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1.
采用四种方法:即①单克隆抗体检测抗原的酶联免疫吸附试验(Ag-ELISA)②检测抗体的酶联免疫吸附试验(Ab-EUSA)③表膜检查(BCE)④小白鼠接种(MI),检查了肯尼亚183头骆驼锥虫的循环抗原,BCE查出37头阳性20%),MI60头阳性(33%),Ag-ELISA63头阳性(34%),Ab-ELISA检出90头阳性(49%)。其中BCE未能检出的24头中,Ag-ELISA检出18头(75%)。所有阳性头数中,Ag-ELISA检出93%,Ab-ELISA95%。根据55头的结果,阳性与阴性之间Ag-ELISAOD值差异极显著(P<0.0001),Ab-ELISAOD值差异不显著。因此,用Ag-ELISA或结合BCE诊断伊氏锥虫感染比用AB-ELISA更理想。 相似文献
2.
我们对国外引入的IBD弱毒疫苗进行了分离,复制和测定,该病毒可接种SPF鸡胚增殖,致难胚死亡,并产生IBD病变;在SPF鸡胚CFF上繁殖,产生CPE变化,并可被行异性IBD抗血清中和;琼脂扩散与IBD(+)血清有明显的沉淀线,因此说明所分离的毒株是IBD病毒,并测得其毒价为10^-6TCID50。 相似文献
3.
作者建立了两种抗原捕捉酶联免疫吸附试验方法(多抗和单抗AC-ELISA),用于滴定用不同宿主系统增殖的传染性氏囊毒病,这些宿主系统包括BGM-70传代细胞系。鸡胚成纤维细胞和鸡法氏囊,两种检测方法都有较高的特异性,但是多克隆AC-ELISA比单克AC-ELISA更加敏感(P〈0.05),结果还表明,滴定IBDV抗原的常规方法(细胞培养物和鸡胚)比多抗AC-ELISA更敏感。 相似文献
4.
ABC—Dot—ELISA检测鸡传染性支气管炎病毒 总被引:4,自引:0,他引:4
建立了ABC-Dot-ELISA检测鸡传染性支气管炎病毒(IBV)的方法,其最佳反应条件是:包被液为0.05mol/LpH9.6的碳酸钠-碳酸氢钠缓冲液(CBS),免疫IBV IgG的最佳工作浓度为1:80;抗原的最佳浓度为1:800;封闭剂选用0.01mol/L pH7.4含30mL/L白明胶的PBS,B-AgG和ABC-HEP的最佳工作浓度为1:200。用ABC-HEP的最佳工作浓度为1:20 相似文献
5.
目前检测牛种布鲁氏菌(Brucelaabortus)抗体常用的血清学方法有缓冲平板抗原试验(BPAT)、补体结合试验(CFT)、间接酶联免疫试验(I-ELISA)和竞争酶联免疫试验(C-ELISA)。本文介绍的荧光极化法(fluorescencepo... 相似文献
6.
光敏生物素标记EDSV—DNA探针检测鸡减蛋综合症(EDS)的研究 总被引:1,自引:0,他引:1
应用光敏生物素标记EDSV-DNA与pUC19重组质粒DNA做探针,检测人工发病减蛋综合症蛋鸡的粪便,蛋,输卵管样品,以新城疫病毒(NDV),传染性病毒(IBDV),传染性支气管炎病毒(IBV),包涵体肝炎病毒(IBHV)作对照。实验结果显示:探针能特异地检出EDS病鸡粪便,输卵管,蛋清样品中的病毒,与NDV,IBDV,IBV及IBHV均呈阴性反应。探针灵敏度达10pgEDSV-DNA。 相似文献
7.
鸡传染性法氏囊病病毒野毒株VP2基因高可变区酶切位点分析 总被引:5,自引:1,他引:4
参照澳大利亚鸡传染性法氏囊病病毒( I B D V)00273 毒株基因组序列设计的 1 对引物,位于 V P2 高可变区两端,通过 R T P C R,扩增了 5 个 I B D V 山东分离株 V P2 基因的 607~1 080 位核苷酸片段(aa203~306)。 P C R 产物经纯化后,分别用 Dra Ⅰ、 Sac Ⅰ、 Ssp Ⅰ、 Pst Ⅰ和 Sau3 A I共 5 种限制性内切酶( R E)进行消化处理,结果 5 个分离株均为 Dra Ⅰ(- )、 Sac Ⅰ(- )和 Sau 3 A I(+ ), L C2 和 T A 株为 Ssp Ⅰ(+ ), L C1 和 J N 株为 Ssp Ⅰ(- ), L C1 和 L C2 株为 Pst Ⅰ(+ ), J N、 L L 和 T A 株为 Pst Ⅰ(- );5 个分离株的酶切图谱与美国变异株迥异,而 T A 株与日本超强毒株 9011 相类似。5 个分离株与现用疫苗株对比,至少在 V P2 可变区内存在着一定的差异,这可能是 I B D V 接种免疫鸡群仍然暴发 I B D 的原因之一。 相似文献
8.
