IB肾型与支气管炎型二价油佐剂灭活疫苗的制备及其免疫效果评价

以ＩＢＶ陕西地方肾型毒株Ｘ株与支气管炎型代表株Ｍ４１株为抗原，研制成功ＩＢ二价油佐剂灭活疫苗，对其稳定性与安全性进行了观察。用该苗试验性免疫被肾型ＩＢＶ严重污染的某鸡场７日龄３批雏鸡２７０００多羽，２０天后抽检，其血清ＨＩ抗体全部阳性，其效价在５．０ｌｏｇ２以上，３个月后平均效价达９．２ｌｏｇ２，且抗体水平整齐。在观察的１４０天和５５天内，均未见ＩＢ病例发生，鸡群生长良好，其成活率分别达９６．３％（１４０日龄）、９３．７（１４０日龄）和９９．２％（５５日龄）     

肾型鸡传染性支气管炎病毒疫苗免疫机制初探：鸡抗肾型鸡传染性支…

采用肾型ＩＢＶ毒株抗原研制成渍佐剂灭活苗接种鸡群，结果表明，血清中抗体形成快，抗体水平较高，维持时间较长且较高的免疫保护力。为此我们进行本试验，经高度纯化的鸡抗肾型ＩＢＶＩｇＧ，采用免疫荧光试验，间接阻断Ｄｏｔ－ＥＬＩＳＡ和细胞中和试验对其特异和中和作用加以研究，结果表明，鸡抗肾型ＩＢＶ抗体成人主要是免疫球蛋白ＩｇＧ。本文阐明了肾型ＩＢＶ与支气管炎型ＩＢＶ疫苗免疫机制的不同，为肾型ＩＢＶ油佐灭活苗     

鸡腺胃型传染性支气管炎的诊断及病毒分离鉴定

天津市部分鸡场发生一种以病鸡极度消瘦、拉稀和死亡为主要特征的传染病,经鉴定确诊为鸡腺胃型传染性支气管炎（ＧＩＢ）,并分离出ＩＢＶ ＪＢ９７０２株,ＨＡ效价为２＾１２,ＥＩＤ５０为１０＾－６．８１／０．２ｍＬ。病毒干扰试验中,ＩＢＶ ＪＢ９７０２＋ＮＤＶ ＬｓＡｏｔａ接种鸡胚ＨＡ效价为２＾４～６,ＬａＳｏｔａ接种鸡胚ＨＡ效价为２＾１０～１１;用ＩＢＶ ＪＢ９７０２病毒液１：１０稀释后感染经ＩＢＶ Ｈ     

鸡传染性支气管炎病毒肾型毒株血凝特性的研究

本文对鸡传染性支气管炎病毒（ＩＢＶ）澳大利亚Ｔ株和分离的四株肾型毒株（ＢＪ＿（９３０１）、ＢＪ＿（９３０２）、ＴＪ＿（９３０１）、ＨＮ＿（９３０１）株）的血凝特性进行了系统研究。结果表明ＩＢＶ供试毒株经１～２％胰蛋白酶处理后，能凝集鸡和小鼠红细胞，同一毒株对两种红细胞的凝集价相近，且均能被ＩＢＶ澳大利亚Ｔ株血清所抑制。处理后的ＩＢＶ对鸡红细胞的血凝以缓冲液浓度０．０１～０．０５ＭｐＨ６．０～８．４为宜，对反应温度及稀释液种类无严格要求。ＩＢＶ的血凝活性能耐受３７℃２３天、５６℃１２小时、８０℃１．５小时，但在－３０℃、４℃和室温下保存２个月后，绝大部分丧失血凝活性。ＩＢＶ经０．２％甲醛、０．２％脱氧胆酸钠、２％硼氢化钠、０．０１Ｍ高碘酸钠３７℃灭活２４小时，仍能保持其血凝活性。从ＩＢＶ的血凝活性可被过量胰蛋白酶破坏和氯仿灭活，推断该血凝素可能是由脂质和蛋白质组成。     

