人工合成甘蓝型油菜对菌核病的抗性鉴定

对 1 4个人工合成甘蓝型油菜品系进行了菌核病离体叶片接种鉴定 ,并与普通甘蓝型油菜进行了比较。结果表明 ,这批合成系大多数表现出平均病斑直径、显症时间与抗病品种中油 82 1接近 ,具有较强的抗菌核病能力。其中 ,合成系 H0 9在本鉴定中未见病斑 ,显示了高度的抗菌核病能力     

利用BSA-Seq筛选甘蓝型油菜菌核病抗性候选基因

油菜菌核病居油菜3大病害之首,它所引起的茎腐烂是导致油菜减产的重要原因之一,因此筛选出调控菌核病的主效基因,对利用分子辅助育种手段提高油菜产量具有重要意义.该研究以甘蓝型油菜高抗材料21Y490为父本与高感材料21Y689杂交,在F2分离群体终花期截取油菜茎秆进行核盘菌室内接种,培养3 d后测量菌斑大小鉴定菌核病抗性.筛选抗性极端表型个体构建DNA混池,与亲本一起重测序提取差异SNP,InDel信息,利用BSA-seq技术、 ED算法和Δ-index算法获得两个显著的关联区域,分别位于C09号染色体的17.8～21.2 Mb和31.6～39.1 Mb区间,区间内共有399个基因.最后,利用拟南芥和甘蓝型油菜基因组注释信息对关联候选区间对应的基因功能进行分析,共筛选出与油菜菌核病抗性相关的8个候选基因(BnaC05g50540D,BnaC09g33900D,BnaA04g09130D,BnaA01g29170D,BnaC09g15640D,BnaC09g35310D,BnaA03g09220D,BnaCnng15460D),通过候选基因同源分析、代谢通路分析及共表达基因分析发现,这些基因...     

甘蓝型油菜BnEIN3基因克隆及菌核病诱导表达

[目的]探讨甘蓝型油菜EIN3（BnEIN3）基因与菌核病抗性的关系。[方法]根据GenBank中已公布的拟南芥EIN-3基因的保守区及甘蓝型油菜EST序列,设计特异性引物,分别进行基因组PCR和RT-PCR扩增,克隆BnEIN3基因。对菌核病不同抗性的3个油菜品种中BnEIN3的表达进行荧光定量PCR检测分析。[结果]克隆得到1947bp的基因片段,与拟南芥EIN3一致性高达82%,有完整的开放阅码框,编码614个氨基酸,其中包含1个EIN3结构域,初步认定该片段为油菜BnEIN3基因。在高抗品种（D083）中,菌核病在侵染后期快速诱导BnEIN3上调表达,且显著高于中抗（中双9号）及高感品种（84039）中该基因的表达水平。在中抗及高感品种中,菌核病均抑制BnEIN3的表达,且中抗品种BnEIN3表达量一直大于高感品种。[结论]BnEIN3可能与油菜对菌核病抗性相关。     

人工合成甘蓝型油菜的同工酶分析

用聚丙稀酰胺凝胶垂直平板电泳法 ,对 1 6个人工合成甘蓝型油菜品系的过氧化物酶同工酶和酯酶同工酶进行了分析 ,比较了不同人工合成系间以及它们与普通甘蓝型油菜间两种同工酶的差异。结果表明 ,人工合成系间的两种同工酶酶谱均存在着较明显的差异 ,与普通甘蓝型油菜之间也存在着较明显的差异。该批人工合成系是一批具有较丰富遗传变异的油菜资源     

甘蓝型油菜核不育材料育性基因的RAPD标记

通过ＢＳＡ法，对甘蓝型油菜核不育材料Ｓ４５Ａ的育性基因进行分子标记，在９８０个随机引物中，找到了与可育基因连锁的２个ＲＡＰＤ标记ＵＢＣ１５８－６００，ＵＢＣ１８７－６００，其遗传图距分别为９．５６４ｃＭ、１７．７００ｃＭ。     

