地高辛标记DNA探针检测伪狂犬病的研究

利用伪狂犬病病毒特异性扩增产物制成地高辛标记的探针，对闽Ａ株，鄂Ａ株，Ｂａｒｔｎａ株，英国株及临床病料进行检测，其结果与ＰＣＲ检测结果相符，准确率为１００％，灵敏度达到２ｐｇＤＮＡ，试验认为该探针具有灵敏、特异、安全的特点     

用核酸探针检测伪狂犬病的研究

用光敏生物素标记伪狂犬病毒（ＰＲＶ）特异性糖蛋白ＧＰ５０克隆重组质粒ＰＵＰ作为探针,检测实验感染乳猪１５头份以及屠宰场随机采样１５头份证明通过ＰＣＲ和分子克隆技术制备的ＰＲＶ特异性糖蛋白基因片段的光敏生物素探针,能有效地用于临床检测伪狂犬病。     

地高辛标记空肠弯曲菌DNA探针的研究

应用地高辛标记核酸技术将地高辛结合到空肠弯曲菌染色体ＤＮＡ上,制备了地高辛标记的ＤＮＡ探针。地高辛标记的空肠弯曲菌ＤＮＡ探针仅与空肠弯曲菌ＣＪ１、ＣＪ２发生反应,而与大脾性杆菌、鼠沙门氏菌、金黄色葡萄球菌、副结核分枝杆功不发生反应,具有很高的特异性,其敏感性可检测出０．２２ｎｇ的样品ＤＮＡ,较光敏生物素（８ｎｇ）、＾３２Ｐ同位素（４ｎｇ）标记的核酸探针高。     

地高辛标记空肠弯曲菌DNA探针的研究

应用地高辛标记核酸技术将地高辛结合到空肠弯曲菌染色体 Ｄ Ｎ Ａ 上,制备了地高辛标记的 Ｄ Ｎ Ａ 探针。地高辛标记的空肠弯曲菌 Ｄ Ｎ Ａ 探针仅与空肠弯曲 Ｃ Ｊ１、 Ｃ Ｊ２ 发生反应,而与大肠杆菌、鼠伤寒沙门氏菌、金黄色葡萄球菌、副结核分枝杆 菌不发生反应,具有很高的特异性。其敏感性可检测出０．２２ ｎｇ 的样品 Ｄ Ｎ Ａ,较光生物素（８ ｎｇ）、 Ｐ同位素（４ ｎｇ）标记的核酸探针高。     

地高辛标记核酸探针检测鸭瘟病毒

鸭瘟是鸭、鹅和其他雁形日禽类的一种急性、热性、啦血性传染病．特，征足流行广泛，传播迅速．发病率高和死亡率大。由于鸭瘟引起死亡、淘汰和产蛋下降，给发病地区的商品鸭和产蛋鸭造成很大的经济损失，目前．国内检症、诊断该病常用的方法有病毒分离、琼脂扩散试骑、酶联免疫吸附试验等。国内尚未见地高辛标记核酸探针检测鸭瘟病毒的报道。     

伪狂犬病

伪狂犬病是由伪狂犬病病毒引起的家畜和野生动物的一种急性传染病。成年猪呈隐性感染或有上呼吸道卡他性症状，妊娠母猪发生流产、死胎，哺乳仔猪出现发热、脑脊髓炎和败血症症状，最后死亡。近几年来，疫情在不断扩大，对我国养猪业构成严重威胁。     

我国伪狂犬病现状及伪狂犬病疫苗的应用

伪狂犬病(Pseudorabies,PR)又叫奥叶兹基氏病(Aujeszkysdisease,AD)是由伪狂犬病病毒(PrV)又名猪疱疹病毒I型(SuisherpesvirusI)所引起的多种家畜、野生动物、伴侣动物和实验动物的一种急性传染病。在自然条件下,本病最常见于猪、牛、羊、犬、猫和鼠类,现以猪感染最为普遍。临床上多以发热、骚痒(猪除外)和急性脑脊髓炎为主要症状。猪和鼠是此病的主要自然宿主和传染源。该病具有高度的传染性,一旦在猪群中出现,将很快通过空气和接触经呼吸道传染给其它猪只和猪场,近来的研究表明,伪狂犬病病毒还能通过乳汁和生殖道感染。特别是在集约…     

探针检测鸭黄病毒的地高辛标记DNA的制备与应用

利用RT-PCR方法扩增鸭黄病毒的NS3基因406bp的特异性片段,回收并纯化PCR产物,用地高辛标记,制备核酸探针。特异性试验结果表明,该探针仅与鸭黄病毒的核酸特异性杂交,而与鸭瘟病毒、H9N2禽流感病毒、新城疫病毒、传染性法氏囊病病毒、减蛋综合征病毒的核酸杂交均为阴性。敏感性试验表明,该探针对鸭黄病毒的RNA最低检出限量为100μg/L。对疑似黄病毒感染鸭的肝脏、肺脏、脾脏、输卵管、卵泡膜和泄殖腔棉拭子进行检测,以卵泡膜的检出率最高。该研究为鸭黄病毒感染的诊断和流行病学调查提供了一种可靠的方法。     

地高辛标记DNA分子中W316bp特异片段成探针的研究

以W（5‘-CGGCCCCGGT-3‘）为随机引物通过RAPD（Random Amplified Polymorphic DNA)-PCR扩增技术从高产王浆西峰的不同三品系（浙农大、平湖和萧山等意峰）的DNA分子中获得的共同特异W316bp(bp,base pair)片段，用非放射性标记物地高辛（digoxigenin,DIG)使用随机引物标记法制备成DIG－W316bp探针。结果：此探针可与高产王浆西蜂的DNA基因组及扩增产物分别进行斑点杂交、Southern杂交以此鉴定高产王浆西蜂。     

Dot-PPA-ELISA检测猪血清伪狂犬病抗体的研究

本研究建立了Dot-PPA-ELISA检测猪伪狂犬病抗体的方法.制备的诊断膜片PRV点样抗原含量为0.5μg,可以检测的最低猪IgG含量为1.398×10-8g,灵敏性高.不与猪瘟、猪细小病毒病、猪衣原体病、布氏杆菌病、日本乙型脑炎、口蹄疫阳性血清发生交叉反应,特异性好.研究初步确定检测猪伪狂犬病抗体的阳性标准为血清效价1:64以上.试验结果表明:该法具有操作方便、快速,结果客观,易于判读等优点,可应用于猪场伪狂犬病的诊断和抗体检测.     

