中华草龟、中华花龟及其杂种F1代形态差异分析

采用聚类分析、判别分析和主成分分析3种多元统计方法分析和比较中华草龟(Chinemys reevesii)、中华花龟(Ocadia sinensis)及其杂种(Chinemys reevesii♀×Ocadia sinensis♂)F₁代养殖群体的体质量(Y)和背甲长(X1)、背甲宽(X2)、壳高(X3)等17个可量性状，研究三者的形态差异。聚类分析结果表明，杂种龟与母本中华草龟亲缘关系较近，聚成一组，而中华花龟与中华草龟、杂种龟相比，形态差异较大。用逐步判别法构建了3种龟的判别函数，中华草龟、中华花龟及其杂种的判别准确率分别为96.7%、95.0%和88.3%，其综合判别率为93.7%，可用于3种龟的初步形态鉴定。采用主成分分析法获得前4个主成分的贡献率分别为33.81%、11.01%、10.25%，及8.13%，累计贡献率达63.20%，其中对3种龟的形态差异起主要决定作用的是腹甲体型因子。主成分散点图显示，杂种龟与中华草龟、中华花龟均有较大的重叠，中华草龟与中华花龟区分明显。     

黄海和东海带鱼群体同工酶分析

采用水平淀粉凝胶电泳技术,对采自中国黄海和东海两个自然群体带鱼(Trichiurus haumela)肌肉和肝脏两种组织的9种同工酶(AAT、ALP、G3PDH、IDHP、LAP、LDH、MDH、PGM、SOD)进行了电泳分析,共检测出13个基因座位,其中3个(AAT*、PGM*、SOD*)为多态位点。两个群体的多态位点比例(P0*.99)分别为0.1538和0.0769,平均等位基因的有效数为1.0211和1.0164,平均观测杂合度(Ho)为0.0192和0.0038,平均预期杂合度(He)分别为0.0173和0.0037,群体间遗传距离(D)为0.0015。     

哲罗鱼(Hucho taimen)同工酶研究

采用聚丙烯酰胺凝胶垂直板电泳技术对乌苏里江哲罗鱼肌肉、心脏、肝脏和眼4种组织中ADH、EST、G-6-PDH、IDH、LDH、MDH、ME、POD和SDH等9种同工酶的分布及表达进行研究。结果表明,9种酶在4种组织中的表达呈现出明显的组织特异性。遗传多样性分析共记录11个基因座位,其中有2个位点(Adh-2和Est-1位点)为多态,多态座位比例为18.2%;群体平均杂合度(H)为0.0395,位点有效等位基因数(Ne)为1.0511,Shannon’s信息指数(I)为0.068,表明哲罗鱼群体的遗传多样性程度处于较低水平;卡方检验结果表明哲罗鱼偏离Hardy-Weinberg遗传平衡。     

鲢微卫星标记与生长性状的相关分析

为分析湘江鲢(Hypophthalmichthys molitrix)和长丰鲢(H.molitrix)群体的遗传多样性以及筛选与其生长性状相关的微卫星标记,应用96对微卫星引物,使用普通PCR扩增与毛细血管电泳技术,在湘江鲢和长丰鲢2个群体中共筛选到13个多态性较高的微卫星标记,基于这些微卫星标记并对湘江鲢和长丰鲢进行了遗传多样性分析和生长性状关联分析。结果显示：湘江鲢和长丰鲢的观测杂合度(Ho)和期望杂合度(He)均处于中度多态,PIC均值分别为0.422、0.440,表明两个鲢群体均具有中等多态的遗传多样性。其中,湘江鲢筛选出8个与生长性状显著相关的位点,长丰鲢筛选出2个与生长性状显著相关的位点。位于染色体LG5上的位点P086和位于染色体LG23上的位点P041均在两个鲢群体中找到显著相关的性状。     