甘蓝型油菜硫苷特性与对菌核病抗性关系

选择硫苷性状差异较大、农艺性状和其他品质性状相近的油菜品系967H,967L.04068.4和246009.2为材料,探讨田间自然发生和人工接种条件下油菜硫苷特性与对菌核病抗性的关系.结果表明,在田间自然发生和人工接种条件下,高硫苷品系967H,246009.2的病情指数均极显著小于低硫苷:品系967L,04068.4.高硫苷品系在苗期保持较高的SOD,POD,CAT和PAL等保护酶活性,较低的PPO活性和MDA含最.接种菌核病菌后,各品系MDA含量以及SOD,POD,CAT和PAL活性增加,而PPO活性下降,但是高硫苷品系MDA含量和SOD,POD,CAT和PAL活性增幅比低硫苷品系低,PPO活性降幅比低硫苷品系大.菌核病对高硫苷品系防御体系的影响比低硫苷品系小,酶活性增加幅度(或降低幅度)与感病性有关.     

甘蓝型油菜光合基因的表达及其与含油量的关系

以双低油菜高含油品系855和低含油品系868为材料,对9个光合基因(Bna0391450、Bna0449040、Bna0104450、Bna0501620、Bna0197350、Bna0305890、Bna0087590、Bna0084310、Bna0280620)在叶片、花蕾和种子中的表达及其与油分积累的相关性进行研究。结果表明:除Bna0280620基因在高油品系855中、Bna0084310基因在低油品系868授粉后15 d的种子中基本不表达外,其他基因在叶片、花蕾和授粉后不同时期的种子中均有表达,且基因表达量均呈先上升后下降的趋势;高油品系855中的基因表达量峰值出现在授粉后20 d;低油品系868中的基因表达量峰值出现在授粉后25 d;2个品系中,光合基因表达差异集中在苗期叶片和授粉后20 d的种子中,油分积累差异主要集中在授粉后30～40 d种子中。品系855中,除Bna0197350和Bna0280620外,油分积累与光合基因表达量均呈负相关,且相关性不显著;品系868中,除Bna0501620基因外,油分积累与光合基因表达量也呈负相关,相关性不显著。说明油菜光合基因在种子中有表达,但不影响种子中的油分积累量。     

甘蓝型油菜隐性核不育基因的SRAP标记

根据SRAP引物设计规律设计了一套引物,结合混合集群分析法(BSA),对油菜隐性细胞核雄性不育两用系430AB的不育与可育DNA池进行筛选,用在不育和可育DNA池间存在差异的引物再对430AB群体进行检测,获得了与隐性核不育基因ms连锁的3个SRAP标记,即m11e33270、m16e7280和m16e17370,它们位于核不育基因的同一侧,遗传图距分别为4.7 cM、20.1 cM和26.4 cM.     

甘蓝型油菜BnEIN3基因的克隆及菌核病诱导表达研究

乙烯不敏感转录调节基因（EIN3）是定位于细胞核上的乙烯信号转导下游元件,其作为转录因子启动一系列转录级联反应,从而激活乙烯诱导的防御相关基因的表达。拟南芥EIN3功能缺失突变体表现出对死体营养型病原菌高度敏感,表明该基因在抗死体营养型病原菌中发挥一定作用。为克隆甘蓝型油菜EIN3（BnEIN3）基因,该研究采用荧光定量PCR研究菌核病不同抗性的油菜品种接种核盘菌后,BnEIN3的表达变化及差异,初步探讨了BnEIN3在油菜菌核病防卫反应中的作用。     

真菌激发子诱导油菜抗菌核病研究

为了提高油菜对菌核病的抗性,利用病原菌激发子喷施油菜植株,分析其防御体系中酚类物质的变化及对病原菌入侵的抗性.结果表明,多糖激发子和细胞壁激发子均能迅速激活油菜的免疫机制,促进酚类物质的合成,多糖激发子诱导后96 h多酚含量达到最大值(0.229 mg/g),细胞壁激发子诱导120 h后多酚含量达到最大值(0.267 mg/g),且提取的植物多酚在体外培养条件下对油菜菌核病菌的菌丝生长有显著的抑制作用,特别是细胞壁激发子诱导组的提取物抑菌率可达60.70％.这说明病原菌激发子可以用于油菜菌核病的防治.     

