锌与基因表达的研究进展

锌是机体所必需的一种微量元素,在细胞分化和生长中起着重要作用。细胞内的部分锌存在于细胞核内,在维持遗传稳定性和调控基因表达中起着重要作用。近年来,有关锌对基因表达的影响主要集中于转录水平,即锌通过影响转录因子(含有锌指域)的活性进而调控细胞增殖、分化及细胞死亡。本文就锌调控基因表达的相关方面作一综述。     

锌对动物基因表达的影响

本文综述了近年来锌在动物基因表达方面调控作用的研究进展 ,其中着重论述了锌对金属硫蛋白mRNA表达的调控 ,展望了锌对动物基因表达的调控在生产中的应用前景。     

不同锌源对猪早期生长及其相关基因表达的影响

利用不同的锌源饲喂早期断奶仔猪,研究其对仔猪早期生长的影响,并从激素水平及基因表达上探讨其可能的作用机制。选取28d断奶的猪45头,随机分为3组,每组设3个重复,每重复5头,对照组饲喂基础日粮（含锌101mg／kg）,另外2组分别添加硫酸锌组（ZnSO4）、蛋氨酸锌组（Zn—Met）使日粮含锌240mg／kg。结果表明：日粮中添加不同形式的锌,均能显著提高仔猪日增重和胰岛素生长因子-Ⅰ（IGF—Ⅰ）基因表达量（P〈0．05）,蛋氨酸锌组IGF—ⅠmRNA表达量显著高于硫酸锌组（P〈0．05）;而对猪血浆生长激素（GH）水平及其生长激素受体（GHR）表达影响均不显著。表明添加锌可以通过IGF—Ⅰ对生长的调控作用而影响机体生长发育。     

以组织锌、金属硫蛋白及其基因表达指标评价肉仔鸡对锌源的相对生物学利用率

研究了有机锌源和无机锌源条件下肉仔鸡组织中金属硫蛋白(MT)的基因表达。在肉仔鸡饲粮中以锌蛋白盐或硫酸锌形式添加锌200mg/kg饲喂6d或12d,比较肝、小肠MT和MTmRNA与骨锌作为评价锌源利用率的指标。3种指标均随锌量的增加而增加(P<0 001)。以骨锌为指标,锌蛋白盐的相对生物利用率为124%。此值在一定范围内类似于以几种组织MT和MTmRNA水平为指标的测定结果,对于肉仔鸡,MT基因的调控可能是评价锌相对生物利用率的敏感指标。这种方法可减少试验所需的时间和动物数量。     

微量元素锌的吸收、代谢及金属硫蛋白基因表达

本文通过分析锌吸收、代谢与金属硫蛋白(MT)的关系,表明锌可以直接调控金属硫蛋白基因表达,而金属硫蛋白的生物合成诱导也将调节体内锌的吸收、代谢,维持体内锌的稳态,为从分子水平研究锌的营养提供参考.     

微量元素与基因表达

动物的生长发育，都是基因表达的结果。大量研究表明：日粮中的微量元素对许多基因的表达均有影响。本从分子生物学的角度阐述了微量元素对基因表达的调控方式及其调控。     

饲粮中添加不同水平锌对生长獭兔脂肪沉积及脂肪代谢相关基因表达的影响

本试验旨在研究饲粮中添加不同水平锌对獭兔脂肪沉积及相关基因表达的影响.选择体重相近的3月龄獭兔160只,随机分为4组(每组40个重复,每个重复1只兔),分别饲喂添加0(对照组)、40、80和120 mg/kg锌(硫酸锌形式)的饲粮,预试期7 d,正试期49 d.结果显示:1)随着饲粮中锌添加水平的升高,生长獭兔肩胛脂肪...     

饲粮中锌添加水平对生长獭兔毛囊发育及相关基因表达的影响

本试验旨在研究饲粮中锌添加水平对生长獭兔毛囊发育及相关基因表达的影响.选择160只初始体重相近的3月龄健康獭兔,随机分为4组,每组40个重复,每个重复1只兔.4组獭兔分别饲喂在基础饲粮中添加0(对照组)、40、80和120 mg/kg锌(以硫酸锌的形式)的饲粮.预试期7 d,正试期49 d.结果显示:与对照组相比,饲粮...     