长江草鱼多态微卫星位点的分离及后备亲鱼的遗传多样性分析

本研究采用磁珠富集法分离了10对具有多态性的草鱼(Ctenopharyngodon idellus)微卫星位点,并对140条长江野生草鱼组成的后备亲鱼群体的遗传结构进行了分析。结果显示:本试验得到的草鱼微卫星序列主要是以2个碱基为重复单位、重复次数在5～22之间的多重复单元,重复次数在10次以上的微卫星序列较易得到多态性;77个微卫星座位中,完美型、非完美型和混合型微卫星标记所占的比例分别为87.01%、2.60%和10.39%;群体遗传分析显示,10个多态性微卫星座位中,除了GC39座位外,其它座位都符合哈迪-温伯格平衡,适用于草鱼群体的遗传结构分析;每个座位检测到3～8个等位基因,平均有效等位基因数为3.9302,多态信息含量在0.4129～0.8107之间变动,平均为0.6678,除了GC78座位为中度多态外,其他9个座位均为高度多态。基因分化系数、Shannon指数、平均观测杂合度和平均期望杂合度的平均值分别为0.3457、1.4262、0.9511和0.7193,表明该群体的遗传多样性比较丰富。     

长臀遗传多样性的微卫星标记分析

利用55对微卫星引物对珠江和海南长臀基因组DNA进行了扩增,有23对能扩增出清晰条带,其中有11对在珠江长臀中表现多态性,9对在海南长臀中表现多态。这些多态性位点的等位基因数在2~4之间,平均等位基因数2.91个。结果显示:珠江长臀的平均观测杂合度(Ho)是0.45,平均期望杂合度(He)是0.46,平均多态信息含量(PIC)为0.377;海南长臀的平均观测杂合度(Ho)和平均期望杂合度(He)分别是0.58、0.53,平均多态信息含量(PIC)为0.426。两群体间的遗传相似度为0.875、遗传距离为0.133。     

中华草龟、中华花龟及其杂种F_1稚龟的生长比较

对中华草龟、中华花龟及杂种龟稚龟的生长进行了研究与比较。在30℃的条件下,人工饲养中华草龟稚龟经98d的养殖,平均体重由5.56g增重到40.56g,平均日增重0.36g;中华花龟稚龟经98d的养殖,平均体重由6.38 g增重到55.62g,平均日增重0.50g;杂种龟稚龟经98d的养殖,平均体重由5.85g增重到46.83g,平均日增重0.42g。在1龄生长速度上,中华花龟〉杂种龟〉中华草龟。     

美国虹鳟鱼同工酶分析

运用聚丙烯酰胺凝胶电泳法结合酶的特异性染色方法对美国虹鳟5种组织(眼睛、心脏、肾脏、肝脏和肌肉)的乳酸脱氢酶(LDH)、酯酶(EST)、葡萄糖-6-磷酸脱氢酶(G-6-PDH)、过氧化物酶(POD)、谷氨酸脱氢酶(GDH)、α-淀粉酶(α-AMY)和苹果酸脱氢酶(MDH)7种同工酶进行了初步研究,并对7种酶的同工酶位点及酶谱表型进行了分析。结果表明:美国虹鳟LDH、EST、G-6-PDH、POD、GDH和MDH存在不同程度的组织特异性,而α-AMY则无明显组织差异。EST由8个基因位点编码;LDH酶带多于典型的5条酶带;MDH具有线粒体型(m-MDH)和上清液型(s-MDH)两种类型;共记录了24个基因座位,其中5个为多态座位,多态座位比例为20.83%,有效等位基因数为1.4167,表明美国虹鳟的遗传多样性居较高水平。     