用从当地分离鉴定的山羊B组轮状病毒KB-63毒株,在剥夺初乳的山羊羔体内传代繁殖病毒,制备抗原,建立了酶联免疫吸附试验(ELISA)、斑点酶联免疫吸附试验(Dot-ELISA)及生物素-亲和素系统酶联免疫吸附试验(BAB-ELISA)。这三种方法经阻断试验、重复性试验以及交叉试验表明,其特异性、重复性好。以双盲法将此三种方法与对流免疫电泳法(CIE)和聚丙烯酰胺凝胶电泳法(PAGE)作了对比研究, 相似文献
9.
旋毛虫肌幼虫可溶性抗原,排汇分泌抗原的电泳分析 总被引:2,自引:0,他引:2
枉文报道了应用十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE),聚丙烯酰胺凝胶等电聚焦(IEF)电泳及二维电泳(IEF/SDS-PAGE)对旋毛虫肌幼虫排汇分泌(ES)抗原和肌幼虫可溶性抗原的分析结果。肌幼虫ES抗原经SDS-PAGE后用考马斯亮蓝染色蛋白质,结果显示16条蛋白带,分子量范围21 ̄80KD,其中主带9条。IEF电泳后分别用PAS染多糖、考马斯亮蓝R-250染蛋白质、Nile' 相似文献
10.
ELISAA法检测犬腹泻粪样中的犬冠状病毒 总被引:6,自引:0,他引:6
用FE细胞增殖犬冠状病毒(CCV)参考株,分别免疫家兔和BALB/c小鼠制备CCV多抗和单抗,建立了夹心ELISA及Dot-ELISA诊断方法。在检测的84例犬腹泻粪样中,多抗、单抗夹心法显示CCV阳性16例,Dot-ELISA阳性13便,后13例包括在前16例中,从84例腹泻犬粪样中随机取3例作CCV、犬细小病毒(CPV)双项检测,CCV阳性16例,CPV阳性6例,CCV、CPV混合感染4例。结 相似文献
11.
用几种电泳方法分析牦牛肝片吸虫不同部位抗原 总被引:1,自引:0,他引:1
应用SDS-PAGE、等电聚焦电泳(IEF)及双向电泳三种电泳方法分析牦牛肝片吸虫成虫四种抗原(头抗原-HA、体抗原-BA、体表抗原SA、分泌排泄抗原-ES)。SDS-PAGE结果表明,BA、HA、SA分子量在12~100kD之间,ES在12.3~26kD之间,蛋白质染色BA、HA、SA、ES分别显示25、24、18、9条带;IEF分析肝片吸虫分别得34、33、28、22条带,主要由酸性蛋白质组成,主要谱带在pI4.20~6.55内;双向电泳分析BA、ES多肽斑点为69、30个 相似文献
12.
13.
PCR结合分子杂交法检测鸡传染性支气管炎病毒 总被引:6,自引:2,他引:4
利用逆转录-PCR(RT-PCR)特异性扩增鸡传染性支气管炎病毒(IBV)基因组中M基因和N基因之间一段核酸片段。以pUC19质粒载体将此片段克隆,用EcoRI和HindⅢ酶切此重组质粒,回收克隆片段后,制成生物素标记的核酸探针。用RT-PCR及生物素核酸探针法分别对IBV,IBDV,ILTV,MDV及NDV进行检测,结果证明该方法为IBV特异性检测方法。对人工感染IBV的SPF鸡口腔棉拭样品进行跟踪检测,证明本方法能在SPF鸡接毒后1~10d内检出IBV。 相似文献
14.
用IBD-ELISA快速诊断盒对IBDV阳性法氏囊囊毒及IBD阳性出血清,IBDV阴性法氏囊及IBD阴性血清和IB,ILT,ESD-76,REO,ND,MD等6种鸡传染病的抗原及阳性血清检测,只有IBDV阳性法氏囊囊毒及阳性血清呈阳性反应,证明快速诊断盒对IBDV法氏囊囊毒抗原及其抗体的检测是特异的,与其它6种传染病的抗原和抗体无效叉反应。与AGP对比试验结果表明,检测IBDV阳性法氏囊囊毒时,快 相似文献
15.