~(32)P的吸收、转运与甘蓝型油菜抗菌核病性的关系

用32P示踪法研究了不同抗性油菜品种3叶期及盛花期感染菌核病后磷素吸收与转运的变化。研究结果表明:磷素向着生长旺盛部位转运;接种后植株磷素吸收增强而且磷素向着接种叶富集,感病品种甚于抗病品种;经相关性分析,第2位叶(接种叶)、第3位叶磷素放射性活度提高幅度显著且与抗性成显著或极显著负相关。这说明磷素的吸收、转运与抗性有密切的关系。在盛花期,花果中磷素放射性活度呈上升趋势,宁RS-1和宁油7号叶中的磷素放射性活度都先上升后下降,但前者上升的幅度较大,而且后期下降缓慢;宁油7号茎中的磷素放射性活度呈稳定下降趋势,而宁RS-1表现为先上升后又下降。这说明抗病材料有较强的生理活性来抵抗病害。     

甘蓝型油菜防御酶活性变化与抗病性的关系

对不同抗性油菜品种7～8叶期及盛花期感染油菜菌核病后及对照叶片中几种重要防御酶类活性变化的研究结果表明：7～8叶期叶片SOD活性极显著高于盛花期，而盛花期POD、PPO、PAL活性显著或极显著高于7～8叶期。与对照相比，感病品种处理叶片中SOD、POD活性显著增加，而抗病品种变化较小且因品种而异；7～8叶期及盛花期处理叶片中，各品种(系)PPO活性有不同程度的下降，其中抗(耐)菌核病品种(系)下降达显著水平，并且中R888达极显著水平；7～8叶期各品种(系)处理叶片中PAL活性没有明显变化，盛花期各品种(系)处理叶片中PAL活性均显著地下降，并以抗(耐)菌核病品种(系)下降较多，其中，中R888的PAL活性的下降达极显著水平。酶活与病斑直径的相关性分析也表明，品种抗性主要与7～8叶期对照叶片中SOD、POD活性及盛花期对照SOD、PPO、PAL活性水平较高有关，感病品种处理叶片中防御酶活性与对照相比增加比例较高，说明酶活增加比例与感病性有关。不同时期不同品种(系)防御酶活性的变化不同说明不同抗(耐)菌核病品种(系)在不同的发育时期存在不同的抗病机制。     

14个甘蓝型油菜品种对菌核病的抗性初报

【研究目的】为探明不同类型的甘蓝型油菜品种对油菜菌核病的抗性差异,提供筛选抗耐病性的材料的新来源;【方法】选用14个甘蓝型油菜品种为材料,利用人工接种方法和病圃自然发病鉴定,研究了其青角期茎秆接种后病斑的扩展情况和成熟期自然发病情况以及在大田生产中的侵染发病;[结果]研究结果表明,不同甘蓝型油菜品种抗病性存在有明显差异,自然鉴定冬油菜材料Wany-ou14的抗耐病要优于其他材料,抗病指数为0.36(对照Zhongyou821抗病指数为0),人工接种春油菜材料Ranger具有较好的病害抗扩展性,抗病指数为0.64,中晚熟的材料抗耐病强于早熟材料;【结论】冬油菜材料的抗耐病要优于春油菜材料,春油菜类型也具有较好的抗耐病性,抗性资源通过转育可提高冬油菜的抗病性;生产中油菜类型的选择以中晚熟的冬油菜品种为主。     