基于微卫星标记的22个道氏虹鳟选育家系的遗传多样性研究

采用10对微卫星标记分析了道氏虹鳟(Oncorhynchus mykiss)22个选育家系的遗传多样性及遗传结构。结果显示:22个道氏虹鳟家系均具有较高的遗传多样性,在9个微卫星位点共获得71个等位基因,平均等位基因数为7.89;平均多态信息含量(PIC)为0.74;平均观测杂合度(Ho)和期望杂合度(He)分别为0.780和0.771。进行Hardy-Weinberg平衡检验,发现22个群体在不同位点均发生了不同程度偏离。计算遗传距离,发现部分家系之间遗传距离较大。综合分析,得出22个道氏虹鳟家系中家系8、家系11、家系12、家系21、家系28、家系29遗传多样性相对丰富,具有较大的遗传潜力,可作为下一代繁育亲本。研究结果对22个道氏虹鳟家系的人工选育及其合理的推广应用具有一定的指导意义。     

三疣梭子蟹野生群体同工酶的遗传多态性分析

采用聚丙烯酰胺不连续凝胶垂直电泳技术对三疣梭子蟹野生群体的同工酶进行检测.分析了48个样本的11种同工酶在三疣梭子蟹肌肉中的表达情况.11种同工酶(MDH、LDH、ME、SOD、 EST、SDH、IDH、ADH、POD、CAT、AAT)共检测出20个基因座位,其中Me-2、Sod-3、Cat-3、Ldh-2共4个座位呈多态(P0.99),多态座位百分数P为20%.平均每个座位的有效等位基因数目Ae为1.230,预期杂合度He为0.094,实际杂合度Ho为0.175.同时还分析了三疣梭子蟹4个多态座位的Hardy-Weinberg遗传偏离指数d.与日本绒螯蟹、中华绒螯蟹等相比,三疣梭子蟹野生群体的遗传多样性水平较高,种质资源还处于较好的状态.     

红镜鲤6个微卫星座位的遗传多样性初探

利用6个多态性微卫星标记对红镜鲤(Cyprinus carpio red var．mirror)进行了群体遗传多样性评估。结果显示,6个座位的平均等位基因数为4．3个；每个座位包含的平均多态信息含量为0.6522；平均每个座位的观测杂合度和预期杂合度分别为0．7792和0.7111,有2个座位具有极高的观测杂合度(1．00)；除MFW1外,其余各座位均偏离了哈代—温伯格平衡(P＜0．01)。这表明红镜鲤群体仍具有较高的变异水平,但遗传漂变和人工选择已对群体产生了较大影响。     

山女鳟同工酶的研究

采用淀粉凝胶电泳方法，对山女鳟的肝脏、肌肉等组织的LDH、MDH、IDH、ADH、EST、SOD等同工酶进行电泳，并对其表型进行生化遗传分析。结果表明，在检测到6种同工酶是由13个基因座位编码；其中m-MDH基因座位呈多态，其多态座位比例为7.6%，平均杂和度为0.059。在生化遗传水平上山女鳟表现出较低的遗传变异。     

小刀蛏群体内同工酶的生化遗传分析

采用聚丙烯酰胺凝胶不连续垂直平板电泳技术对采自舟山嵊泗海区的小刀蛏群体不同个体的苹果酸脱氢酶、苹果酸酶、细胞色素氧化酶、酯酶、异柠檬酸脱氢酶、过氧化物酶、超氧化物歧化酶和葡萄糖-6-磷酸脱氢酶8种同工酶进行了生化遗传分析,共记录了21个基因座位,37个等位基因,其中有11个基因座位(Mdh-1、Mdh-2、Me-1、Me-2、Pod-1、Pod-2、Pod-3、Cod-3、Icd-1、Icd-2和Icd-3)为多态,多态座位比例为52.38%.小刀蛏群体内具一定的遗传变异能力.     