伪狂犬病检测技术研究进展

伪狂犬病(pseudorabies，PR)是一种可感染多种动物的高度接触性传染病，作者综述了到目前为止的伪狂犬病诊断技术，其中包括传统的病毒分离技术、实验室的血清学检测技术以及分子生物学诊断技术等，着重对目前在全世界应用广泛的ELISA技术进行了介绍。     

地高辛标记的核酸探针检测EDS病毒的研究

地高辛标记的核酸探针检测ＥＤＳ病毒的研究王雪敏（邯郸农业高等专科学校牧医系河北永年０５７１５０）郑明球蔡宝祥陈溥言（南京农业大学动物医学院１材料与方法１．１地高辛标记的ＥＤＳ病毒核酸探针制备将ＥＤＳ病毒ＮＥ４株（南京农大传染病教研室提供）鸭胚尿囊液（...     

猪伪狂犬病的防治

某猪场是一个年出栏万头商品瘦肉猪的出口基地,1997年3~4月份发生伪狂犬病,造成58头母猪流产、早产及产木乃伊胎.占能繁母猪的10%;哺乳仔猪发病55窝,死亡仔猪348头,仔猪发病死亡率70.3%,其中20窝新生仔猪产后数天内整窝发病死亡,病死率100%.现作如下报道:     

地高辛标记PPV—DNA—C及PUP重组质粒探针的比较研究

应用分子克隆技术制备的猪细小病毒复制型ＤＮＡ的ＰｓｔⅠ／ＨｉｎｄⅢ双酶切片段Ｃ及被克隆到ＰＵＣ１９中的Ｃ片段形成的重组质粒ＰＵＰ利用非放射性的地高辛标记后制备两种探针。分别对不同来源的猪细小病毒ＤＮＡ及ＰＵＰ重组质粒于硝酸纤维素膜上打点杂交，免疫呈色后均为阳性反应，而对照的猪瘟病毒、乙型脑炎病毒、伪狂犬病毒、ＰＫ－１５细胞的核酸均为阴性反应。通过对已知量的ＰＰＶ－ＤＮＡ检测发现Ｃ探针及ＰＵＰ探针的最低检出限量分别为４０ｐｇＤＮＡ和４ｐｇＤＮＡ。重组质粒ＰＵＰ探针比双酶切后的Ｃ片段探针敏感１０倍     

规模猪场猪伪狂犬病的净化研究

猪伪狂犬病是由伪狂犬病病毒引起的多种动物共患传染病,可引起仔猪大量发病死亡,母猪流产、死胎等繁殖障碍,育肥猪生长发育缓慢,经济损失惨重。为净化规模猪场的猪伪狂犬病,试验采用综合性的净化措施,除淘汰病猪及临床症状猪、加强饲养管理等技术措施外,采用猪伪狂犬病弱毒疫苗加强免疫,结合野毒抗体监测,成功的根除了伪狂犬的感染。     

应用聚合酶链反应检测伪狂犬病病毒DNA

选用标准的伪狂犬病病毒（ＰＲＶ）闽Ａ株，经ＢＨＫ２１细胞培养，提取ＰＲＶＤＮＡ作为摸板；合成１对２０－ｍｅｒ寡核苷酸作为引物；选择扩增序列由２６２个碱基对组成的位于编码多糖蛋白ｇｐ５０基因，用耐热的Ｔａｑ－ＤＮＡ聚合酶经３０个循环以后，扩增的产物直接用凝胶电泳检测，并用标准分子量确定。结果表明：以ＰＲＶＤＮＡ作为模板进行扩增，有扩增产物生成，以同科的疱疹病毒ＤＮＡ作为模板在相同的条件下进行ＰＣＲ扩增，无扩增产物生成，说明ＰＲＶＰＣＲ扩增是特异的。ＰＣＲ技术检测ＰＲＶＤＮＡ敏感度为２８．５ｐｇ．ＰＲＶＰＣＲ技术的建立，为伪狂犬病诊断和流行病学研究提供了更敏感、可靠的手段。     

猪伪狂犬病防控与净化

伪狂犬病（Aujeszky’s Disease）是由伪狂犬病毒（Pseudorabies virus PRV）引起的多种家畜和野生动物以发热,奇痒（猪除外）及脑脊髓炎为主要特征的一种重要传染病;猪是伪狂犬病毒的自然宿主,可造成种猪繁殖障碍、仔猪早期大量死亡、商品猪生长迟滞,给畜牧业带来巨大损失。本病曾在全世界流行,中国自1947首次报道以来,目前已扩大到全国各地,隐性感染、临床发病及混合感染日趋严重,每年因为该病造成巨大的经济损失。世界上主要的养猪国家都已开始实施猪伪狂犬病的控制和净化项目,并在一些国家取得成功;借鉴国外成功的经验,根据我国猪伪狂犬病的流行状况及研究进展,并提出我们国家伪狂犬病防控策略和净化方案。