日粮锌源对肉仔鸡肝脏金属硫蛋白基因表达的影响

试验选用150羽Avian肉仔鸡,随机分成3组,分别饲喂不加锌的基础日粮和添加60mg/kg硫酸锌和氨基酸络合锌的日粮,以管家基因GAPDH为内参,采用RT-PCR方法研究两种锌源对肉仔鸡肝脏金属硫蛋白（MT）mRNA基因表达的影响。结果表明,日粮添加两种锌源锌均能够提高肝脏MTmRNA的丰度,但与硫酸锌相比,日粮添加氨基酸锌显著提高了肝脏MTmRNA基因表达的水平（P〈0.05）。     

基因组，基因表达与饲料

（接《新饲料》2008年第8期16页） 8 环境的作用 基因型的固有性质是不依赖于环境的，它是每种动物的基本特征。基因组由成千上万的基因组成，这些基因特定的时空表达是动物生长发育、维持健康和避免疾病等正常过程的指挥棒。然而，基因型的表达不可避免地受到环境的影响。     

基因组，基因表达与饲料

生物体生长发育过程中的一个基本行为就是定位于基因组中的基因系统的活动。因而,生物发育中不断的进行着具有时间和器官特异性的基因表达或抑制,这些过程最终引起特定蛋白的合成。来自基因组外或外界的环境信号会使这种特异性基因表达模式发生变化,从而产生多重效果,比如生长、分化、健康的维持、疾病的避免或发作以及生长抑制等。经过进化,人们已经意识到许多具有生物活性的日粮成分（即营养调节剂）可以控制基因组的表达。日粮中包含一系列重要的信号物质,这些物质可以使多细胞有机体调整其对复杂的环境变化的响应,进而影响到生长发育。     

CPA-LTB融合基因的构建与表达

利用PCR技术，从A型产气英膜梭菌染色体和pEWD299中分别扩增出a毒素（CPA）基因和LTB基因，通过分离、纯化、内切酶酶切、连接和转化，构建了含CPA—LTB融合基因表达质粒的重组菌株BL21（DE3）（pCPA—LTB）。经酶切鉴定和核苷酸序列测定证实，构建的重组质粒pET—CPA含有CPA—LTB融合基因，其基因序列和阅读框架均正确。经EISA检测和SDS—PAGE分析，重组菌株表达的CPA—LTB融合蛋白能够被α、LT毒素抗体所识别。重组菌株BL21（DE3）（pCPA—LTB）经IPTG诱导后，融合蛋白CPA—LTB的表达量占菌体总蛋白相对含量的12.5％。     

鱼类的体色及其调控

鱼类在自然环境条件下都有其各自特定的体色.体色不仅是鱼类分类的重要特征,也是其健康状态的衡量标准,同时体色正常与否也直接影响商品鱼的价格.鱼类的体色特征由遗传因素决定,是真皮层下面的各种色素细胞互相配合、互相作用的反映.鱼类色素细胞主要包括黑色素细胞、黄色素细胞、红色素细胞和虹彩细胞.体色变化主要受神经和内分泌调控.鱼类的年龄和性别、食物组成以及生存环境的变化会引起鱼类体色的变化.在人工养殖条件下,往往由于养殖环境剧烈变化、或使用缺乏有效天然色素源的饲料等因素,导致养殖鱼类体色异常,使其失去所特有的天然颜色和光泽.文章综述鱼类体色的形成机理及其变化的影响因素.同时,试图探讨养殖生产中鱼类体色异常的调控方法.     