美国金鳟的同工酶分析

本实验运用聚丙烯酰胺凝胶电泳法对养殖型美国金鳟眼(E)、心(H)、肾(K)、肝(L)、肌肉(M)五种组织的乙醇脱氢酶(ADH)、酯酶(EST)、葡萄糖-6-磷酸脱氢酶(G-6- PDH)、谷氨酸脱氢酶(GDH)、乳酸脱氢酶(LDH)、苹果酸脱氢酶(MDH)和过氧化物酶(POD)等7种同工酶进行电泳研究。结果显示：美国金鳟中ADH、EST、G-6-PDH、GDH、LDH、MDH、POD、SOD 7种同工酶都有不同程度的组织特异性；美国金鳟群体同工酶分析共记录18个基因座位,其中有8个基因座位为多态,等位基因总数为26个,从而得出多态座位百分数P为44．44％,位点有效等位基因数Ne=1．4444,表明美国金鳟群体遗传多样性偏高。     

基于微卫星标记建立翘嘴鳜亲子鉴定技术

利用9个多态性较高的微卫星标记对翘嘴鳜(Siniperca chuatsi)进行亲子鉴定分析。结果显示,22个家系翘嘴鳜个体中共观测到95个等位基因,其观测杂合度和期望杂合度的平均值(范围)分别为0.578(0.219~0.800)和0.607(0.200~0.806),多态信息含量(范围)为0.552(0.187~0.787)。通过软件Cervus统计分析得到9个微卫星座位累计排除率为99.9658%,在27个可能的父母对条件下,混养养殖家系后代个体鉴定准确率为91%,研究结果表明筛选的这些多态微卫星分子标记可以用于翘嘴鳜优势家系的鉴定和分离,通过验证的微卫星标记建立的亲子鉴定技术为基础选育翘嘴鳜生长速度快的优势家系,为培育出生长速度快、抗病力强的翘嘴鳜新品种奠定基础。     

基于转录组数据的银鲴微卫星位点筛选

采用Illumina高通量测序技术对银鲴(Xenocypris argentea)肝脏组织进行转录组测序分析,筛选微卫星标记并进行多态性检验。共获得7 272个微卫星位点。随机选取48个4碱基以上重复类型的SSR位点进行引物设计和PCR验证,有47对可以扩增出清晰稳定的条带。在上述47个位点中随机选择26对在洞庭湖银鲴群体中进行多态性分析,结果表明,具有多态性的微卫星引物为21对。不同多态位点得到的等位基因数范围为3~15,平均基因数为7.29±3.94,观测杂合度(Ho)、期望杂合度(He)、多态信息含量(PIC)以及香浓-威尔指数(H)平均值分别为0.532 7±0.211 4、0.613 6±0.196 4、0.564 6±0.198 0和1.302 0±0.577 9。21个微卫星位点中,有6个显著偏离哈代-温伯格平衡(Hardy-Weinberg equilibrium,HWE)。     

基于2b-RAD简化基因组测序的三门湾海域3种优势鱼类群体遗传多样性分析

为评估浙江省三门湾海域鱼类种质资源现状,采用简化基因组测序技术,对三门湾海域3种优势鱼种(白姑鱼Pennahia argentata、中华栉孔虾虎鱼Ctenotrypauchen chinensis和龙头鱼Harpadon nehereus)进行群体遗传多样性分析。结果表明,白姑鱼、中华栉孔虾虎鱼、龙头鱼获得单核苷酸多态性(SNP)位点分别为125 225个、51 283个、55 128个,变异位点比例分别为1.74%、0.79%、0.54%,多态信息含量(PIC)分别为0.208、0.177、0.221,核苷酸多样性(P_i)分别为0.259、0.219、0.281。其中白姑鱼观测杂合度小于期望杂合度,显示出群体内纯合子较多,杂合子缺失;而中华栉孔虾虎鱼、龙头鱼观测杂合度大于期望杂合度,显示出杂合过度。3种鱼类群体以龙头鱼观测杂合度最高。综合以上SNP位点多样性、多态性信息含量、群体遗传多样性比较结果,三门湾海域3种鱼类群体变异位点比例均较低,相同群体的个体间遗传分化较小,遗传结构较稳定,总体上遗传多样性处于较低水平,应进一步加强资源保护和恢复。     