麻雀体内传染性法氏囊病病毒的分离鉴定及理化特性研究 总被引:5,自引:1,他引:4
从传染性法氏囊病(IBD)阳性麻雀体内分离到了一株病毒,用传染性法氏囊病病毒(IBDV)单克隆抗体心ELISA试验和DIG-标记IBDVcDNA探针班点杂交试验证明该病毒为IBDV。病毒可适应于鸡胚和鸡胚成纤维细胞,产生细胞病变效应(CPE)。病毒血清型为I型,病毒代谢抑制试验证明其基因组为RNA,病毒核酸的电泳图谱呈两条特征带。病毒对乙醚不敏感PH2.0不能灭活可使病毒失感染性,56℃作用3小时 相似文献
16.
从中国发病鸡群中分离的鸡减蛋综合征病毒(EDSV)AA-2株,经常规方法提取其病毒核酸后,构建了限制性内切酶PstⅠ及HindⅢ水解片段的基因文库。对其中HindⅢ-F片段(52.9~58.9mu)的正反2条链的序列测定发现,其反链存在1个编码容量为387个氨基酸(aa)的开放读码框架(openreadingframe,ORF),经Genebank/EMBL同源搜寻后证实其编码产物为EDSV的DNA结合蛋白(DBP)。与其他腺病毒DBP的氨基酸序列进行同源比较,其N端同源性在19.0%~46.2%之间,C端同源性在27.7%~60.4%之间。腺病毒DBP的3个保守序列CR1,CR2,CR3在EDSVDBP中有较大变化,但EDSVDBP的锌指框架(Zn2+fingermotif)却保留了对其功能必需的残基。 相似文献
17.
鸡,鸭体内传染性法氏囊病病毒的分离及理化性质比较 总被引:2,自引:0,他引:2
从疑似传染性法氏囊病(IBD)病鸡及同群饲养的鸭体内各分离到1株病毒,用传染性法氏囊病病毒(IBDV)单克隆抗体夹心ELISA试验证明两病毒均为IBDV,病毒血清型为Ⅰ型。病毒可致死鸡胚,适应于鸡胚成纤维细胞并产生细胞病变(CPE)。理化性质比较表明,两病毒为同源IBDV。研究表明,鸭可成为IBDV的携带者或传染源。 相似文献
18.
PCR检测鸡减蛋综合征病毒 总被引:3,自引:0,他引:3
根据已报道的鸡减蛋综合征(EDS-76)病毒DNA序列,设计合成了1对引物,建立了EDS-76病毒的双温式聚合酶链反应(PCR)诊断方法。该方法对EDS-76病毒长春株、河南株和广东株扩增结果均为阳性;而对致死鸡胚孤儿病毒(CELOV)、鸡病毒性关节炎病毒(VAV)、鸡传染性支气管炎病毒(IBV)、鸡传染性法氏囊病病毒(IBDV)和鸡新城疫病毒(NDV)的扩增结果均为阴性。可检测EDS-76病毒DNA为0.3×10-4pg。结果表明该方法特异且敏感。此外,将常规的三温式PCR的操作规程改为双温式,反应体积由常规50~100μL改为20μL,使其更加快速、简便、经济 相似文献
19.
抗鸡传染性法氏囊病病毒单克隆抗体中和株的建立 总被引:6,自引:1,他引:5
将纯化的鸡传染性法氏囊病病毒(IBDV)组织毒免疫的BALB/c鼠脾细胞与SP2/0骨髓瘤细胞融合,用ELISA,病毒中和试验检测分泌抗体,获得了6株稳定分泌抗IBDV单隆抗体的杂交瘤细胞,命名为NIB-1,NIB-2,NIB-3,NIB-4,NIB-5,NIB-6;6株MCAb均具ELISA特性和免疫沉淀特性,亚类鉴定表明,前4株属于IgG2a,后2株属于IgG1。杂交瘤细胞冻存6个月后复苏,均 相似文献
20.
对扬州地区某鸡场当前流行的IBD强毒株进行分离,并在10、35日龄时对两批IBD阴性鸡(北京白鸡)作人工感染,与J1C7E3标准强毒株的致病力进行了系统的比较。结果证实IBDCOB-C1强毒株的毒力致病性远远大于J1C7E3毒株,IBD人工感染京白Ⅰ系非免疫雏鸡后发病快、病程急、死亡率高,发病率达100%、死亡率为80%。病死鸡病变典型一致,COB-C1强毒株能使SPF鸡胚致死、死亡胚胎病变显著,头腹水肿,全身出血,头、趾尤为明显,对NDⅣ系疫苗免疫后可造成明显的免疫抑制。扬州地区分离的COB-C1是一株超强毒株,其抗原性与标准毒株蛋白结构的差异正进一步研究 相似文献