传染性法氏囊病病毒VP2特异性抗体效价与保护力的相关性

用一种新方法测定传染性法氏囊病病毒的特异性抗体，并对抗体效价与保护力的相关性进行了研究，对不同抗体效价的鸡进行攻毒，用乳胶凝集抑制试验测定抗体效价，该法对检测ＩＢＤＶ ＶＰ２特异性抗体快速，简便，当免疫鸡的ＬＩ效价达１：２或更高时，几乎所有的鸡均可抵抗强毒ＩＢＤＶ的攻击，相反，带有母源抗体的鸡，即使其ＬＩ效价达１：４，用同样方法攻击，仍有半数的鸡易感。     

中国肾型IBV毒株的基因型及其S1基因的巢式PCR

用本研究建立的ＩＢＶＳ１基因的巢式ＰＣＲ方法鉴定了国内５个肾型传染性支气管炎病毒（ＩＢＶ）分离株。以此５个分离株及３个标准毒株的ＲＴ－ＰＣＲ产物（１７４９ｂｐ，含Ｓ１基因）为模板，１对内部引物经巢式ＰＣＲ都获得１７２９ｂｐ的产物，另１对内部引物的巢式ＰＣＲ有大小不同的产物（１６７８ｂｐ或０．５、０．６ｋｂ）。参照以前的ＲＦＬＰ分析结果，探讨了中国肾型ＩＢＶ毒株的基因型状况。     

分泌抗IBDV独特型抗体细胞株的建立

应用提取纯化的抗ＩＢＤＶ ＩｇＧ免疫Ｂａｌｂ／ｃ小鼠，其脾细胞与ＳＰ２／Ｏ细胞在ＰＥＧ作用下融合，应用ＥＬＩＳＡ法检测筛选，经有限稀释法克隆２次，获得了２株（２Ｂ６株、５Ｆ４株）分泌抗ＩＢＤＶ独特型抗体的杂交瘤细胞株，并能诱生Ｂａｌｂ／ｃ小鼠产生高效价的含抗ＩＢＤＶ独型抗体腹水。     

抗IBDV独特型抗体疫苗的制备与应用

应用提取纯化的抗ＩＢＤＶＩｇＧ免疫ＢＡＬＢ／ｃ小鼠，取其脾细胞与ＳＰ２／０细胞在ＰＥＧ作用下融合，应用ＥＬＩＳＡ法检测筛选，经有限稀释法克隆２次，获得２株（２Ｂ６株，５Ｆ４株）分泌抗ＩＢＤＶ独特型抗体的杂交瘤细胞株，其能诱生ＢＡＬＢ／ｃ小鼠产生高效价的含抗ＩＢＤＶ独特型抗体的腹水。用此独特型抗体分别与福氏完全佐剂、福氏不完全佐剂按１∶１比例乳化制备成抗ＩＢＤＶ独特型抗体疫苗，免疫接种ＳＰＦ鸡和普通京白公鸡，然后用ＩＢＤＶ野毒株经点眼和滴鼻方式攻毒，保护率分别为８／８、１４／１４，从而证实抗独特型抗体疫苗有潜在的研究和应用价值。     

单抗夹心ELISA法检测鸡传染性支气管炎病毒的研究

利用常规法建立分泌抗鸡传染性支气管炎病毒（ＩＢＶ）的单抗细胞株，选其中特异性强、稳定性好、分泌抗体效价高的两株单抗２（１）和２（４），用于建立单抗夹心ＥＬＩＳＡ法检测ＩＢＶ，该方法仅与ＩＢＶ，呈阳性反应，而与鸡新城疫病毒、鸡传染性法氏囊炎病毒、禽腺病毒、鸡传染性喉气管炎、鸡支原体等病原体均呈阴性反应。１４日龄ＳＰＦ鸡接种ＩＢＶ后，用本方法对其两周内的口腔棉拭样品进行跟踪检测，结果检出率为８０％。将     

传染性支气管炎病毒实验感染不同日龄鸡

用引起肾病／肾炎的鸡传染性支气管炎病毒（ＩＢＶ）Ｋａｇｏｓｈｉｍａ－３４株实验感染２、４和６周龄的鸡，根据临床症状、粪便中病毒的排泄和血清中和抗体效价，比较了每组鸡的易感程度。结果表明，虽然所有的鸡对ＩＢＶ均表现为易感，但在２周龄组观察到最严重的临床反应，其病毒排毒期也最长。感染后第４周检测到较高的抗体效价，在４和６周龄组的鸡中，高抗体效价至少可维持１６周；相反，２周龄组鸡在感染后８￣１２周才检到     

