉花中的cry1Ac基因和cry1Ab/Ac基因的表达盒序列比较发现,它们在Bt基因与7S UTR的连接区域存在较大差异.根据这个差异区域的序列,设计特异性引物对cry1Aa-F/cry1Aa-R,建立了cry1Aa...     

GFP基因在棉花杂交种纯度检测中的应用

棉花杂种优势利用已经成为选育高产、优质、早熟、多抗新品种的重要途径。影响杂交制种纯度的因素多,质量较难控制,加之缺少快速、经济的杂交种纯度检验技术,极大地限制了杂交种的推广速度,增加了企业经营杂交种的风险。来源于海洋生物的GFP蛋白,作为棉花杂交种纯度报告基因,在检验上具有准确、简便、快速、经济的优点。     

转基因棉花的田间筛选技术研究

利用不同浓度的卡那霉素对棉花叶片进行处理,较为系统地研究了棉花不同品种、不同叶位、不同生育时期内叶片对卡那霉素处理的反应。在此基础上建立了一种在田间对转基因棉花进行筛选的简便方法。研究表明,在棉花花铃期以前,利用5000～7500mg,L-1卡那霉素对转基因棉花新展开的倒1叶和倒2叶进行检测,能够有效筛选出带有卡那霉素标记基因的转基因后代,这对于转基因棉花材料的选育有较大的利用价值。     

抗虫棉生长发育过程中Bt杀虫基因及其表达的变化

目前已商品化生产的国内外抗虫棉品种在生产上均存在“苗期抗性强,后期抗性减弱”的现象。从DNA、mRNA和蛋白质3个水平上对双价抗虫棉139-20 R4代植株中Bt杀虫基因及其在整个生长发育期的时空表达进行了系统研究。研究结果表明,Bt杀虫基因在抗虫棉中的表达具有时空特异性。同一组织,Bt杀虫蛋白含量在整个生长发育期呈动态     

农杆菌介导外源基因在棉花中的表达

用 5～ 6d的棉花无菌苗下胚轴切段与农杆菌共培养 ,菌株质粒中 Gus基因为标记基因 ,NPT 基因为选择基因。在含 0 .1 mg· L- 12 ,4- D和 0 .1 mg· L- 1KT的 MS培养基上共培 48h,转移到添加头孢霉素 50 0 mg· L- 1、卡那霉素 50 mg· L- 1MS培养基中诱导和筛选抗性愈伤组织 ,70～ 80 d时 ,进行 Gus检测 ,选择 Gus阳性愈伤组织 ,经体细胞分化生成转基因再生植株     

转Bt基因抗虫棉育种策略与效果

应用改进的常规育种技术培育转Ｂｔ基因抗虫棉，可大大提高对鳞翅目害虫的抗性，这是棉花品种改良的新趋势。育种实践表明，根据转Ｂｔ基因种质系供体的特点和遗传缺陷，选择综合性状优良、前期生长势强、株形稍高大松散，铃重较大、生育期相对较短的材料作亲本较为适宜；在杂交技术的应用上，宜采用复合杂交、基因渐渗和有利基因累加技术；杂种后代的处理视杂交方式而定。本文对育种程序中抗虫性鉴定技术进行了讨论。     

转基因双价抗虫棉中Cry1Ac基因与CpTI基因的共表达

以转基因双价抗虫棉自交后代为材料,利用PCR、Southern杂交、ELISA检测方法,分析了Cry1Ac基因与CpTI基因在基因组中的整合情况,结果显示,除sGK321和3517外,其余品种Cry1Ac基因和CpTI基因的整合位点不同,并且sGK321中两基因也只有一个位点相同;ELISA结果表明,同一个品种同一部位Cry1A蛋白和CpTI蛋白不能完全同步表达,它们的表达量存在差别,且这种差别在整个生长阶段并不稳定.     

Bt基因在不同陆地棉基因型的表达研究

研究了Bt基因在陆地棉不同遗传背景下的表达差异。结果表明,(1)Bt基因在不同陆地棉基因型中均能充分表达,与常规(非抗虫)棉相比抗虫性极为显著。(2)不同陆地棉基因型品系(种)之间抗虫性比较,有差异且部分品系间达极显著水平。(3)Bt基因在不同陆地棉基因型的表达,前期(对二代棉铃虫的抗性)差异较大;中期(对三代棉铃虫的抗性)差异变小;后期(对四代棉铃虫的抗性)没有显著差异。(4)转Bt基因抗虫棉Bt基因的表达随棉花的生育进程呈逐渐降低趋势,即对二代棉铃虫的抗性>对三代棉铃虫的抗性>对四代棉铃虫的抗性。