马铃薯Y病毒复制酶基因的转基因烟草对PVY的抗性

将农杆菌LBA4404/pAL4404、pBin438双元载体上的NIb基因正义序列、反义序列、5''-缺失序列及新霉素磷酸转移酶基因(NPTⅡ)转入烟草品种NC89的染色体,获得抗卡那霉素的转化再生烟草植株.经抗性筛选、PCR检测、无性扩繁和大量重复抗病鉴定,结果表明,转化烟草植株DNA中整合了外源目的基因;NIb基因正义序列、5''-缺失序列转化再生植株中,均出现抗10μg/mlPVY侵染的植株;NIb基因反义序列转化再生植株仅部分抗5μg/mlPVY侵染.ELISA分析认为抗性植株无病毒累积.初步筛选出对PVY侵染具有较高抗性的转基因烟草植株.     

云芝葡聚糖对烟草马铃薯Y病毒的抗性研究

【目的】研究云芝葡聚糖对烟草马铃薯Y病毒(PVY)的抑制作用,为新型杀菌剂云芝葡聚糖水剂的开发应用提供依据。【方法】以PVY枯斑寄主苋色藜(Chenopodium amaranticolor)、系统寄主心叶烟(Nicotiana glutinosa)为材料,采用枯斑法、叶圆片法及室内盆栽试验,测定云芝葡聚糖的抗PVY活性及其诱导抗病性,同时测定其对烟草防御酶POD、PAL活性的影响。【结果】云芝葡聚糖对PVY具有很强的预防作用和诱导抗性,700μg/mL云芝葡聚糖的预防效果达73.98%,诱导抗性达59.84%;对PVY有一定的钝化和抑制增殖作用,其中700μg/mL云芝葡聚糖对PVY的钝化效果为28.79%,对PVY的增殖抑制率达40.25%;云芝葡聚糖处理能提高烟草叶片POD和PAL活性;室内盆栽试验结果表明,云芝葡聚糖对PVY寄主表现出很强的保护活性,保护效果优于治疗效果,接种病毒14d后1.1%云芝葡聚糖水剂300倍液的保护、治疗效果分别为73.33%和38.46%。【结论】云芝葡聚糖是一种很强的免疫增强剂,对PVY的抑制作用显著,提前施用对寄主可起到很好的保护作用。     

NtMAP70基因在烟草抗马铃薯Y病毒过程中的作用

为了探明微管结合蛋白70(MAP70)在抗马铃薯Y病毒(PVY)中的作用机制,克隆了烟草Nt MAP70基因的全长,并进行了生物信息学分析.利用实时荧光定量PCR研究了该基因在烟草不同时期和不同部位中的表达水平,结果表明,NtMAP70在烟草的各个生长期均有表达,且在根中的表达量最高.构建了基于双生病毒卫星诱导的烟草Nt MAP70的沉默载体,以中国番茄黄化曲叶病毒(TYLCCNV)为辅助病毒在烟草中沉默了该基因.与对照相比,在Nt MAP70基因沉默的烟草中PVY侵染速率明显减缓,病毒含量显著降低.     

烟草对蚀纹病毒和马铃薯Y病毒的抗病性鉴定

【目的】对21份我国生产中大面积推广使用的烟草品种和抗源材料进行烟草蚀纹病毒（TEV）和马铃薯Y病毒（PVY）的抗病性鉴定,为烟草抗病品种的利用与品种合理布局,以及烟草抗病毒病育种的亲本选择提供依据。【方法】以21份烟草品种为材料,于2009-2011年采用大田人工接种鉴定的方法,对21分烟草种质资源进行了TEV和PVY的抗病性鉴定。【结果】在供试种质中,对TEV表现抗病的有双抗70、云烟97、中烟103、秦烟96、辽烟17、云烟203、秦烟98、云烟85、G28共9份材料,表现中抗的有中烟90、龙江237、NC89、G80共4份材料,表现中感的有云烟87、RG11、净叶黄共3份材料,表现感病的有K326、红花大金元、CV87、Coker176、金星6007共5份材料。对PVY表现抗病的材料有2份,分别为辽烟17和金星6007,表现中抗的材料有秦烟98、秦烟96和双抗70共3份材料,表现中感的有NC89、云烟87、净叶黄、G28、云烟85、红花大金元、G80、K326共8份材料,表现感病的有Coker176、龙江237、云烟97、RG11、中烟90、中烟103、CV87、云烟203共8份材料。其中兼抗TEV和PVY 2种病毒病的材料有4份,分别为双抗70、秦烟98、秦烟96和辽烟17;均表现感病的有7份材料,包括Coker176、CV87、红花大金元、K326、净叶黄、RG11和云烟87。TEV和PVY侵染对抗病性较强烟草品种生长发育的影响较小,而对感病品种的影响较大。【结论】不同烟草品种对TEV和PVY的抗病性存在较大差异,抗病性不同的烟草品种在病毒危害以后,病毒对烟叶的产量和叶片生长发育的影响也不同。     