黄海和日本海黄(鱼安)(鱼康)的形态和同工酶差异

对中国黄海及日本新泻县粟岛近海的黄(鱼安)(鱼康)形态进行了比较研究,并采用水平淀粉凝胶电泳技术分别分析了黄海和日本海黄(鱼安)(鱼康)的遗传结构及其遗传多样性.结果表明,黄海和日本海黄(鱼安)(鱼康)群体计数性状中除第2背鳍鳍条数平均值表现出一定的差异,其余性状没有明显差异;二者在体长/臀鳍基长、头长/眼径指标未表现出显著差异,其余可量性状比上表现出了显著差异.同工酶分析表明,中国黄海黄(鱼安)(鱼康)群体共记录了8个基因位点,其中,LDH*、AAT*、GPI*和G3PDH*共4个基因位点呈多态,其多态座位比例为0.5,平均观测杂合度和预期杂合度分别为0.027和0.026,平均有效等位基因数为1.028,遗传偏离指数均大于零;而检测的日本海群体的6个基因位点中,没有出现多态位点.黄海和日本海黄(鱼安)(鱼康)群体间的遗传距离为0.000 46,二者的遗传多样性水平较低,群体间没有明显的遗传分化.     

酯酶和乳酸脱氢酶在人工雌核发育鲢近交F1不同组织中的表达

采用聚丙烯酰胺水平平板电泳法研究了人工雌核发育鲢近交F1Ⅰ系、Ⅱ系、野生鲢、养殖鲢和雄鲤的肝、肾、心、眼和肌肉5种组织的酯酶(EST)和乳酸脱氢酶(LDH)。比较发现:(1)雌核发育鲢近交F1Ⅰ系、Ⅱ系和野生鲢的同工酶谱基本一致,雄鲤明显区别于鲢;(2)从酯酶图谱可发现,雌核发育近交鲢F1Ⅱ系的群体内有多态现象,肝、肾、肌肉的多态位点比例分别为0·6000、0·3333、0·5000,遗传杂合度分别为0·7485、0·6622、0·1139;(3)肝脏的乳酸脱氢酶中出现C带,且C带表现出多态性;(4)没有发现能区别鲢各群体的遗传标记。     

中华鳖黄河群体选育F3与大陆代表性群体遗传变异的微卫星分析

利用微卫星分子标记技术,对中华鳖(Trionyx sinensis)黄河群体选育F3世代与其基础群体—黄河野生群体以及淮河、鄱阳湖、洞庭湖、太湖野生群体的遗传变异进行了测定和比较分析。结果表明:①从所筛选的14个微卫星位点中,6个群体共检测出334个等位基因;平均等位基因数(N a)为3.6⁴.2,平均有效等位基因数(N e)为2.534.2,平均有效等位基因数(N e)为2.53².99,平均观察杂合度(H o)为0.47142.99,平均观察杂合度(H o)为0.4714⁰.5821,平均期望杂合度(H e)为0.551 50.5821,平均期望杂合度(H e)为0.551 5⁰.599 7,平均多态信息含量(PIC)为0.487 20.599 7,平均多态信息含量(PIC)为0.487 2⁰.540 6,平均Shannon多样性指数(H')为1.0010.540 6,平均Shannon多样性指数(H')为1.001¹.106,表明这6个中华鳖群体均具有较为丰富的遗传多样性。②基于D遗传距离构建的UPGMA聚类树显示,黄河群体选育F3世代与黄河群体聚为一支,鄱阳湖群体与洞庭湖群体聚为一支,淮河群体与太湖群体聚为一支。③群体间F统计量及AMOVA分析表明,黄河群体选育F3世代与黄河群体遗传分化不显著(P>0.05),但与淮河、鄱阳湖、洞庭湖及太湖群体遗传与差异极显著(P<0.01)。④三代选育已使黄河鳖选育群体渐趋纯化,其遗传多样性略低于其它群体,但其F3世代仍保持较高的遗传多样性,显示具有较大的选育潜力。