油菜蕾薹期和花期菌核病接种方法比较

核盘菌引起的菌核病是油菜重要病害。为建立快速有效的油菜菌核病抗性鉴定方法,在油菜花期采用4种人工接种方法测定了5种油菜资源对菌核病的抗病性,并分析采用不用接种方法测定的病斑大小之间的相关性。这4种方法分别为:离体叶片接种、离体茎段接种(牙签法)、活体茎秆接种(牙签法)、活体叶柄接种(吸头法)。这4种接种方法中,离体叶片接种法与其余3种方法的鉴定结果均没有显著相关性;采用叶柄接种法,接种后11 d和19 d的病斑长度与离体茎段接种3 d和7 d的病斑长度之间的相关性显著(P0.05),相关系数分别为0.866和0.821,与活体茎秆接种7 d和15 d的病斑长度极显著相关(P0.01),相关系数分别为0.952和0.987。结果表明移液管介导的叶柄接种是一种便捷、可靠的油菜菌核病抗性鉴定方法。     

壳寡糖诱导油菜抗菌核病机理研究初探

壳寡糖作为一种有效的生物农药已被应用于多种农作物,田间使用发现其可诱导油菜抗油菜菌核病,但机理不甚明了。本试验证明此诱抗有时间依赖性,接种核盘菌前提前3 d用50μg/mL浓度壳寡糖预处理的植株有最佳防治效果,防效高达72.1%。而平板抑菌试验证明壳寡糖对核盘菌的生长没有直接抑制作用,说明油菜对菌核病的抗性来源于壳寡糖激发的植物自身系统抗性。利用半定量RT-PCR检测发现油菜中重要的抗性基因BnPDF1.2可被壳寡糖诱导表达水平升高,壳寡糖还可以诱导茉莉酸生成途径中关键酶脂氧合酶(LOX)的活性升高,说明壳寡糖诱导油菜抗菌核病可能由JA/ET途径介导。     

Breeding of Brassica napus Cultivar Zhongshuang9 with High-Resistance to Sclerotinia sclerotiorum and Dynamics of Its Important Defense Enzyme Activity

Zhongshuang9, a new semi-winter Brassica napus variety with high resistance to Sclerotinia sclerotiorun and lodging, high-yield, double-low quality and extensive adaptability, was bred by multiple crossing and microspore culture technique. It was registered and released in China in 2002. In regional trial of Hubei Province in China, Zhongshuang9 yielded 2 482. 2 kg ha-1 averagely in 2000 - 2002, 15.33% higher than the control variety Zhongyou821. Erucic acid, glucosinolates and oil contents of Zhongshuang9 were 0.23%, 22.69 μmol g-1 (in meal) and 42%, respectively. In field assessment of resistance to S. Selerotiorum, the disease incidence and disease index of Zhongshuang9 averaged 13.31% and 6.47, respectively, which were lower than those of Zhongyou821 by 28% and 36%, respectively. After inoculation of detached leaves with mycelia, the lesion size of Zhongshuang9 was 4. 709 em2, which was significantly smaller than that of the mid-resistant variety Zhongyou821 (5. 933 em2 ). The stem lesion length of Zhongshuang9 after match-stick inoculation was 1. 275 cm, which was significantly lower than that of Zhongyou821 (1. 943 cm). The possible mechanism of resistance to S. sclerotiorum was studied through comparing the activities of phenylalanine ammonia lyase (PAL), exo-chitinase, β-1, 3-glucanase, peroxidase (POD) and polyphenoloxidase (PPO) in Zhongshuang9 with those in other resistant, mid-resistant and susceptible cultivars.     

抗菌核病双低油菜新品种中双9号选育及其重要防御酶活性变化规律的研究

 中双 9号是采用复合杂交和小孢子培养技术选育的双低甘蓝型油菜新品种 ,具有高抗菌核病、高抗倒伏、丰产性突出、稳产性好、品质优良、适应性广等优点。 2 0 0 2年油菜中双 9号通过湖北省农作物品种审定委员会审定。在 2 0 0 0～ 2 0 0 2年湖北省区域试验中该品种平均单产 2 4 82 .2kg·ha-1,比对照中油 82 1增产 15 .33%。中双 9号种子芥酸含量 0 .2 3% ,商品籽硫甙含量 2 2 .6 9μmol·g-1(饼 ) ,含油量 4 2 %。经大田自然侵染鉴定 ,中双 9号