马铃薯Y病毒属病毒外壳蛋白功能

Potyvirus属于马铃薯Y病毒科(Potyviridae),是最大的植物病毒属,给农业生产造成严重的经济损失。外壳蛋白(Coat Protein简称CP)是Potyvirus属病毒中相对较稳定、功能较复杂的编码蛋白,涉及到病毒传播、运动、抗性及症状表达。本文详细分析了外壳蛋白的功能,包括参与病毒的蚜传、参与病毒的长距离运动和胞间运动、参与植物病毒病防治和参与病毒症状表达。对病毒蛋白功能的研究为该属病毒的研究发展提供重要的理论基础,对Potyvirus侵染机制及抗病机理研究具有指导价值。     

烟草马铃薯Y病毒研究进展

综述了马铃薯Y病毒基因组编码的HC-Pro（蚜传辅助因子）和CP（衣壳蛋白）的功能。     

烟草马铃薯Y病毒外壳蛋白基因全长ORF的克隆与原核表达

采集河南自然发病的烟草.通过摩擦接种至实验室烟草后直接提取总RNA,利用反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)扩增获得了烟草马铃薯Y病毒外壳蛋白(PVY-HN CP)基因;经Nde Ⅰ和Sal Ⅰ双酶切处理的PCR产物,连接克隆至大肠杆菌表达栽体pET28a( ),构建了重组质粒pPVYCP,所获得的重组质粒经过酶切、测序鉴定,证实正确插入了PVY-HN CP基因的全长ORF.序列分析表明,PVY-HN CP基因由804个核苷酸组成,编码267个氨基酸残基;重组的pPVYCP表达载体转化大肠杆茵BL21(DE3)pLysS,经IPTG诱导.SDS-PAGE电泳显示分子量为32 kDa的CP蛋白得到了诱导表达.     

CP基因3''''端短片段介导的对马铃薯Y病毒的抗性

目的探明马铃薯Y病毒脉坏死株系(PVYN)CP基因3′端序列短片段的不同结构转基因诱导转基因植物产生RNA介导抗性的有效性。方法以PVYN的CP基因cDNA3′端202bp片段构建非翻译的正向重复和反向重复结构的植物表达载体转化烟草。结果攻毒试验表明前者没有一例转基因植株表现为抗病,而转化反向重复结构的转基因植株82.8%表现近似免疫的高度抗病型,Southern印迹杂交证明目的基因已整合到烟草基因组,Northern印迹杂交结果显示反向重复结构转基因植物的抗病性与RNA的表达量呈现负相关。结论抗病性是RNA介导的病毒抗性。3′端短片段诱导产生的转基因抗病株比例比5′端短片段诱导产生的高。     

烟草感染马铃薯Y病毒(PVY)后光合作用的变化规律

以马铃薯Y病毒（PVY）为毒源,以烟草NC89为材料,采取光合指标和超微结构相结合的研究方法,对感染PVY烟草的叶绿素含量、光合速率等生理指标以及叶绿体结构变化的规律进行了研究。结果表明：在光照、温度、湿度、CO₂浓度和土壤水分都相对恒定的条件下,烟草NC89感染马铃薯Y病毒（PVY）后,烟草的叶绿素含量、光合速率、气孔导度、蒸腾速率都出现了不同程度的降低,而细胞间CO₂浓度有所升高,Hill反应的活性却明显下降,叶绿体超微结构受到明显的破坏。     