应用微量血凝抑制试验和气管环中和试验检测传染性支气管炎抗体的研究

应用家兔Ａ型魏氏梭菌培养液处理的鸡传染性支气管炎病毒（ＩＢＶ）作血凝抑制抗原，建立了血凝抑制（ＨＩ）试验方法，监测ＩＢ疫苗的免疫鸡血清ＨＩ效价，结果证明与气管环中和试验测得的中和抗体效价呈正相关，ｒ＝０．５２５，两组抗体效价ｔ检验差异极不显著（Ｐ＜０．０１）。用其监测卵黄抗体、灭活的血清抗体以及用高岭土处理的血清抗体，结果与相应未处理的血清抗体效价一致，用以对江苏、山东两省的７个未作ＩＢ疫苗免疫的鸡场２０个鸡群进行流行病学调查，结果有１８个鸡群ＴＢ阳性，阳性率达８３％。     

鸡肾型传染性支气管炎抗体研究

将鸡肾型ＩＢＶ ＡＳ分离株的鸡胚尿囊液毒接种２８日龄ＳＰＦ鸡，并采用该毒株制备油乳剂活苗进行二免和三免，采集不同免疫期的鸡血样，用间接酶联免疫吸附试验检测了血清ＩＢＶ抗体产生的动态变化。结果表明，接种８ｄ后，血清抗水平显著升高，在１２ｄ时基本达到峰值，二免、三免两周后鸡群血清抗体水平首免１２ｄ的血清抗体水平平均无明显升高。三免后的血清抗体血凝抑制效价达到６－９１ｏｇ２，暗示了该免疫期的鸡血清可用于     

鹅抗ND、IBD双联高免血清的研制与应用

用ＩＢＤ和ＮＤ油乳剂免疫原，经３次免疫鹅后，可获得ＩＢＤ琼扩（ＡＧＰ）抗体效价为１：６４，ＮＤ血抑制（ＨＩ）抗体效价为１：２０４８的双联高免鹅血清．鹅在第３次免疫后１５天，血清中抗体效价开始达到高峰．并至少可维持１０天以上。经临床应用表明，抗ＩＢＤ－ＮＤ双联高免鹅血清对ＩＢＤ单纯性感染病鸡群的治愈率平均为９５．１％，对ＩＢＤ、ＮＤ混合感染病鸡群的治愈率平均为８８．２％。     

羔羊腺病毒感染的血清学调查

连续两年在衣阿华州及其附近各州进行轿清学调查，以了解绵羊感染腺病毒１－４型和牛腺病毒２、３和７型的感染率和血清转化率，对１－３月龄羔羊采血分离血清，２月后再次采血样，应用微量血清中和试验检测抗休。第一次采集的血清样品，除ＢＡＶ－３外，其他型抗体阳性率（效价≥２）都很高，一些羔羊的抗体价增加了４倍，感染率和血清转化率分别为，ＯＡＶ－１：９４和７．２％；ＯＡＶ－２：９８．２和１５．１：ＯＡＶ－３：８５     

鸡传染性支气管炎肾型弱毒株J9的免疫原性试验

以不同剂量（１０＾３．８￣１０＾４．９ＴＯＣＩＤ５０／只）的ＩＢ肾型弱毒株９免疫接种１５￣７０日龄ＳＰＦ鸡,然后用部分国内分离的ＩＢＶ肾型强毒株ＨＶ、ＮＢ９０、Ｌ－１、ＪＴ和国外肾型标准强毒株Ｔ攻击。三次试验初步表明,Ｊ９株具有对 强毒株攻击的不同程度的免疫保护作用。     