细胞黏附分子1（ICAM-1）ScFv基因原核载体的构建及表达

应用PCR技术扩增ICAM-1ScFv基因,经纯化测序,得到约750bp的核苷酸片段,并构建了原核重组表达质粒pET20b-ICAM-1ScFv。将重组质粒转化至表达菌BL21（DE3）中,诱导后的SDS-PAGE分析显示,pET20b-ICAM-1ScFv表达量占菌体蛋白总量的18.4%。本试验将重组蛋白的表达条件进行优化,结果表明,ICAM-1ScFv蛋白在pET20b表达载体中的最佳表达条件为37℃诱导5h。     

猪食欲肽受体2基因真核表达质粒的构建及其表达

构建带有myc标签和Kozak序列的猪食欲肽受体2(OX2R)基因的真核表达质粒pcDNA3.1(+)-myc/OX2R,观察在HEK293T真核细胞中的表达。设计带有酶切位点(HindⅢ和XbaⅠ)的特异性引物,采用RT-PCR技术从猪的下丘脑中扩增OX2R基因,并克隆入pcDNA3.1(+)质粒中。用限制性内切酶酶切分析及测序分析证明构建成功后,用脂质体法转染HEK293T细胞,蛋白质印迹法检测OX2R基因的表达。结果,成功构建了带有myc标签和Kozak序列的pcDNA3.1(+)-myc/OX2R重组质粒,蛋白质印迹法检测该质粒可在真核细胞中表达。本研究为将来研究猪食欲肽受体2的功能奠定基础。     

鸡BCL10基因的克隆与表达

通过电子克隆手段,克隆到大小为959bp的cDNA序列。然后从鸡的脾脏提取RNA,用RT-PCR方法扩增出目的片段。将该片段连接到原核表达载体pET-32a和真核表达载体pEGFP-C1中,采用SDS-PAGE检测原核表达载体pET-BCL10在大肠杆菌中的表达,脂质体转染法将真核表达载体pEGFP-BCL10转入vero细胞,Western blotting检测其在细胞中的表达。结果显示,PCR扩增到735bp的DNA片段,原核表达载体和真核表达载体经双酶切和核酸测序表明载体构建成功。SDS-PAGE电泳检测到pET-BCL10重组质粒在大肠杆菌中表达。Western blotting检测到pEGFP-BCL10重组质粒在vero细胞中表达。结论表明,BCL10基因在鸡体内存在,该基因的重组质粒能在大肠杆菌和vero细胞中表达。     

Cloning and expression of goat interleukin-18 gene

We isolated and sequenced a 480 bp cDNA encoding mature goat interleukin-18 (gIL-18) from alveolar macrophages and splenocytes activated with LPS by RT-PCR. The gIL-18 gene was cloned into pET32a (+) vectors and sequenced. Nucleotide sequence of gIL-18 shares high homology with cattle. Fusional expression with pET32a (+) of gIL-18 of about 38kD was obtained by SDS-PAGE analysis after induction by IPTG in the E. Coli BL21 expression system. The recombinant protein can induce IFN-gamma production in PBMC. The IL-18 mRNA was constitutively detected in goat alveolar macrophages with or without LPS, While, enhanced expression was detected in splenocytes and liver cells if treated by LPS, and can be weakly detected in Peripheral blood mononuclear cells (PBMCs) treated by activators. Significant deference of IL-18 mRNA level may reflect the capacity to produce mature IL-18 in such tissues.     

猪白细胞介素-4基因的克隆与表达

利用RT-PCR技术,从被刺激诱导的PBMC中克隆IL-4基因,序列分析表明:克隆的猪IL-4基因序列与GenBank上登录的IL-4基因的核苷酸和氨基酸序列同源性分别为99%和97.8%.然后用表达型引物从T载体上扩增IL-4基因,双酶切PCR产物后与表达载体pGEX连接,构建重组表达质粒pGEX-IL-4,用IPTG诱导表达,表达产物经SDS-PAGE分析表明,表达出38 ku融合蛋白,占菌体总蛋白的30%以上,并且以包涵体的形式存在,这为猪重组IL-4规模化生产和疫苗佐剂的研制奠定了基础.     

牛肌肉生成抑制素基因功能区的克隆与原核表达

根据GenBank中牛肌肉生成抑制素（MSTN）基因序列设计了1对引物，在引物两端分别加EcoRⅠ和XhoⅠ识别位点。利用RT—PCR技术扩增出了牛MSTN功能区序列。分别构建克隆和原核表达载体，酶切、PCR鉴定及测序分析表明，该基因功能区序列的克隆载体和原核表达载体已成功构建。筛选阳性菌，经IPTG诱导，牛MSTN基因功能区在大肠埃希氏菌中成功表达。