烟草马铃薯Y病毒完整基因组的统计特征

提取4个不同来源的烟草马铃薯Y病毒完整基因组的统计特征,并对它们进行聚类分析。在烟草马铃薯Y病毒完整基因组的碱基序列上,用每个碱基及其随后两个碱基所构成的三碱基组,排列成一个新的序列S,计算所有64种不同三碱基组在S上出现的概率,得到一个64维向量L;比较各个基因组的L向量,得到4个三碱基组(CAA、GAT、GTA、GAC),它们的概率有明显的差异。这4个三碱基组的出现概率与烟草马铃薯Y病毒基因组的遗传变异有着重要关联;4个不同来源的烟草马铃薯Y病毒完整基因组,按其遗传变异结果,形成两个大类。     

昭通烟草脉斑病发病规律的研究

连续2年对昭通市烟草脉斑病发病规律进行研究。结果表明,该病在昭通的初发期为6月中下旬,7月下旬至8月中下旬进入盛发期。初发期和盛发期均与蚜虫的迁飞高峰期密切相关,同时与气候、移栽期、施肥、蚜虫等因素相关。延迟第1次烟草PVY阳性率高点的时间,降低PVY阳性率是防治烟草脉斑病的关键措施之一。     

烟草马铃薯Y病毒病的发生与综合防治

近年来,烟草马铃薯Y病毒病已成为湖南烟区危害最为严重的病害之一。从症状表现、侵染循环和发病规律3个方面对其进行了概括,并提出综合防治措施。     

烟草马铃薯Y病毒病(PVY)的研究现状与防治对策

评述了烟草马铃薯Y病毒病(PVY)的国内外研究现状和发生情况。同时对我国及安徽省近年来该病的流行原因进行了分析，并提出了相应的防治对策。     

烟草抗马铃薯Y病毒(PVY)病突变体筛选与鉴定

[目的]筛选与鉴定烟草抗PVY病突变体,为寻找抗PVY的基因奠定基础.[方法]通过苗期对烟草突变材料进行PVY接种鉴定,肉眼对材料进行初步筛选,对筛选到的抗性材料进一步荧光定量鉴定,对筛选鉴定的抗性材料进行苗期鉴定及田间抗性鉴定.[结果]2011年筛选获得2个高抗PVY的突变体MZE2-15和MZE2-16,以及3个耐PVY突变体MZE2-70、MZE2-207及MZE2-228;2012年进一步筛选鉴定,突变体材料MZE2-407和MZE2-428感PVY,MZE2-16和2份MZE2-15突变体材料抗PVY.[结论]试验结果为控制烟草PVY病的危害提供了理论依据.     

烤烟不同品种对PVY耐病性调查

调查结果显示 :NC89、NC82、CF965、CF978等品种对PVY的耐病性相对较高 ,K3 46、中烟 99、龙江 91、云烟 87等品种对PVY的耐病性相对较低 ;PVY田间发病率、病指及损失估计指标显著正相关     

不同种类地膜覆盖对马铃薯Y病毒病的影响

[目的]探索适合昭通市昭阳区的有效防治马铃薯Y病毒(PVY)的农艺措施,降低PVY对烤烟生产造成的损失。[方法]测定不同种类地膜覆盖烟地的PVY发病率和病情指数,研究不同种类地膜覆盖对马铃薯Y病毒病的影响。[结果]在烤烟生长的旺长期,3种不同种类地膜覆盖对马铃薯Y病毒病的防治效果来看,黑膜覆盖发病最轻,白膜覆盖发病最重;3种不同种类地膜覆盖的平均病株率为黑膜覆盖(2.55)银灰色膜覆盖(4.39)白膜覆盖(6.78);3种不同种类地膜覆盖的平均病情指数为黑膜覆盖(1.361)银灰色膜覆盖(2.819)白膜覆盖(3.889);黑膜覆盖的发病率和病情指数均最低,黑膜覆盖与银灰色膜覆盖、白膜覆盖发病率和病情指数差异均极显著。[结论]黑色地膜覆盖栽培的烤烟在烤烟生长的主要关键时期发病较轻。这可能是因为黑色地膜反光驱避蚜虫,减少带病毒蚜虫对烟株的接触机会,从而减轻PVY等的发生,黑色地膜比银灰色或白色地膜效果更好。     