抗鸡传染性法氏囊病病毒单克隆抗体中和株的建立

将纯化的鸡传染性法氏囊病病毒（ＩＢＤＶ）组织毒免疫的ＢＡＬＢ／ｃ鼠脾细胞与ＳＰ２／０骨髓瘤细胞融合，用ＥＬＩＳＡ，病毒中和试验检测分泌抗体，获得了６株稳定分泌抗ＩＢＤＶ单隆抗体的杂交瘤细胞，命名为ＮＩＢ－１，ＮＩＢ－２，ＮＩＢ－３，ＮＩＢ－４，ＮＩＢ－５，ＮＩＢ－６；６株ＭＣＡｂ均具ＥＬＩＳＡ特性和免疫沉淀特性，亚类鉴定表明，前４株属于ＩｇＧ２ａ，后２株属于ＩｇＧ１。杂交瘤细胞冻存６个月后复苏，均     

传染性法氏囊病病毒变异株主要免疫原基因cDNA的克隆及鉴定

采用反转录－聚合酶链反应（ＲＴ－ＰＣＲ），从１株传染性法氏囊病病毒（ＩＢＤＶ）本地分离株ＧＺ９０２中扩增到编码ＩＢＤＶ主要免疫蛋白ＶＰ２的ｃＤＮＡ片断，大小约为１３５０ｂｐ。将该ｃＤＮＡ片断插入ｐＢｓＫ质粒中，用重组质粒转化大肠杆菌ＸＬ１－Ｂｌｕｅ，成功获得重组质粒转化菌。对重组质粒ＤＮＡ进行酶切鉴定，证明插入的ＤＮＡ片断与ＰＣＲ扩增的ＤＮＡ片段大小相符。对ＧＺ９０２高可变区进行了序列分析。其核苷酸序列与３株ＩＢ－ＤＶ变异株Ａ、ＧＬＳ、Ｅ的同源性分别达到９８．９％，９６．２％和９５．５％。而与其他Ⅰ型毒株的同源性较低。比较从ＤＮＡ序列推导出的氨基酸序列，发现ＧＺ９０２高可变区的两个亲水区均发生了一个氨基酸的变化，而在２４９和２５４位上的氨基酸分别为Ｋ和Ｓ，与以上３个变异株相同，但与所有标准Ⅰ型毒株不同。这两个氨基酸可以作为ＩＢＤＶ变异株的标志。     

禽传染性支气管炎病毒免疫原基因组的RT—PCR研究

本文报道了用聚合酶链反应获取ＩＢＶ Ｍ４１株和广东肾变栋Ｄ４１免疫基因的研究情况，所用引物为ＩＢＶ Ｂｅａｕｄｅｔｔｅ株Ｓ１基因两侧的对应序列，跨幅为１．７ｋｂ；ＤＮＡ模板为ＩＢＶＭ４１和Ｄ４１株经病毒ＲＮＡ提取后反转录而得；２株病毒所获的ＰＣＲ产物与预期一致。     

法氏囊病毒感染对肉鸡内分泌机能的影响

用鸡传染性法氏囊病毒（ＩＢＤＶ）弱毒疫苗免疫和强毒感染艾维菌鸡，采用放射免疫分析法（ＲＩＡ）测定血浆甲状腺素（Ｔ３，Ｔ４）、促肾上腺皮质素（ＡＣＴＨ）和皮质酮（Ｆ）来研究ＩＢＤＶ感染对肉鸡内分泌机能的影响。结果表明：ＩＢＤＶ弱毒疫苗免疫使肉鸡产生高效价抗体，血浆ＡＣＴＨ含量升高；ＩＢＤＭ强毒感染导致肉鸡血浆Ｔ２、Ｆ急剧升高，法氏囊肿大，血清中也出现ＩＢＤＶ抗体，但效价显著低下；而ＩＢＤＶ强毒感染曾     

鸭自然感染传染性法氏囊病病毒的调查

用传染性法氏囊病病毒（ＩＢＤＶ）单克隆抗体夹心阻断ＥＬＩＳＡ试验对采处三种不同鸭群的３８０份血清进行了ＩＢＤＶ抗体检测，抗体阳性率分别为：农村散鸭１００％，农场圈养鸭２９．９％，市场贩运鸭９５．４％，总阳性率为９５．５％，抗体效价为１＾２～１０＾４，这一结果不仅表明在我国ＩＢＤＶ传染已到了非常高的程度，而且揭示了鸭在ＩＢＤ病原生态和传播中可能起重要作用。