EffectS Of Synergism Between PVY and PVX on Vi rus Titer and Cell Ultrastructure in Tobacco Plants

The viruses titer and the ultrastructure of infected cells in tobacco host (Nicotiana tabacum cv.Samsun), which doubly infected with potato virus Y necrosis strain (PVYN) and potato virus X (PVX), were studied under greenhouse conditions. The results indicated that PVYN and PVX interacted synergistically, and tobacco plants which doubly infected with PVX and PVYN could greatly increase symptom severity as compared with that induced by the single virus. As determined by triple antibody sandwich enzyme-linked immunosorbent assay (TAS-ELISA), the titer of PVX in the tobacco leaves infected with both PVYN and PVX was up to 9.10 times higher than the plants infected with PVX only. No significant differences in PVYN titer were detected between singly and doubly infected plants. The enhancement of PVX titer in doubly infected plants was evident in greenhouse and was independent of the virus strains, tested seasons, intervals between PVYN and PVX inoculation. When sections of doubly infected leaves were examined with an electron microscope, it could be frequently found that cells contained pinwheels and large masses of PVX-like particles, pinwheels and laminate inclusions, or all three structures, most of them were swollen, and their chloroplast and other organella were destructed heavily. This suggested that doubly infected cells were involved in the enhancement phenomenon,which seemed to be the result of an increase in the amount of PVX synthesized in them.     

超敏蛋白诱导水稻对立枯病的抗性

[目的]明确超敏蛋白对水稻立枯病的诱抗作用。[方法]以龙粳37水稻品种为试验材料,研究不同浓度超敏蛋白浸种处理对水稻生长发育的影响,测定超敏蛋白处理后水稻苯丙氨酸解氨酶(PAL)、过氧化物酶(POD)和多酚氧化酶(PPO)含量变化。[结果]不同浓度超敏蛋白对水稻生长发育均有促进作用,且与对照相比不同浓度超敏蛋白处理水稻均不同程度地诱导了水稻防御酶PAL、POD和PPO活性,以稀释20倍的超敏蛋白诱导能力最强。[结论]研究结果为超敏蛋白抗病机理研究提供了理论依据。     

Harpin蛋白研究及其应用

对Harpin蛋白的种类、结构特点和功能进行了概述，并从生产、应用和作用机理等方面介绍了以Harpin蛋白为活性成分的生物农药Messemger^TM。     

PVY/PVX协生作用对病毒浓度及寄主细胞超微结构的影响

 以烟草品种三生烟 (N .tabacumcv .Samsun)为测试寄主 ,采用酶联免疫检测实验 (TAS ELISA)和电镜观察的方法 ,在温室条件下研究了马铃薯Y病毒 (PVY)和马铃薯X病毒 (PVX)复合侵染所引起的寄主症状和病毒浓度变化的特点、不同条件下复合侵染时病毒浓度的变化规律以及复合侵染对寄主细胞超微结构的影响。结果表明 ,PVY/PVX在烟草植株内发生了协生作用 ,PVY是协生病毒 ,PVX是被协生病毒。与单独侵染相比 ,PVY和PVX的复合侵染使烟草植株症状明显加重。PVY在复合侵染植株中的浓度与在单独侵染植株中相比 ,没有明显的变化 ,而PVX在复合侵染植株中的浓度明显高于在单独侵染植株中的浓度。这种现象不受PVY株系、处理季节和接种次序的影响。但是 ,不同PVY株系、不同处理季节或不同接种次序对PVY/PVX协生作用中PVX浓度的影响程度存在着一定的差异。电镜观察表明 ,与不接种病毒或单独侵染的植株相比 ,受复合侵染的烟草叶片细胞超微结构发生了明显的病理学变化。细胞肿胀 ,叶绿体、线粒体等细胞器受到严重损伤 ,细胞质内有风轮状、薄片状的内含体 ,由于在细胞质中常常有大量纤维状的PVX病毒粒子聚集体存在 ,这意味着PVX浓度的增加可能是在复合侵染的细胞中病毒大量繁殖的结果。